组织细胞总RNA提取步骤及方法

组织细胞总RNA提取步骤及方法
细胞总RNA提取是一种常用的实验技术，用于分离和提取细胞内的总RNA。

以下是一种常用的细胞总RNA提取方法的步骤：
1.收集细胞样品：根据实验需要，收集适量的细胞样品。

可以选择培
养细胞、悬浮细胞或组织细胞等。

2. 细胞溶解：将细胞样品转移到离心管中，并使用适当的缓冲液
（如TRIzol）进行细胞溶解。

缓冲液中的离子和表面活性剂能够破坏细
胞膜，使RNA释放到溶液中。

3.加入氯仿：向细胞溶解液中加入等体积的氯仿，并轻轻倒置离心管
混匀。

氯仿会与缓冲液中的酚类结合，形成有机相和水相。

4.离心分离：将混合液在高速离心下离心10-15分钟，使其分成有机
相（上层）、界面层（中间层）和水相（下层）。

RNA主要分布在界面层
和水相之间。

5.收集上清液：使用滴管、移液器等工具小心收集上层的有机相液体，并转移到新的离心管中。

这一步的目的是尽可能减少界面层和下层的干扰物。

6. 沉淀RNA：将等体积的异丙醇（isopropanol）加入上清液中，并
轻轻倒置离心管混匀。

异丙醇能够沉淀RNA，将其从溶液中去除。

7.离心分离：将混合液在高速离心下离心10-15分钟，使RNA沉淀在
离心管底部形成一个白色沉淀。

8.去除上清液：小心将上清液倒掉，避免损失RNA沉淀。

9.RNA洗涤：使用70%乙醇洗涤RNA沉淀，将沉淀中的杂质去除。

10. 重新溶解：将洗涤后的RNA沉淀用RNase-free水或缓冲液中重新溶解，以便后续实验使用。

注意要避免酶的污染。

以上是一种常见的细胞总RNA提取方法的步骤。

这个方法简单、操作方便，并且能够高效地提取细胞内的总RNA。

根据实验需要，也可以根据具体步骤来进行微调和改进。