凝血酶原时间标准化及干扰因素的研究

第2卷第5期
北华大学学报(自然科学版)
Vol.2No.52001年10月
JOURNAL OF BEIHUA UN IV ERSIT Y (Natural Science )
Oct.,2001
文章编号:100924822(2001)0520384203
凝血酶原时间标准化及干扰因素的研究
翟洪顺,邹德学
(深圳市中心医院,广东深圳　518036)
摘要:目的　探讨凝血酶原时间(PT )测定的影响因素.方法　将凝血仪检测PT 时的凝血活酶视为未知ISI 值的凝血活酶,用已知ISI 的凝血活酶对其进行标定,比较仪器ISI 标定前后检测的INR 结果.结果　ACL
FU TURA PLUS 凝血仪对ISI 值为1.35(厂家的手工法值)的凝血活酶ISI 标定值为1.27;ISI 值校正前仪器测
定的INR 值与手工法有较大的变异(CV 值为13.4%,P <0.01),ISI 校正后仪器测定的INR 值与手工法变异系数变小(CV 值为4.8%,P >0.05).自动化凝血仪对手工标定的凝血活酶ISI 值产生影响.枸橼酸钠与血液1:9的抗凝关系是最佳比例,但应注意红细胞比积的影响,检测时间在4h 为宜,血红蛋白、肝素、胆红素血脂对其有干扰.结论　注意干扰物对PT 测定的影响;用自动化仪器进行PT 国际标准化测定时须用校正后的系统独立的
ISI 计算INR 值,以克服仪器本身的误差对INR 系统的影响.
关键词:凝血仪;凝血活酶;凝血活酶国际敏感指数;干扰物中图分类号:Q814 文献标识码:A
收稿日期:2001202226
作者简介:翟洪顺(1967-),男,主管技师,主要从事凝血止血机制和相关酶学的检验研究. 研究凝血酶原时间(Prothrombin time ,PT )测定的影响因素,如不同凝血活酶试剂,抗凝剂与血液比例,血液存放时间,标本溶血程度,肝素,胆红素,血脂等,以及凝血活酶ISI 对凝血酶原时间的影响.PT 的标准化是WHO 为口服抗凝剂患者抗凝监测的标准化提供的一个方案[1],其依据为不同试剂(凝血活酶)测定同一标本的凝血酶原时间比值(PTR )的对数呈线形相关,国际通用比值(International Normalized ratios ,INR )的计算公式为:INR =PTR ISI (International Sensitivity Index ISI 为标定的凝血活酶国际敏感度指数)[2],其目的是为了克服检测同一标本时因试剂不同而产生的误差.凝血活酶ISI 值的准确性对于INR 结果有较大的影响,WHO 推荐的凝血活酶ISI 标定是用手工法进行的.本文对各种影响因素及凝血活酶ISI 值对PT 的影响进行研究,现报道如下.
1　材料与方法
1.1　仪器及试剂
ACL FU TU RE PL US 全自动凝血仪(美国IL
公司)及试剂PT 2Fibrinogen HS (NO 08468210ISI
值1.35),定标血浆由Beckman Coulter 公司提供.
1.2　检测对象及检测标本处理
正常对照组为20～40岁未患过肝病的健康体检者20人,ISI 标定组为2份正常人及6份口服抗凝剂至少6周的患者新鲜血浆,连续留取10d.方法:按照ICTH 及ICSH 公布的暂定参考方法(手工法)进行测定[1,3].每d 测定2份正常血浆标本及6份口服抗凝剂治疗6周的患者标本,再测定1份正常标本,每份标本用已知ISI 与未知ISI 的试剂交替测定,即用已知ISI 试剂测定1份标本后,再用未知ISI 的试剂测定同一份标本,以同样的方式测定10d ,10d 后用这2种试剂测定了20份正常人及60
份口服抗凝剂后的患者标本.计算方法如下:ISI 未知=ISI 已知%A +(A 2+1)1/2
A ={
Σ(logPT 已知-lgPT 已知)2-Σ(logPT 未知　-lgPT 未知)2}/{2Σ(logPT 已知-lgPT 已知)　(logPT 未知-lgPT 未知)}
式中LogPT 已知,lgPT 已知是用已知ISI 或IRP 的试剂测定单个PT 的对数值和单个对数值的平均值;LogPT 未知,lgPT 未知是用被标定ISI 的试剂测定的PT 的对数值和单个对数值的平均值.
1.3　干扰物
1)血红蛋白溶液(50g/L):用机械溶血方法制备,血红蛋白含量经过血球仪测定.
2)胆红素浓缩液(6840μmol/L),由Sigma公司提供胆红素纯品,按胆红素标准液配制方法配制[4].
3)脂血:以甘油三酯浓度表示.
2　结 果
1)ACL Futura plus凝血仪测PT时凝血活酶的ISI值,仪器标定凝血活酶ISI值为1.27(试剂盒标明ISI为1.35),ISI标定前后INR值测定结果对手工法的变异系数分别为13.4%(P<0.01)和4.8%(P>0.05).经ACL Futura plus凝血仪测定及手工法检测PTR对数值的结果分别为:1.59±
1.04和1.72±1.11( x±s).
2)用109mmol/L枸橼酸钠抗凝血浆室温4h 与时温1h测PT,无统计学意义,P>0.05.室温6 h与时温1h测PT,有高度统计学意义,P<0.001.置4℃6h与置室温1h测PT,无明显差异,P> 0105.置-10℃24h与室温1h测PT,有高度统计学意义,P<0.001(见表1).
表1　不同放置时间和温度对PT的影响
Tab.1The effect of stored time and tem perature on PT re sult t/℃　t/h x P
25　114.24
25　414.71>0.05
25　617.62<0.001
4　614.90>0.05
-10　2416.13<0.01
3)统计学处理表明,3种离心速度1000r/min, 2000r/min,3000r/min离心15min后,测PT,无明显差异,P>0.05.抗凝剂与血液的关系对PT的影响明显,见表2.
表2　抗凝剂与血液比例对PT的影响
Tab.2　The proportion effect of trisodium citrate and blood on PT re sult
比例Proportion x P
1∶912.86
1∶615.22P<0.001
1∶1216.43P<0.01
4)干扰性试验:为了减少基体效应,3种干扰物分别用稀释血清配制成6个不同浓度的溶液,然后再与血浆按比例1∶9混合,用血凝仪测定,取2次的均值,干扰计算用影响度[5]表示,影响度为{(测定值-未加干扰物测定值)/未加干扰物测定值}×100%.可接受的变异系数(CV)不得超过5%.结果见表3和表4.
表3　干扰物对PT的影响
Tab.3　The effect of interfering substance s on PT re sult
项目Item ρ(血红蛋白Hemoglobin)/(g・L-1)
012345
ρ(胆红素Bilirubin/(μmol・L-1)
073.8136.8272410684
t(PT)/s1111.111.111.111.111.111.311.511.812.312.312.4影响度/%E ffect values/%00.90.90.90.90.90 1.8 4.48.18.89.7表4　甘油三酯对PT的影响
Tab.4　The effect of triglyceride s on PT re sult
项目Item c(甘油三酯Triglycerides)/(mmol・L-1) 0 2.3 3.5 5.09.222.2
t(PT)/s11.311.110.39.59.39.0
影响度/%
E ffect values/%
0-1.8-8.8-15.9-17.7-20.4 3　讨 论
1)目前本测定方法是监测口服抗凝剂药物的主要方法,但是测定受很多因素影响,其中凝血活酶试剂的种类(组织来源)和质量(敏感性)的影响很大,当使用秒、活动度或比值等报告结果时,凝血活酶试剂不同可导致测定结果的不同,这种情况对指导临床口服抗凝治疗有一定的危险性,因此凝血活酶试剂必须标明ISI值,此数值愈低试剂愈敏感,精密度也愈高.PT值按国际标准化比值(INR)报告[6], INR系统的本质是通过国际参考凝血活酶(interna2tional reference preparation,IRP)标定临床应用的凝血活酶ISI值,计算PTR值.从理论上看,这种方式可以完全克服检测过程中因凝血活酶的不同给实验带来的时间误差.但检测INR值的过程中,凝血活酶ISI值的准确程度直接影响INR检测结果的可靠性.INR检测系统中,各数值的测定均是依赖手工法进行的,包括凝血活酶ISI值的标定.本实验对自动化仪器与手工法标定的ISI值进行了比较.其原理是根据不同的凝血活酶测定同一份标本PTR 的对数值呈线性相关;实验中将仪器测定作为一种未知ISI值的凝血活酶,将其测定的PTR对数值对手工法测定的结果进行比较.实验结果表明,凝血仪标定的ISI值均有异于厂家的手工法标定值,PTR 对数值与手工法测定的结果也有显著差别,说明自动化凝血仪对手工法标定的凝血活酶ISI值会产生一定的影响,说明ISI标定前后仪器测定INR值有差异,表明对测定仪器的ISI进行标定,用标定的
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第5期翟洪顺,等:凝血酶原时间标准化及干扰因素的研究
ISI值进行INR的计算,可克服因仪器本身的误差对凝血活酶ISI的影响,直至对INR计算结果的影响.研究表明,手工法标定的凝血活酶ISI值不适合用于PT的自动化检测报告INR值.建议在应用自动化仪器检测PT时,为保证其INR值报告的时间可比性,须用校正原系统独立的ISI计算INR值,以克服仪器自身的误差对INR检测系统带来的干扰.
2)统计数据表明:离心速度对PT的测定影响不大,可能因为血小板的数量并不影响PT的测定,因此不同试剂盒的离心速度和离心时间不尽相同,所以离心速度无须严格控制.抗凝剂与血液比例不同,对PT有明显影响,以1∶9比例最佳,因此临床抽血要严格掌握.当红细胞比积<20%或>55%时对PT有影响.实践表明,须调整抽血量或抗凝剂量较为合适.方法是:0.008155血液毫升数5(100-比积)=抗凝剂毫升数.实验表明,室温保存4h,PT仅延长0.46s,4℃放置6h,PT延长0.7s,故在日常工作中,若不能及时检查PT,标本在室温不得超过4h,4℃保存不得超过6h.实验表明,轻度溶血标本对测定影响不大,肝素、胆红素、甘油三酯均有干扰,当血红蛋白>100 mg/L,肝素>1mg/L,总胆红素>136.8μmol/L,甘油三酯>3.5mmol/L时尤为显著.在实际工作中,应尽量避免溶血标本或重新抽血后再测定,对脂血或黄胆标本来说,应该先澄清或去黄胆,然后再上机分析,以减少对测定结果的影响.
参考文献:
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[6]ICSH/ICTH.Recommendation for Re porting Prothrombin
Time in Oral Anticoagulant Control[J].Clin Pathol,1985, 38:133～134.
E ffect of Interfering Substance s
on Prothrombin Time and Standardization
Zhai H ongshun,Zou Dexue
(Cent ral Hospital of S henz hen City,S henz hen518036,Chi na)
Abstract:objective　To observe the effect of interfering substances and thromboplastin on prothrombin time (PT).Methods　ISI values are corrected on the coagulometer systems with unknown ISI values of thromboplastin to compare INR result of corrected and no2corrected ISI values on the coagulometer systems and manual method.R esults　1.35ISI(IL Manual assay)of tissue thromboplastin may corrected1.27on coagulometer systems,There are significant differences in INR values between instrument method and manual method before ISI values are corrected(CV=13.4%P<0.01)and there are no significant differences after corrected ISI values.Auto2coagulometer system affected ISI values which measured by manual method(CV= 4.8%P>0.05).It is better to draw nine parts freshly venous blood into one part trisodium citrate and to measure in4hour,PT result are affected by2excess heparin,hemoglobin,triglyceride,bilirubin in the plasma assayed.Conclusion　Caution the effect of interfering substances on PT,INR values of prothrombin time are measured by using coagulometer systems with corrected ISI values that may eliminate the effect of instrumentation error itself on INR system.
K ey w ords:Coagulometer system;Prothrombin time;ISI;Interfering substances
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