郭小洁紫外可见分光光度法在药品检验中的应用
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对于具有两个以上最大吸收的药物可以进一步简化操作无需费时作吸收光谱曲线只要测出各最大吸收波长处的吸收度求出这些吸收度的比值测出它们相对位置的比值即12278361应为170188应为31534526维生素b2水溶液的吸收光谱27若一种化合物对紫外光和可见光区的某一波段呈光学透明即不吸收或几乎不吸收而不纯杂质有吸收时则该物质的生产精制应当进行到规定波长处的吸收系数降到最低时为止
• 除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长 2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器 波长的准确性。
• 应以吸光度最大的波长作为测定波长。
• 一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0.7之间的误 差较小。
• 仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否 则测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择，应以减小狭 缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。
3.纯度检查：
若一种化合物对紫外光和可见光区的某一 波段呈光学透明（即不吸收或几乎不吸收）， 而不纯杂质有吸收时，则该物质的生产精制 应当进行到规定波长处的吸收系数降到最低 时为止。有些药物就以此作为杂质限度检查 的依据。此外，有些药物的杂质是通过比色 法与杂质对照品比较进行控制的。
27
• 检查肾上腺素中的酮体：取肾上腺素，加 0.1mol/L盐酸溶液，制成每1ml中含2mg的 溶液，照分光光度法，在310nm的波长处测 定，吸光度不得过0.05。
10
•红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要 数百微克（g）的供试品进行测定，此区域 内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动能 级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，特别 是在7-15m（称为“指纹区”），吸收峰很 多，而且尖锐。除光学异构体外，不会遇到两 种不同的化学物质完全相同的红外吸收光谱， 故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。
盐酸土霉素在酸性溶液（pH2.0）中，最大吸 收为353nm，在上述所述波长和浓度条件下，盐 酸土霉素几乎无吸收。
34
• 华法林钠：溶液的澄清度与颜色检查规定，本 品 2 0 mg/ml 丙 酮 溶 液 ， 用 4 cm 吸 收 池 ， 在 460nm的吸光度不得过0.12。
35
用比色法检查： • 醋酸氟轻松和氟脲嘧啶与茜素氟蓝反应检查氟； • 胰岛素制剂与锌试剂反应检查锌； • 醋酸地塞米松等与二氨基萘反应检查硒。
28
29
• 苄氟噻嗪和氢氯噻嗪等药物中，芳香第一胺的 检查，均采用比色法。将样品用亚硝酸重氮化 后与二盐酸萘乙二胺生成偶氮化合物，在 518nm波长处测定吸光度，应不得超过规定 限度。
30
• 枸橼酸哌嗪和磷酸哌嗪检查项下，根据第一胺 和氨与亚硝基铁氰化钠在丙酮的存在下的碱性 溶液中呈黄色至红色的反应，采用比色法，测 定600nm与520nm波长处的吸光度比值，以此 来控制药品中杂质伯胺和氨的含量。
由上式可以看出：光子能量与频率成正比，与 波长成反比 • 总能量E=E平移+E振动+E转动+E电子
8
• 跃迁：分子被吸收的光辐射激发后能量由低能 级跳到高能级的过程。 按照光吸收过程中能量的过程分为: 转动能跃迁 振动能跃迁 电子跃迁
远红外吸收光谱—转动光谱 红外吸收光谱—振动光谱 紫外-可见吸收光谱—电子光谱
（3）杂散光的检查： 按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，
置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定 透光率，应符合表中的规定。
试剂
碘化钠 亚硝酸钠
浓度% （g/ml）
1.00
5.00Biblioteka 波长 （nm）220
340
透光率 （%）
<0.8 <0.8
19
3.紫外分光光度法对溶剂的要求：
用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测 定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应满足以下 要求：
波长处有最大吸收，在262nm波长处有最小吸收 其顺式异构体及其水解产物吡啶-2-甲醛-N甲碘物 同条件下在294nm波长处均无吸收，这些杂质在 262nm处有吸收，如有杂质存在会导致碘解磷定 溶液的A294/A262比值降低。
33
• 盐酸土霉素：杂质吸收度检查规定，本品 2mg/ml的盐酸甲醇溶液在430nm波长处的吸光 度不得过0.5。本品10mg/ml的盐酸甲醇溶液在 490nm波长处的吸光度不得过0.2。
3
二.基本概念：
•光的色散：阳光通过棱镜后会射出按红橙 黄绿蓝靛紫次序排列的七色光，这 种将阳光分解为各种单色光的现象，即为光的 色散。 •光谱：经过色散后的单色光依固定的次序排 列而成的景象，称为光谱。
4
• 可见光：经过色散以后的各种颜色的单色 光通常叫做可见光。
波长范围:400-760nm为可见光区
玻璃吸收池仅适用于320nm以上波长的测定。 水晶或熔融石英吸收池可用于200nm以上波长的测定。 最常用的是光路长度为1cm的吸收池。 •检测器： 紫外-可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、 光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。
16
2.仪器的校正和检定
（1）波长的校正：由于温度变化对机械部分的 影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定 期对所用仪器进行全面校正检定外，还应于测定 前校正测定波长。
波长
吸光度要求
220nm-240nm 241nm-250nm 251nm-300nm 300nm以上
不得超过0.40 不得超过0.20 不得超过0.10 不得超过0.05
20
4.紫外分光光度法测定法：
• 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶 剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸 收峰波长2nm以内测试几个点的吸光度，以核对供试 品的吸收峰波长是否准确。
• 由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试
品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。
21
五.紫外-可见分光光度法在药品 检验中的应用
药典和药品标准中应用紫外-可见分光光度 法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、纯 度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测 定等等。
22
1.吸收系数：
药品的吸收系数是药品的理化特性常数，可 作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。对 紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进行精 制时，应进行到产品在其特定波长测定吸收系 数达到一个稳定的最大值时为止，因此吸收系 数同其它物理常数一样，也可作为判断药品纯 度的依据。
E电子跃迁E分子振动跃迁E分子转动跃迁
9
三.分光光度法的基本原理
•在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高， 一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物质 即可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物 质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁 所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变 化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不 如红外光区，故紫外-可见光区主要用于定量 分析以及作为物理常数的测定。
•紫外光：与可见光光谱的紫色一端相接的 为紫外光，肉眼不能直接感知。
波长范围:200-400nm为紫外光区
5
• 吸收光谱：发射连续光谱的光源（如氘灯和钨 丝灯）发出的光通过透明物质（固体、液体或 气体）后，一些波长的单色光成分被该物质选 择吸收，在原来的连续光谱上出现若干条暗线 或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。
钬 玻 璃 在 2 7 9 . 4 nm、287.5nm、 333.7nm、
360.9nm、418.5nm、460.0nm、 484.5nm、
536.2nm 与 6 3 7 . 5 nm 的 波 长 处 有 尖 锐 的 17
吸收
（2）吸光度的准确度：
取在120C干燥至恒重的基准重铬酸钾约
60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶 解
紫外-可见分光光度法在 药品检验中的应用
北京市药品检验所化学室 郭小洁
1
一、概述 二、基本概念 三、分光光度法的基本原理 四、紫外分光光度计 五、紫外－可见分光光度法在药检中应用 六、结语
2
一.概述：
分光光度法是通过测定物质在某些特定波长处 或一定范围内的吸光度或发光强度，是对物质进 行定性和定量的分析方法。紫外-可见分光光度法 具有操作简便快速、专属性和灵敏度高等优点。 因此在药品的分析检验中被广泛采用。在各国药 典中药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等 各个项目中都能见到紫外-可见分光光度法的应用 实例。
并稀释至1000ml，在规定的波长处测定吸光度
并波计长算其吸收235系数。 257
（nm）
（最小）
（最大）
313 （最小）
350 （最大）
吸收系数 （E1%1cm）
124.5
144.0
48.6
106.6
许可范围 123.0-126.0 142.8146.2
47.0-50.3 105.5108.5
18
• 波长（符号为）：是指由一个波上的任意一 点到相邻的下一个波上相对应点之间的直线距 离。单位为：nm。
6
A D
B
C
E
7
•光子能量与其传播频率和波长的关系： E=h=h*C/
其中:E—光子跃迁能量 h—普郎克常数（6.62619610-34J） —频率,每秒发出波的数目(单位：HZ) C—光速（2.9979251010 cm/s） 1/—波数
36
4.含量测定：
药典中含量测定方法可分为： （1）对照品比较法 （2）吸收系数法 （3）计算分光光度法 （4）比色法
37
（1）对照品比较法
应用范围： • 单一成分药剂的测定。 • 混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的
测定波长没有或几乎没有吸收
38
测定要求 • 分别配制供试品溶液和对照品溶液 • 对照品溶液所含对照品的量应为供试品溶液中
24
可。
• 维 生 素 B12 的 鉴 别 规 定 每 1 ml 中 含 维 生 素 B1225g 的水溶液，照分光光度法测定，在 278、361与550nm的波长处有最大吸收。 A361nm/A278nm应为1.70-1.88。 A361nm/550nm应为3.15-3.45。
25
维生素B2水溶液的吸收光谱 26
31
• 葡萄糖注射液和葡萄糖氯化钠注射液中的杂质 5-羟甲基糠醛，在284nm测定吸光度，控制杂 质的含量。如药典规定，1%葡萄糖溶液的吸 光度不得大于0.32，按5-羟甲基糠醛的E1%1cm 为 1308计算，含5-羟甲基糠醛应在0.00024%以 下。
32
• 碘解磷定注射液：分解产物的检查规定，用 0.1mol/L盐酸溶液将样品稀释制成每1ml中含 0.01mg的溶液，在294与262nm的波长处分别 测定吸光度，A294/A262应不小于3.1。 碘解磷定的0.1mol/L盐酸溶液在225和294nm
《中国药典》2005年版中收载的甲苯磺丁脲 和地塞米松等品种，均在性状项下测定其吸收 系数。
23
2.鉴别：
药物对光辐射的吸收特点（即其吸收光谱） 可与其它化学的或物理的方法配合作为鉴别的 一种手段，即绘制出药物的吸收光谱曲线与标 准品的吸收光谱互相核对。实际上在化合物的 理化常数资料及药品标准中，一般只列出各化 合物最大吸收（有时也列出最小吸收）的波长 位置。对于具有两个以上最大吸收的药物可以 进一步简化操作，无需费时作吸收光谱曲线， 只要测出各最大吸收波长处的吸收度，求出这 些吸收度的比值，测出它们相对位置的比值即
被测组分标示量的10%以内。 • 所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保
持一致。
39
• 计算公式： Cs=Cr*As/Ar
Cs：供试品溶液的浓度 As：供试品溶液的吸光度 Cr：对照品溶液的浓度 Ar：对照品溶液的吸光度
40
（2）.吸收系数法：
11
•透光率（T）：单色光通过一物质的溶液时， 透过光的强度（I）与入射光的强度（I0）之比。 即：T=I / I0。 •吸 光 度 （ A）： 透 光 率 的 负 对 数 值 . 即:A=log1/T= -logT
12
•郎伯定律（Lambert’s Law）:当溶液浓度不变 时，吸光度与溶液的液层厚度成正比。
•比耳定律（Beer’s Law）:当溶液液层厚度不 变时，吸光度与溶液的浓度成正比。
•比耳-郎伯定律（Beer -Lambert’s Law）： 吸光度（A）与溶液的浓度（C）和光路长（L） 是成正比例的。即：A=ECL
13
•比耳-郎伯定律适用范围： 1.溶液的浓度不能过高或过低，使测定 结果的相对误差最小的最佳透射率为 T=37%左右。 2.所用溶剂不得与测定物质有分子间缔 合，生成复合物、异构化或出现酸碱平 衡。
14
四.紫外-可见分光光度计
1.基本构造：
稳压电源
记录装置
检
光源
波长选择装置
样品池
测
器
15
•光源： 可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯
•波长选择装置： 一般简易的仪器，如比色计多采用滤光片来获得一定波
长的光辐射。 分光光度计则采用棱镜或衍射光栅为核心构成单色器，
以获得纯度较高的单色光。 •样品池（吸收池）：
• 除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长 2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器 波长的准确性。
• 应以吸光度最大的波长作为测定波长。
• 一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0.7之间的误 差较小。
• 仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否 则测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择，应以减小狭 缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。
3.纯度检查：
若一种化合物对紫外光和可见光区的某一 波段呈光学透明（即不吸收或几乎不吸收）， 而不纯杂质有吸收时，则该物质的生产精制 应当进行到规定波长处的吸收系数降到最低 时为止。有些药物就以此作为杂质限度检查 的依据。此外，有些药物的杂质是通过比色 法与杂质对照品比较进行控制的。
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• 检查肾上腺素中的酮体：取肾上腺素，加 0.1mol/L盐酸溶液，制成每1ml中含2mg的 溶液，照分光光度法，在310nm的波长处测 定，吸光度不得过0.05。
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•红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要 数百微克（g）的供试品进行测定，此区域 内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动能 级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，特别 是在7-15m（称为“指纹区”），吸收峰很 多，而且尖锐。除光学异构体外，不会遇到两 种不同的化学物质完全相同的红外吸收光谱， 故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。
盐酸土霉素在酸性溶液（pH2.0）中，最大吸 收为353nm，在上述所述波长和浓度条件下，盐 酸土霉素几乎无吸收。
34
• 华法林钠：溶液的澄清度与颜色检查规定，本 品 2 0 mg/ml 丙 酮 溶 液 ， 用 4 cm 吸 收 池 ， 在 460nm的吸光度不得过0.12。
35
用比色法检查： • 醋酸氟轻松和氟脲嘧啶与茜素氟蓝反应检查氟； • 胰岛素制剂与锌试剂反应检查锌； • 醋酸地塞米松等与二氨基萘反应检查硒。
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• 苄氟噻嗪和氢氯噻嗪等药物中，芳香第一胺的 检查，均采用比色法。将样品用亚硝酸重氮化 后与二盐酸萘乙二胺生成偶氮化合物，在 518nm波长处测定吸光度，应不得超过规定 限度。
30
• 枸橼酸哌嗪和磷酸哌嗪检查项下，根据第一胺 和氨与亚硝基铁氰化钠在丙酮的存在下的碱性 溶液中呈黄色至红色的反应，采用比色法，测 定600nm与520nm波长处的吸光度比值，以此 来控制药品中杂质伯胺和氨的含量。
由上式可以看出：光子能量与频率成正比，与 波长成反比 • 总能量E=E平移+E振动+E转动+E电子
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• 跃迁：分子被吸收的光辐射激发后能量由低能 级跳到高能级的过程。 按照光吸收过程中能量的过程分为: 转动能跃迁 振动能跃迁 电子跃迁
远红外吸收光谱—转动光谱 红外吸收光谱—振动光谱 紫外-可见吸收光谱—电子光谱
（3）杂散光的检查： 按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，
置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定 透光率，应符合表中的规定。
试剂
碘化钠 亚硝酸钠
浓度% （g/ml）
1.00
5.00Biblioteka 波长 （nm）220
340
透光率 （%）
<0.8 <0.8
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3.紫外分光光度法对溶剂的要求：
用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测 定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应满足以下 要求：
波长处有最大吸收，在262nm波长处有最小吸收 其顺式异构体及其水解产物吡啶-2-甲醛-N甲碘物 同条件下在294nm波长处均无吸收，这些杂质在 262nm处有吸收，如有杂质存在会导致碘解磷定 溶液的A294/A262比值降低。
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• 盐酸土霉素：杂质吸收度检查规定，本品 2mg/ml的盐酸甲醇溶液在430nm波长处的吸光 度不得过0.5。本品10mg/ml的盐酸甲醇溶液在 490nm波长处的吸光度不得过0.2。
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二.基本概念：
•光的色散：阳光通过棱镜后会射出按红橙 黄绿蓝靛紫次序排列的七色光，这 种将阳光分解为各种单色光的现象，即为光的 色散。 •光谱：经过色散后的单色光依固定的次序排 列而成的景象，称为光谱。
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• 可见光：经过色散以后的各种颜色的单色 光通常叫做可见光。
波长范围:400-760nm为可见光区
玻璃吸收池仅适用于320nm以上波长的测定。 水晶或熔融石英吸收池可用于200nm以上波长的测定。 最常用的是光路长度为1cm的吸收池。 •检测器： 紫外-可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、 光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。
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2.仪器的校正和检定
（1）波长的校正：由于温度变化对机械部分的 影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定 期对所用仪器进行全面校正检定外，还应于测定 前校正测定波长。
波长
吸光度要求
220nm-240nm 241nm-250nm 251nm-300nm 300nm以上
不得超过0.40 不得超过0.20 不得超过0.10 不得超过0.05
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4.紫外分光光度法测定法：
• 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶 剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸 收峰波长2nm以内测试几个点的吸光度，以核对供试 品的吸收峰波长是否准确。
• 由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试
品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。
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五.紫外-可见分光光度法在药品 检验中的应用
药典和药品标准中应用紫外-可见分光光度 法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、纯 度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测 定等等。
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1.吸收系数：
药品的吸收系数是药品的理化特性常数，可 作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。对 紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进行精 制时，应进行到产品在其特定波长测定吸收系 数达到一个稳定的最大值时为止，因此吸收系 数同其它物理常数一样，也可作为判断药品纯 度的依据。
E电子跃迁E分子振动跃迁E分子转动跃迁
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三.分光光度法的基本原理
•在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高， 一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物质 即可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物 质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁 所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变 化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不 如红外光区，故紫外-可见光区主要用于定量 分析以及作为物理常数的测定。
•紫外光：与可见光光谱的紫色一端相接的 为紫外光，肉眼不能直接感知。
波长范围:200-400nm为紫外光区
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• 吸收光谱：发射连续光谱的光源（如氘灯和钨 丝灯）发出的光通过透明物质（固体、液体或 气体）后，一些波长的单色光成分被该物质选 择吸收，在原来的连续光谱上出现若干条暗线 或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。
钬 玻 璃 在 2 7 9 . 4 nm、287.5nm、 333.7nm、
360.9nm、418.5nm、460.0nm、 484.5nm、
536.2nm 与 6 3 7 . 5 nm 的 波 长 处 有 尖 锐 的 17
吸收
（2）吸光度的准确度：
取在120C干燥至恒重的基准重铬酸钾约
60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶 解
紫外-可见分光光度法在 药品检验中的应用
北京市药品检验所化学室 郭小洁
1
一、概述 二、基本概念 三、分光光度法的基本原理 四、紫外分光光度计 五、紫外－可见分光光度法在药检中应用 六、结语
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一.概述：
分光光度法是通过测定物质在某些特定波长处 或一定范围内的吸光度或发光强度，是对物质进 行定性和定量的分析方法。紫外-可见分光光度法 具有操作简便快速、专属性和灵敏度高等优点。 因此在药品的分析检验中被广泛采用。在各国药 典中药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等 各个项目中都能见到紫外-可见分光光度法的应用 实例。
并稀释至1000ml，在规定的波长处测定吸光度
并波计长算其吸收235系数。 257
（nm）
（最小）
（最大）
313 （最小）
350 （最大）
吸收系数 （E1%1cm）
124.5
144.0
48.6
106.6
许可范围 123.0-126.0 142.8146.2
47.0-50.3 105.5108.5
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• 波长（符号为）：是指由一个波上的任意一 点到相邻的下一个波上相对应点之间的直线距 离。单位为：nm。
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A D
B
C
E
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•光子能量与其传播频率和波长的关系： E=h=h*C/
其中:E—光子跃迁能量 h—普郎克常数（6.62619610-34J） —频率,每秒发出波的数目(单位：HZ) C—光速（2.9979251010 cm/s） 1/—波数
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4.含量测定：
药典中含量测定方法可分为： （1）对照品比较法 （2）吸收系数法 （3）计算分光光度法 （4）比色法
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（1）对照品比较法
应用范围： • 单一成分药剂的测定。 • 混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的
测定波长没有或几乎没有吸收
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测定要求 • 分别配制供试品溶液和对照品溶液 • 对照品溶液所含对照品的量应为供试品溶液中
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可。
• 维 生 素 B12 的 鉴 别 规 定 每 1 ml 中 含 维 生 素 B1225g 的水溶液，照分光光度法测定，在 278、361与550nm的波长处有最大吸收。 A361nm/A278nm应为1.70-1.88。 A361nm/550nm应为3.15-3.45。
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维生素B2水溶液的吸收光谱 26
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• 葡萄糖注射液和葡萄糖氯化钠注射液中的杂质 5-羟甲基糠醛，在284nm测定吸光度，控制杂 质的含量。如药典规定，1%葡萄糖溶液的吸 光度不得大于0.32，按5-羟甲基糠醛的E1%1cm 为 1308计算，含5-羟甲基糠醛应在0.00024%以 下。
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• 碘解磷定注射液：分解产物的检查规定，用 0.1mol/L盐酸溶液将样品稀释制成每1ml中含 0.01mg的溶液，在294与262nm的波长处分别 测定吸光度，A294/A262应不小于3.1。 碘解磷定的0.1mol/L盐酸溶液在225和294nm
《中国药典》2005年版中收载的甲苯磺丁脲 和地塞米松等品种，均在性状项下测定其吸收 系数。
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2.鉴别：
药物对光辐射的吸收特点（即其吸收光谱） 可与其它化学的或物理的方法配合作为鉴别的 一种手段，即绘制出药物的吸收光谱曲线与标 准品的吸收光谱互相核对。实际上在化合物的 理化常数资料及药品标准中，一般只列出各化 合物最大吸收（有时也列出最小吸收）的波长 位置。对于具有两个以上最大吸收的药物可以 进一步简化操作，无需费时作吸收光谱曲线， 只要测出各最大吸收波长处的吸收度，求出这 些吸收度的比值，测出它们相对位置的比值即
被测组分标示量的10%以内。 • 所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保
持一致。
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• 计算公式： Cs=Cr*As/Ar
Cs：供试品溶液的浓度 As：供试品溶液的吸光度 Cr：对照品溶液的浓度 Ar：对照品溶液的吸光度
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（2）.吸收系数法：
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•透光率（T）：单色光通过一物质的溶液时， 透过光的强度（I）与入射光的强度（I0）之比。 即：T=I / I0。 •吸 光 度 （ A）： 透 光 率 的 负 对 数 值 . 即:A=log1/T= -logT
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•郎伯定律（Lambert’s Law）:当溶液浓度不变 时，吸光度与溶液的液层厚度成正比。
•比耳定律（Beer’s Law）:当溶液液层厚度不 变时，吸光度与溶液的浓度成正比。
•比耳-郎伯定律（Beer -Lambert’s Law）： 吸光度（A）与溶液的浓度（C）和光路长（L） 是成正比例的。即：A=ECL
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•比耳-郎伯定律适用范围： 1.溶液的浓度不能过高或过低，使测定 结果的相对误差最小的最佳透射率为 T=37%左右。 2.所用溶剂不得与测定物质有分子间缔 合，生成复合物、异构化或出现酸碱平 衡。
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四.紫外-可见分光光度计
1.基本构造：
稳压电源
记录装置
检
光源
波长选择装置
样品池
测
器
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•光源： 可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯
•波长选择装置： 一般简易的仪器，如比色计多采用滤光片来获得一定波
长的光辐射。 分光光度计则采用棱镜或衍射光栅为核心构成单色器，
以获得纯度较高的单色光。 •样品池（吸收池）：