高效液相色谱法检测食品中山梨酸的方案设计

高效液相色谱法检测食品中
山梨酸的方案设计
食品1002班李斯语学号：201035090206
一实验目的：
（1）进一步熟悉运用高效液相色谱的基本结构及操作方法。

（2）提高实验设计能力，以解决实际问题。

二实验原理：
样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

三实验仪器及试剂
高效液相色仪(配有紫外检测器），微量进样器，超声波发生器，溶剂过滤器及过滤膜，六通阀（20μL定量环）容量瓶（10ml，10个），离心机。

甲醇：色谱纯；其余试剂：分析纯；实验用水电导率≤5μs/cm。

稀氨水1＋1：氨水加水等体积混合。

乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜0.45μm过滤。

碳酸氢钠溶液20g/L：称取2g碳酸氢钠优级纯，加水至100mL，振摇溶解。

山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液20g/L 5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，
山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

山梨酸标准使用溶液：取山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL 容量瓶中，加水至刻度。

此溶液含山梨酸0.1mg/mL。

经滤膜0.45μm 过滤。

四实验方法及步骤
1.样品处理
称取5.00～10.0g果汁类样品于100mL容量瓶中，加入约20mL 水，摇匀，超声10min。

用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。

2.高效液相色谱参考条件
色谱柱：C18 柱，5μm， 4.6mmх250mm或相当者。

流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液（10：90）。

流速：1mL/min。

进样量：20μL。

检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。

柱温：30℃
根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

五、实验数据记录与处理
1、记录实验条件。

2、打印山梨酸色谱图。

3、根据山梨酸色谱图中信息计算样品中山梨酸的含量。

1000V M 1000
V A X 1⨯∙⨯∙=
式中X:样品中山梨酸的含量g ／kg 。

A:进样体积中山梨酸的含量mg 。

V:样品稀释液总体积ml 。

V 1:进样体积ml 。

M: 样品质量g 。

结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。

允许差：相对相差≤10%。

附录：
山梨酸的结构式
山梨酸的物理性质：
名称 化学式 分子量 密度
熔点/℃ 沸点/℃ 闪点/℃ 山梨酸 C 6H 8O 2 112.13 1.204
132-135 228 127
性状：白色针状或粉末状晶体
溶解情况：微溶于水，能溶于多种有机溶剂。

用途：对酵母、霉菌和许多真菌都具有抑制作用。

是高效无毒防腐防
霉剂。

用于人类食品、动物饲料、化妆品、医药、包装材料和橡胶助剂等。

制备或来源：由巴豆醛与乙烯酮缩合，生成聚酯，再分解而得。