用两种方法检测乙肝表面抗原结果分析

用两种方法检测乙肝表面抗原结果分析
目的了解用ELISA法检测乙肝表面抗原和用化学发光法检测表面抗原两者之间的结果情况。

方法采集320例就诊人员的血液标本，分别用化学发光法与ELISA法检测。

结果320份标本中，发光法检测出40份阳性，280份阴性。

ELISA 法检测出42份阳性，278份阴性。

经χ2检验两者无显著性差异（P>0.05）。

结论ELISA法成本比较低，耗时长，实验的影响因素比较多，易出现假阳性。

化学发光法成本高，所需时间短，干扰因素少，不易出现假阳性。

标签：乙肝表面抗原；ELISA；化学发光
流行病学调查结果显示，我国的乙型病毒肝炎感染性约达10%，乙肝的实验检测对其防治具有非常重大的意义[1]。

乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。

随着科学越来越进步，检测的手段也越来越多。

自20世纪70年代至今，诸多高敏感性的检测方法被广泛应用于临床免疫学的检测中，当中应用最为广泛的就属酶联免疫法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）[2]。

近几年，化学发光微粒子免疫分析法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）正逐渐发展，是一种敏感性较强的临床免疫学检测方法，有效解决了低浓度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的检测难题[3]。

现用ELISA法，化学发光法，这两种方法检测的相关性进行探讨。

1 资料与方法
1.1一般资料标本来自于我院2016年3月1日～3月5日体检人员，共320例，男198例，女122例，年龄18～72岁，平均年龄为（39.5±8.4）岁。

1.2标本采集用红头采血管，真空抽取静脉血3 ml，标本静置后离心提取血清。

1.3检测试剂与仪器一种采用雅培化学发光HBsAg定量检测试剂盒，标本离心后，按照雅培I2000化学发光仪的操作规程检测。

试剂源自美国雅培公司，批准文号为70318HN00，仪器为美国雅培公司生产的i2000r化学光分析仪。

另一种采用英科新创HBsAg酶联免疫吸附试剂盒，安图酶标仪，按照说明书的操作步骤进行。

试剂由英科新创（厦门）科技有限公司提供，批准文号为2008095514，主要仪器为酶标仪（型号：伯乐680）、恒温水浴箱（生产企业：上海博讯公司医疗器械厂）。

1.4结果阳性的判读化学发光法检测含量>0.05为阳性。

ELISA法：检测标本的OD值/0.105>1为阳性。

2 结果
320份标本，ELISA法检测出278份阴性，42份阳性，其中40份阳性的OD 值>0.5，2份标本的OD值<0.5。

化学发光法检测出40份阳性，其中ELISA法检测的那2份OD值<0.5的阳性标本检测为阴性。

最后再用ELISA法重新检测这两份标本，结果最终显示又为阴性，与化学发光法结果相符。

3 讨论
ELISA法检测HBsAg是标本中存在的乙肝表面抗原与固相载休表面的抗体相结合，放入恒温箱，通过一段时间的反应，再进行洗涤拍干后加入酶标记的抗体，反应一定时间后，再进行洗涤拍干，最后加显色剂，与固相载体表面复合物相反应，如果存在乙肝表面抗原抗体复合物就会出现一定的颜色反应，呈现阳性。

化学发光法将待测标本与生物素标记的单克隆抗体、三氯联吡啶钌标记单克隆抗体、链酶亲和素标记磁性微粒加入到反应杯中共同温育，形成磁性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。

经仪器内的缓冲液冲洗，当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下的磁铁吸引住，而游离的发光剂标记抗体被冲走。

同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发光试剂标记物三氯联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。

全自动化学发光法所有的操作控制由仪器操作，具有灵敏度，准确率高，无辐射及快捷方便等优点[4]，避免了各种交叉污染，标本加错的可能性，避免了温度，时间控制偏差等。

在ELISA法测定中影响因素较多，操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误的结果（即假阳性或阴性结果）[5]。

如在人工加标本，加酶结合物，加底物，可能产生气泡或溅出等人为的不当操作，特别是洗涤在ELISA中决定着实验的成败，标本中的非特异性的干扰物质吸附于固相载体上后，如果没洗脱掉，就会产生假阳性，错误的结果。

320份标本中两种方法检测虽没有显著性差异，但有2份标本结果不相符，通过ELISA法一旦报告给患者，就会引起多方面的麻烦。

化学发光法虽所需时间短，干扰因素少，不易出现假阳性，但成本高。

由于ELISA法成本比较低，检测的价格便宜，虽耗时长，实验的影响因素比较多，易出现假阳性，但大多数健康体检人员还是比较喜欢采用此种方法。

所以作为临床检验人员在操作的过程中一定要仔细，不得马虎，对于像这种OD值<0.5标本一定要重新检测，排除人为因素。

综上所述，在乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的检测上，ELISA法成本比较低，耗时长，实验的影响因素比较多，易出现假阳性。

化学发光法成本高，所需时间短，干扰因素少，不易出现假阳性。

参考文献：
[1]卫晓青，黄秋芳，戴悦，等.低水平HBsAg3种方法检测结果比较[J].检验医学与临床，2013，10（3）：283-284.
[2]李秀梅，刘秋霞，阎泽君，等.ELISA法检测乙肝表面抗原出现假阳性结
果分析[J].慢性病学杂志，2010，12（9）：1037-1038.
[3]马跃飞，高丽钦，林晓丽.ELISA法检测乙型肝炎表面抗原假阳性的影响因素[J].国际检验医学杂志，2010，31（10）：1176-1177.
[4]孙永惠. 浅议化学发光法诊断系统检测乙型肝炎表面抗原[J]. 医学信息，2013，26（8）：604-605.
[5]迟婉利，孔祥民. ELISA检测乙肝病毒表面抗原假阳性原因分析[J].中国误诊学杂志，2011，11（9）：2050-2050.编辑/哈涛。