生物分离工程第八章电泳技术ppt课件
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– SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试 剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠 ，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂 ，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之 间的二硫键断裂。
– 因此，在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白 质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基 酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶 束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消 除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚 合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中 分子形状对迁移率的影响。
电泳的简单原理
蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中 ，它们的净电荷取决于介质的H+浓度或与其它 大分子的相互作用。
带电粒子在电场中的迁移方式主要依据分子尺 寸大小和形状、分子所带电荷或分子的生物学 与化学特性。
电泳迁移率
电泳迁移率（mobility）:在电位梯度E的影响下 ，带电颗粒在时间t中的迁移距离d。
工作原理
蛋白质的等电点 蛋白质最主要的特性是它的带电行为，它们在不 同的pH环境中带不同数量的正电或负电，只是 在某一pH时，蛋白质的净电荷为0，此pH即为该 蛋白的等电点（isoelectric point pI）。
蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成和构象， 是一个物理化学常数。
可以利用等电点差异来进行蛋白质的分离、分析
其中区带电泳是目前常用的电泳系统。
区带电泳的主要技术
区带电泳中的常用技术
– 载体电泳：粉末电泳、纸电泳、凝胶电泳、 聚焦电泳
– 无载体电泳：自由电泳、毛细管电泳
凝胶电泳
作为电泳支持介质必须具有：化学惰性、不干扰大分 子的电泳过程，化学稳定性好、均匀、重复性好、电 内渗小等特性。
凝胶电泳的支持介质： – 聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel, PGA） 由丙烯酰胺和交联剂N，N’-甲叉双丙烯酰胺在引发 剂和增速剂的作用下，聚合而成； – 琼脂糖凝胶： 从琼脂中精制分离出的胶状多糖，其分子结构大部 分是由1,3连接的β-D吡喃半乳糖和1,4连接的3,6脱水αD吡喃半乳糖交替形成的；
尺寸筛分能力（Size sieving capacity），这种现象被称 为分子筛效应（molecular sieving effect）
分子筛效应
+
-
A BC 图中A，B，C均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图 分子量大小依次为MA=MB>MC，所带电荷量相同QA=QB=QC。
琼脂糖凝胶的性能、结构与特点
蛋白质样品用SDS处理后亚基的解聚和 分子形状的改变
未知蛋白质分子量的测定
基于上述SDS-PAGE的原理介绍，我们可以利 用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测 定；
– 以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到 不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线， 然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳 ，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量；
PAGE的具体操作过程
制胶：确定凝胶配方（凝胶、引发剂、增速剂的浓度和缓 冲液），使用灌胶模具灌胶；
样品准备：选择合适的样品缓冲液、确定合适的样品浓度 （1~2mg/L，考染），加样（溴酚蓝）；
电泳：4~6小时，待溴酚蓝前沿到达阳极底部； 检测：紫外扫描或染色（考马斯亮蓝R-250、银染色—灵
电泳新介质
N-取代聚丙烯酰胺介质： Poly-N-acryl-tris (NAT) gel N-Acryloyl sugars Acryloylmorpholine Hydrolink gels N-acryloylaminoethoxye thanol (AAEE) 特点： 具有极强的水解稳定性 具有高度亲水性 孔径大
根据凝胶孔径与被分离分子的大小和形状，可以将凝 胶分为： – 非排阻性凝胶（unrestrictive gel）:浓度0.7 ~1.0% 的琼脂糖凝胶； – 排阻性凝胶（restrictive gel）：浓度大于1%的琼 脂糖凝胶和常规PAGE
凝胶浓度太大，孔径小于样品分子尺寸，电泳时蛋白 质分子不能进入凝胶，样品仍留在加样位置；
m d tE
其单位是cm2·sec-1 ·V-1 电泳迁移率的不同提供了从混合物中分离不同物
质的基础
电泳的大致分类
依据电泳原理，现有三种形式的电泳分离系 统
– 移动界面电泳（moving boundary electrophoresis） – 区带电泳（zone electrophoresis ） – 稳态电泳（steady state electrophoresis ）
凝胶电泳的分离区带或电泳斑点转移到特定的膜上， 如PVDF膜
电泳洗脱仪：回收样品
凝胶扫描和摄录装置：对电泳区带进行扫描，从而给 出定量的结果。
垂直电泳槽及灌胶模具
电泳的一般过程
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳
原理：
由于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是多孔介质，不仅 能防止对流，把扩散减少到最低；而且其孔径大小与 生物大分子具有相似的数量级，能主动参与生物分子 的分离，具有分子筛效应。
Ampholine(瑞典LKB公司)
– 由许多脂肪族的多氨基多羧基的异构体和同系物组 成，它们具有连续改变的氨基与羧基比
Servalyte (德国Serva 公司)
– 产品Biolyte
Pharmalyte (瑞典ia 公司)
缓冲系统的选择原则
是两种标准的对立权衡
– 如果缓冲液的pH选择在远离样品中各种蛋白的等电 点，蛋白质分子所带电荷的密度大，电泳时间短， 区带细而窄；
– 如果缓冲pH选择在靠近被分离样品的一种或几种蛋 白质的等电点，则蛋白质分子之间的电荷密度差别 大，分辨率就高；
因此，常常选择pH 8.0~9.5的缓冲，常用的缓冲液 有Tris-甘氨酸（pH 8.3~9.5），Tris-硼酸(pH 8.3~9.3)和 Tris-醋酸（pH 7.2~8.5）
离子强度的选择
离子强度不宜过高，此时电导率低，产热少，电 泳速度快；但也不可过低，必须具有一定的缓冲 能力，过低的离子强度容易导致蛋白质絮凝。
一般选择缓冲液的离子强度为0.01~0.1 mol/L之间
凝胶浓度的选择
由于PAGE电泳分离不仅取决于蛋白质的电荷密度，而 且取决于分子的大小、形状。因此，与凝胶的分子筛 效应（即凝胶的孔径与电泳的分辨率、电泳速度）密 切相关。
影响聚合的主要因素
引发剂和增速剂的浓度：浓度小易导致聚合速度慢；浓度 过大则易导致电泳时的烧胶以及电泳带的畸变；一般控制 使聚合过程在40~60分钟内完成。
系统pH值：酸性条件、碱性条件均可，但仍然存在一个最 佳pH值，以获得最佳的聚合结果；
温度：低温下聚合导致凝胶变脆和混浊；适当提高温度可 以是凝胶透明而有弹性；
学习总体要求
掌握电泳概念，电泳速度及凝胶电泳，了解 其他几种常见电泳原理及特点，操作及应用 。
电泳概念
Arne Tiselius——物理化学家、诺贝尔奖金获得者 定义——荷电的胶体粒子在电场中的移动； 电泳决定于环绕每个离子的离子雾中的扩散双电
层，离子尺寸越大、溶液中的离子强度越高时， 电泳现象变得越明显。因此，电泳现象中的表面 电势和双电层的因素起着决定性的作用。
电泳技术 Electrophoresis
本章主要知识点
电泳的概念 电泳的基本原理 电泳技术的分类 常用的凝胶电泳技术有哪些？ 电泳装置的基本组成 聚丙稀酰胺凝胶电泳的一般过程
SDS-PAGE电泳的基本原理及过程 琼脂糖电泳的特点及其应用 等电聚焦电泳的基本原理 双相电泳的概念及其特点
电泳系统的基本组成
电泳槽：是凝胶电泳系统的核心部分，管式电泳槽、 垂直板电泳槽、水平板电泳槽
电源:聚丙烯酰胺凝胶电泳200~600V，载体两性电解质 等电聚焦电泳1000~2000V，固相梯度等电聚焦 3000~8000V
外循环恒温系统:高电压会产生高热，需冷却； 凝胶干燥器:用于电泳和染色后的干燥； 灌胶模具：制胶，玻璃板和梳子； 电泳转移装置：利用低电压，大电流的直流电场，使
凝胶浓度太小，孔径太大，样品中各种蛋白质分子均 随缓冲液推进，不能得到很好的分离；
凝胶浓度与分子量测定的关系
凝胶浓度 (C=2.6%)
5 10 15 20
分子量范围 (kDa) 30~200 15~100 10~50 2~15
凝胶浓度 (C=5%)
5 10 15 20
分子量范围 (kDa) 60~700 22~280 10~200 5~150
分子氧：分子氧的存在会阻碍凝胶的化学聚合；抽气 系统纯度：金属离子会影响凝胶的聚合；
聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应
在使用凝胶介质的电泳中，由于电泳介质具有高粘度 和高的摩擦阻力，因此不仅可以防止对流，而且可以 把扩散减到最小。
凝胶中的大分子分离取决于它的电荷、尺寸和形状 凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的
因此，在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质分离时 ，在电泳过程中不仅取决于蛋白质的电荷密度，还取 决于蛋白质的尺寸和形状。
PAGE可以用圆盘电泳、垂直电泳或水平电泳
电泳前的准备工作
缓冲系统的选择：
– 保证蛋白质的溶解性能、稳定性以及生物 活性的保持；
– 电泳时间和分辨率：从理论上讲PAGE可 以在任何pH进行，但实际上过酸或过碱的 条件下将发生某种水解（脱酰胺）。因此 ，pH应限制在3~10之间。
载体两性电解质pH梯度等电聚焦
等电聚焦（isoelectrofocusing）, IEF 利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同， 在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋 白质的分离和分析。
利用等电聚焦技术分离、分析的对象仅限于蛋白 质和两性分子。
根据建立pH梯度的原理不同，梯度有分为载体两 性电解质梯度（Carrier ampholytes pH gradient ）和固相梯度。
载体两性电解质pH梯度等电聚焦原理
载体两性电解质pH梯度等电聚焦是在支持介质 中加入载体两性电解质，通以直流电后在两极 之间形成稳定、连续和线性的pH梯度，当带电 的蛋白质分子进入该体系时，便会产生移动， 并聚集于相当于其等电点的位置。
等电聚焦分离示意图
常规PAGE和等电聚焦电泳的区别
载体两性电解质和pH梯度的形成
丙烯酰胺的聚合
丙烯酰胺的聚合通常是由化学或光化学过程完成的，通 常采用过硫酸铵、过硫酸钾或核黄素（引发剂）来引发 该过程；以N，N，N’，N’-四甲基乙二胺（TEMED）为 增速剂。
该引发-增速的催化系统实质是自由基催化的氧化-还原 过程。
丙烯酰胺的化学聚合是由过硫酸铵在碱性条件下，产生 游离氧自由基引发单体丙烯酰胺成为自由基状态，经过 一系列的自由基反应得到的聚合物；
等电聚焦技术的关键在于pH梯度的建立 载体两性电解质的概念：
作为载体两性电解质应该具有以下特点：
– 应该是两性的，使它们在分离柱中也能达到一个平 衡位置；
– 应该可以作为“载体”，两性电解质不能用于等电 聚焦，只有载体两性电解质，即具有好的导电性和 好的缓冲能力的化合物才能用于等电聚焦。
用于等电聚焦的主要载体两性电解质
敏度比考染高100倍、荧光探针）； 照相、凝胶干燥： 定量测定：
SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳
十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 主要用于测定蛋白质亚基分子量以及未知蛋白
质分子量的测定； 特点：设备简单、操作简便、测定快速、重复
性高、样品无需纯化。
SDS-PAGE 的原理
蛋白质分子的解聚
其优点如下： 琼脂糖凝胶孔径较大，0.075%琼脂糖的孔径为800nm
，可以分析百万道尔顿分子量的大分子，但分辨率较 凝胶电泳低。 机械强度高：可以在浓度1%以下使用； 无毒； 染色、脱色程序简单，背景色较低； 热可逆性； 生物中性：一般不与生物材料结合； 电内渗（EEO）大：对于对流电泳有益
– 因此，在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白 质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基 酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶 束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消 除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚 合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中 分子形状对迁移率的影响。
电泳的简单原理
蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中 ，它们的净电荷取决于介质的H+浓度或与其它 大分子的相互作用。
带电粒子在电场中的迁移方式主要依据分子尺 寸大小和形状、分子所带电荷或分子的生物学 与化学特性。
电泳迁移率
电泳迁移率（mobility）:在电位梯度E的影响下 ，带电颗粒在时间t中的迁移距离d。
工作原理
蛋白质的等电点 蛋白质最主要的特性是它的带电行为，它们在不 同的pH环境中带不同数量的正电或负电，只是 在某一pH时，蛋白质的净电荷为0，此pH即为该 蛋白的等电点（isoelectric point pI）。
蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成和构象， 是一个物理化学常数。
可以利用等电点差异来进行蛋白质的分离、分析
其中区带电泳是目前常用的电泳系统。
区带电泳的主要技术
区带电泳中的常用技术
– 载体电泳：粉末电泳、纸电泳、凝胶电泳、 聚焦电泳
– 无载体电泳：自由电泳、毛细管电泳
凝胶电泳
作为电泳支持介质必须具有：化学惰性、不干扰大分 子的电泳过程，化学稳定性好、均匀、重复性好、电 内渗小等特性。
凝胶电泳的支持介质： – 聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel, PGA） 由丙烯酰胺和交联剂N，N’-甲叉双丙烯酰胺在引发 剂和增速剂的作用下，聚合而成； – 琼脂糖凝胶： 从琼脂中精制分离出的胶状多糖，其分子结构大部 分是由1,3连接的β-D吡喃半乳糖和1,4连接的3,6脱水αD吡喃半乳糖交替形成的；
尺寸筛分能力（Size sieving capacity），这种现象被称 为分子筛效应（molecular sieving effect）
分子筛效应
+
-
A BC 图中A，B，C均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图 分子量大小依次为MA=MB>MC，所带电荷量相同QA=QB=QC。
琼脂糖凝胶的性能、结构与特点
蛋白质样品用SDS处理后亚基的解聚和 分子形状的改变
未知蛋白质分子量的测定
基于上述SDS-PAGE的原理介绍，我们可以利 用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测 定；
– 以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到 不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线， 然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳 ，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量；
PAGE的具体操作过程
制胶：确定凝胶配方（凝胶、引发剂、增速剂的浓度和缓 冲液），使用灌胶模具灌胶；
样品准备：选择合适的样品缓冲液、确定合适的样品浓度 （1~2mg/L，考染），加样（溴酚蓝）；
电泳：4~6小时，待溴酚蓝前沿到达阳极底部； 检测：紫外扫描或染色（考马斯亮蓝R-250、银染色—灵
电泳新介质
N-取代聚丙烯酰胺介质： Poly-N-acryl-tris (NAT) gel N-Acryloyl sugars Acryloylmorpholine Hydrolink gels N-acryloylaminoethoxye thanol (AAEE) 特点： 具有极强的水解稳定性 具有高度亲水性 孔径大
根据凝胶孔径与被分离分子的大小和形状，可以将凝 胶分为： – 非排阻性凝胶（unrestrictive gel）:浓度0.7 ~1.0% 的琼脂糖凝胶； – 排阻性凝胶（restrictive gel）：浓度大于1%的琼 脂糖凝胶和常规PAGE
凝胶浓度太大，孔径小于样品分子尺寸，电泳时蛋白 质分子不能进入凝胶，样品仍留在加样位置；
m d tE
其单位是cm2·sec-1 ·V-1 电泳迁移率的不同提供了从混合物中分离不同物
质的基础
电泳的大致分类
依据电泳原理，现有三种形式的电泳分离系 统
– 移动界面电泳（moving boundary electrophoresis） – 区带电泳（zone electrophoresis ） – 稳态电泳（steady state electrophoresis ）
凝胶电泳的分离区带或电泳斑点转移到特定的膜上， 如PVDF膜
电泳洗脱仪：回收样品
凝胶扫描和摄录装置：对电泳区带进行扫描，从而给 出定量的结果。
垂直电泳槽及灌胶模具
电泳的一般过程
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳
原理：
由于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是多孔介质，不仅 能防止对流，把扩散减少到最低；而且其孔径大小与 生物大分子具有相似的数量级，能主动参与生物分子 的分离，具有分子筛效应。
Ampholine(瑞典LKB公司)
– 由许多脂肪族的多氨基多羧基的异构体和同系物组 成，它们具有连续改变的氨基与羧基比
Servalyte (德国Serva 公司)
– 产品Biolyte
Pharmalyte (瑞典ia 公司)
缓冲系统的选择原则
是两种标准的对立权衡
– 如果缓冲液的pH选择在远离样品中各种蛋白的等电 点，蛋白质分子所带电荷的密度大，电泳时间短， 区带细而窄；
– 如果缓冲pH选择在靠近被分离样品的一种或几种蛋 白质的等电点，则蛋白质分子之间的电荷密度差别 大，分辨率就高；
因此，常常选择pH 8.0~9.5的缓冲，常用的缓冲液 有Tris-甘氨酸（pH 8.3~9.5），Tris-硼酸(pH 8.3~9.3)和 Tris-醋酸（pH 7.2~8.5）
离子强度的选择
离子强度不宜过高，此时电导率低，产热少，电 泳速度快；但也不可过低，必须具有一定的缓冲 能力，过低的离子强度容易导致蛋白质絮凝。
一般选择缓冲液的离子强度为0.01~0.1 mol/L之间
凝胶浓度的选择
由于PAGE电泳分离不仅取决于蛋白质的电荷密度，而 且取决于分子的大小、形状。因此，与凝胶的分子筛 效应（即凝胶的孔径与电泳的分辨率、电泳速度）密 切相关。
影响聚合的主要因素
引发剂和增速剂的浓度：浓度小易导致聚合速度慢；浓度 过大则易导致电泳时的烧胶以及电泳带的畸变；一般控制 使聚合过程在40~60分钟内完成。
系统pH值：酸性条件、碱性条件均可，但仍然存在一个最 佳pH值，以获得最佳的聚合结果；
温度：低温下聚合导致凝胶变脆和混浊；适当提高温度可 以是凝胶透明而有弹性；
学习总体要求
掌握电泳概念，电泳速度及凝胶电泳，了解 其他几种常见电泳原理及特点，操作及应用 。
电泳概念
Arne Tiselius——物理化学家、诺贝尔奖金获得者 定义——荷电的胶体粒子在电场中的移动； 电泳决定于环绕每个离子的离子雾中的扩散双电
层，离子尺寸越大、溶液中的离子强度越高时， 电泳现象变得越明显。因此，电泳现象中的表面 电势和双电层的因素起着决定性的作用。
电泳技术 Electrophoresis
本章主要知识点
电泳的概念 电泳的基本原理 电泳技术的分类 常用的凝胶电泳技术有哪些？ 电泳装置的基本组成 聚丙稀酰胺凝胶电泳的一般过程
SDS-PAGE电泳的基本原理及过程 琼脂糖电泳的特点及其应用 等电聚焦电泳的基本原理 双相电泳的概念及其特点
电泳系统的基本组成
电泳槽：是凝胶电泳系统的核心部分，管式电泳槽、 垂直板电泳槽、水平板电泳槽
电源:聚丙烯酰胺凝胶电泳200~600V，载体两性电解质 等电聚焦电泳1000~2000V，固相梯度等电聚焦 3000~8000V
外循环恒温系统:高电压会产生高热，需冷却； 凝胶干燥器:用于电泳和染色后的干燥； 灌胶模具：制胶，玻璃板和梳子； 电泳转移装置：利用低电压，大电流的直流电场，使
凝胶浓度太小，孔径太大，样品中各种蛋白质分子均 随缓冲液推进，不能得到很好的分离；
凝胶浓度与分子量测定的关系
凝胶浓度 (C=2.6%)
5 10 15 20
分子量范围 (kDa) 30~200 15~100 10~50 2~15
凝胶浓度 (C=5%)
5 10 15 20
分子量范围 (kDa) 60~700 22~280 10~200 5~150
分子氧：分子氧的存在会阻碍凝胶的化学聚合；抽气 系统纯度：金属离子会影响凝胶的聚合；
聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应
在使用凝胶介质的电泳中，由于电泳介质具有高粘度 和高的摩擦阻力，因此不仅可以防止对流，而且可以 把扩散减到最小。
凝胶中的大分子分离取决于它的电荷、尺寸和形状 凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的
因此，在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质分离时 ，在电泳过程中不仅取决于蛋白质的电荷密度，还取 决于蛋白质的尺寸和形状。
PAGE可以用圆盘电泳、垂直电泳或水平电泳
电泳前的准备工作
缓冲系统的选择：
– 保证蛋白质的溶解性能、稳定性以及生物 活性的保持；
– 电泳时间和分辨率：从理论上讲PAGE可 以在任何pH进行，但实际上过酸或过碱的 条件下将发生某种水解（脱酰胺）。因此 ，pH应限制在3~10之间。
载体两性电解质pH梯度等电聚焦
等电聚焦（isoelectrofocusing）, IEF 利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同， 在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋 白质的分离和分析。
利用等电聚焦技术分离、分析的对象仅限于蛋白 质和两性分子。
根据建立pH梯度的原理不同，梯度有分为载体两 性电解质梯度（Carrier ampholytes pH gradient ）和固相梯度。
载体两性电解质pH梯度等电聚焦原理
载体两性电解质pH梯度等电聚焦是在支持介质 中加入载体两性电解质，通以直流电后在两极 之间形成稳定、连续和线性的pH梯度，当带电 的蛋白质分子进入该体系时，便会产生移动， 并聚集于相当于其等电点的位置。
等电聚焦分离示意图
常规PAGE和等电聚焦电泳的区别
载体两性电解质和pH梯度的形成
丙烯酰胺的聚合
丙烯酰胺的聚合通常是由化学或光化学过程完成的，通 常采用过硫酸铵、过硫酸钾或核黄素（引发剂）来引发 该过程；以N，N，N’，N’-四甲基乙二胺（TEMED）为 增速剂。
该引发-增速的催化系统实质是自由基催化的氧化-还原 过程。
丙烯酰胺的化学聚合是由过硫酸铵在碱性条件下，产生 游离氧自由基引发单体丙烯酰胺成为自由基状态，经过 一系列的自由基反应得到的聚合物；
等电聚焦技术的关键在于pH梯度的建立 载体两性电解质的概念：
作为载体两性电解质应该具有以下特点：
– 应该是两性的，使它们在分离柱中也能达到一个平 衡位置；
– 应该可以作为“载体”，两性电解质不能用于等电 聚焦，只有载体两性电解质，即具有好的导电性和 好的缓冲能力的化合物才能用于等电聚焦。
用于等电聚焦的主要载体两性电解质
敏度比考染高100倍、荧光探针）； 照相、凝胶干燥： 定量测定：
SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳
十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 主要用于测定蛋白质亚基分子量以及未知蛋白
质分子量的测定； 特点：设备简单、操作简便、测定快速、重复
性高、样品无需纯化。
SDS-PAGE 的原理
蛋白质分子的解聚
其优点如下： 琼脂糖凝胶孔径较大，0.075%琼脂糖的孔径为800nm
，可以分析百万道尔顿分子量的大分子，但分辨率较 凝胶电泳低。 机械强度高：可以在浓度1%以下使用； 无毒； 染色、脱色程序简单，背景色较低； 热可逆性； 生物中性：一般不与生物材料结合； 电内渗（EEO）大：对于对流电泳有益