乙型肝炎病毒PCR酶免定量与标本稀释度相关

乙型肝炎病毒PCR酶免定量与标本稀释度相关
作者：康高飞
来源：《健康必读·下旬刊》2011年第11期
【中图分类号】R511 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)11－0263－01
【摘要】目的：本文主要是研究乙型肝炎病毒PCR酶免定量与标本稀释度的相关性。

筛选出一个合适的血清浓度，使得检测成本低、操作简单、检测结果准确。

方法：随机选取我院2010年1月到2011年5月的门诊和住院的病人，其中包括35例正常健康体检血清，85例临床病人血清，一共120例。

应用PCR酶免定量法检测血清中的乙型肝炎病毒。

比较不同稀释浓度下HBV-DNA的浓度。

结果：A组和B组两个阳性标本稀释1/125后DNA的浓度在
105~107拷贝/ ml，基本能检验出所有的阳性样本，阳性样本检出率在97.96%。

而当样本稀释到1/3125时，HBV-DNA的浓度才达到104，所占比例只有2.04%。

结论：临床的检测最合适的血清稀释样本是1/125，该稀释倍数在阳性检测率和检测成本和操作上具有可行性。

【关键词】乙型肝炎病毒；PCR酶免定量；标本稀释度
我国是感染乙型肝炎人数最多的国家之一。

到目前仍没有任何特效药能有效彻底的治疗乙型肝炎，同时若是诊疗不及时乙型肝炎很有可能进一步恶化为肝硬化、慢性肝肝纤维化甚至肝癌。

对于在临床上如何能有效快速准确检测出乙型肝炎病毒，对于对患者尽早采取治疗延缓病情有很大的帮助。

当疑似感染乙型肝炎病毒时，检测外周血中乙型肝炎病毒（HBV）的DNA 直接观测乙肝病毒的复制情况，是最直接、最准确的鉴别诊断标志［1］。

测定HBV-DNA的方法有很多并一直在发展，目前，最为常用的是聚合酶链反应-酶免（PCR-ELISA）定量法测定乙肝病毒的含量。

有实验证实PCR方法在检测乙肝病毒的特异性强、灵敏度高，对于低浓度的HBV-DNA也能准确检测出来［2］。

血清的稀释浓度会对检测结果造成一定影响，需要选用一个合适的血清浓度，做到检测成本低、操作简单、高效准确，以便能更好反应真实的HBV复制情况。

本文主要是研究乙型肝炎病毒PCR酶免定量与标本稀释度的相关性。

1 资料和方法
1.1 一般资料:随机选取我院2010年1月到2011年5月的门诊和住院的病人，其中包括35例正常健康体检血清，85例临床病人血清，一共120例。

根据乙型肝炎五项检查结果将患者
分为三组：A组为HBsAg(+)， HBeAg(+)抗HBc(+)共49例；B组为HBsAg(+)，抗HBe(+)，抗HBc(+)共36例；C组为正常健康人血清，五项指标均为阴性的对照组，共35例。

1.2 试剂:进行PCR酶免定量的检测试剂盒是由上海浩源生物科技有限公司所生产。

1.3 检测方法:首先要对样品先做前处理：计算血样的样品数、样品的阴阳性，检查乙型肝炎的五项指标。

对血清标本进行处理洗涤，再将血清按照1/5，1/25，1/125，1/3125等四个浓度进行稀释。

2 结果
三组患者血清按不同浓度稀释后HBV-DNA浓度见下表。

A组和B组两个阳性标本稀释1/125后DNA的浓度在105~107拷贝/ ml，基本能检验出所有的阳性样本，阳性样本检出率在97.96%。

而当样本稀释到1/3125时，HBV-DNA的浓度才达到104，由于所占比例不大，另一方面稀释操作繁琐很容易出现操作失误，提高检验成本和减低效率，而且两个阳性组只有1例的在104拷贝/ ml这个浓度下检测出HBV-DNA，因此这个比例很小，可以通过复查来抵消。

对于HBsAg阳性样本，采取1/125稀释浓度较为合适临床的检测工作。

同时在检测时发现，在低稀释倍数是出现低浓度的阳性结果。

这可能是患者曾经接触过乙肝病人的假阳性结果。

但这对于临床检测来说没有检测意义。

因此，在样本检测患者血清要本时，低稀释倍数血清样本时也可以不需要做。

综上，对于临床的检测意义最合适的血清稀释样本是1/125，该稀释倍数在阳性检测率和检测成本和操作上具有可行性。

3 讨论
根据血清中的HBV-DNA的有无和浓度，可以直接判断患者体内是否患有乙型肝炎病毒，以及其病毒数量多少，可以有效的帮助医生对乙型肝炎的诊断、制定治疗方案、已经评价患者治疗后的预后情况。

测定HBV-DNA的方法有很多，例如斑点杂交法、bDNA法等。

由于检测技术的提高，目前临床检验科主要采用的乙型肝炎核酸扩增酶免定量检测试剂盒对患者血清进行乙型肝炎病毒的检测。

但由于检测HBV-DNA的方法较单纯检测HBsAg要复杂，且有研究发现，HBV-DNA和HBsAg之间存在相关性［3］。

处于对成本和操作简化上考虑，有人提出在乙肝患者的治疗和病情监测中单纯检测HBsAg的表面抗原作为评断指标。

但有人做过研究发现，单纯检测HBsAg的表面抗原并不能代替HBV-DNA在对于判断考量乙肝病毒在患者体内的具体情况［4］。

目前，乙型肝炎仍没有非常有效的治疗方法，而我国患有乙型肝炎的病人在日益增加。

如何能提高乙型肝炎的检测率，特别是在基层医疗机构，提高他们对乙型肝炎的检测率和准确率，对于控制乙型肝炎的传播有很大作用。

同时需要做好乙型肝炎的流行病调查。

这都是流行病学和医学界急需解决的问题。

参考文献
［1］孙南雄,黄祖珊,刘雁雁等.乙型肝炎患者957例血清学标志物分析［J］.中华检验医学杂志,1999,22(5):39-41.
［2］赵洪宁,蒋鹏,尹华等.定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒基因含量［J］.中华实验和临床病毒学杂志，1998，12(4):367-369.
［3］孟庆华, 梁瑞彬, 刘德恭等.乙型肝炎患者HBVM和HBV DNA的相关性研究［J］.中华实验和临床病毒学杂志,2000，14:352-354.
［4］王火生,陈心春,李美忠.三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析［J］.中华肝脏病杂志，2006，714(7):541-543.
作者单位：417600 湖南娄底新化县人民医院。