碱性磷酸酶(ALP)测定(速率法)标准化操作程序文件

碱性磷酸酶（ALP）测定（速率法）标准化操作程序文件
1：概述
碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP，是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。

它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。

碱性磷酸酶（ALP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。

从大肠杆菌提取的AP分子量为80kD，酶作用的最适pH为8.0；用小牛肠黏膜提取的AP分子量为l00kD，最适pH为9.6.一般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。

它可制成片状试剂，使用方便。

产物为黄色的对硝基酚，在405nm有吸收峰。

用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。

2标本的收集
新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理
样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。

4剂来源，配置及储存
试剂来源：迪瑞
试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器
CS-600B全自动生化分析仪
分析参数：样品量4 u/l 试剂量：第一试剂200 u/l（R1）；第二试剂50 u/l
测光点23—38 测定模式：速率法正反应
分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)
6计算方法
ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)
式中
Tv=总反应体积
Sv=样本体积
18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数
P=比色杯光径（cm）
7 线性范围：本实验的线性范围：0----850U/L
8 参考范围：男性：1---12岁《500 U/L
12—15岁《750 U/L
》25岁40--150 U/L
女性：1---12岁《500 U/L
》15岁40--150 U/L
9 失控控理
1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。

3：进行仪器维护，重测失控项目。

检查仪器状态，查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。

另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。

如果结果仍不再允许范围内，则进行下一步。

4：重新校准。

重测失控项目。

用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。

5：请专家帮助。

如果前五步都为能得到在控结果，那可能是仪器或试剂已查明原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。

10 注意事项
1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。

2：如测试结果超出线性范围，样本应稀释后测试，调整因子数或将结果乘以稀释倍数。

3：结果的准确性仪器校正和测定温度，时间的控制。

4：由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。

11：临床意义
临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。

对于不明原因的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。

1.生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。

处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。

2.病理性升高：（1）骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；
（2）肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等；
（3）其他疾病如甲状旁腺机能亢进。

3.病理性降低：见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。