邻苯二甲醛的消毒灭菌效果研究

邻苯二甲醛 (简称 O PA) 是国外近年来研究出 的一种新型的化学消毒剂 ,1999 年由美国 FDA 批 准使用 。国外研究表明 ,O PA 具有优良的杀灭微生 物的能力 ,可迅速杀灭细菌繁殖体 、细菌芽胞和真菌 等微生物 。但在国内 ,O PA 消毒和应用方面的研究 尚未见报道 。为了解 O PA 对细菌 、真菌 、芽胞的杀 灭效果以及对医疗器械的消毒灭菌效果 ,我们进行 了有关的实验 ,现将结果报道如下 。
表 3 O PA 对医疗器械的消毒与灭菌的模拟现场试验结果
作用时间 ( min)
60
90
试验组平均杀灭率 ( %)
991 96
1001 00
阳性对照组平均回收菌数 ( CFU/ ml)
11 4 ×106 11 7 ×106
3 讨 论
本组试验选用金黄色葡萄球菌 A TCC6538 、大 肠埃希菌 A TCC8099 、铜绿假单胞菌 A TCC15422 、 白色念珠菌 A TCC10231 、枯草芽胞杆菌黑色变种芽 胞 A TCC9372 作为试验菌株 ,是因为它们分别是细 菌繁殖体中化脓性球菌 、肠道菌 、医院感染中最常分 离的细菌 、空气中细菌和细菌芽胞的代表 。结果表 明 ,01 55 %邻苯二甲醛 ( O PA) 不仅对细菌繁殖体 , 而且对真菌 、细菌芽胞也具有强大的杀灭作用 。
2 结 果
21 1 阴性对照组 中和剂 、PBS、无菌水 、培养基等 所有消毒阴性对照组均无菌生长 。 21 2 杀灭作用 中和剂试验结果表明 ,所用中和剂 可有效地中和 O PA 消毒剂对微生物的杀灭作用 , 见表 1 。
试验菌种
A TCC 6538 9372
表 1 O PA 的中和试验结果
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Chin J No socomiol Vol. 15 No . 6 2005
化剂协同增效 ,进一步提高了其杀菌能力 。 使用中的 OPA 是一种基本无味的溶液 ,对工作
人员眼、鼻刺激性小 ,这一点明显优于戊二醛 。国外 研究发现 ,OPA 的毒性较戊二醛低 [3] 。我们知道 ,戊 二醛对皮肤和黏膜有一定的刺激性和致敏性 ,并有一 定的致畸 、致突变和致癌作用[4] 。通常 ,醛类的毒性 与分子量成反比 。高纯度戊二醛有微弱的刺激性气 味、毒性较低。但由于其生产过程多采用水解法 ,水 解产物中含较多的分子量相近的副产物 ,提纯工艺复 杂 ,出于成本考虑 ,国产戊二醛往往溶解了大量的甲 醛 (醇) 、乙二醛等小分子醛 ,使其毒性 、刺激性大大增 加 。而邻苯二甲醛生产过程是在苯环上直接接入醛 基 ,并可提纯为晶体 ,故 OPA 毒性较低。
Disinfection and Steril ization Effect oU Tie2ying , HU AN G De2ho ng ( Guan g don g P rovi nci al Peop le′s H os pi t al , Guan g z hou 510080 , Chi na)
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Chin J No socomiol Vol. 15 No . 6 2005
·论 著 ·
邻苯二甲醛的消毒灭菌效果研究
侯铁英1 , 黄德弘2
(1. 广东省人民医院 , 广州 510080 ; 2. 广州市中医医院 , 广州 510130)
摘要 : 目的 探索邻苯二甲醛的消毒灭菌效果 。方法 用标准菌株作定量杀菌试验 。结果 邻苯二甲醛作用 60 min ,细菌杀灭率达 991 90 % ;作用 90 min ,细菌杀灭率达 100 %。结论 邻苯二甲醛是一种新型 、快速 、高效消 毒剂 。 关键词 : 邻苯二甲醛 ; 灭活 ; 消毒灭菌 中图分类号 : R187 + . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 100524529 (2005) 0620654203
收稿日期 : 2005201208 ; 修回日期 : 2005203228
11 21 1 菌悬液的制备 分别取上述试验菌种第 3 ～14 代营养琼脂培养基斜面 24h 新鲜培养物和枯 草芽胞杆菌黑色变种芽胞 (冰箱储存) ,用含 1 %蛋 白胨的磷酸缓冲液 ( PBS) 稀释制备成菌量为 107 ～ 108 CFU/ ml 的菌悬液 。 11 21 2 中和剂鉴定试验 以金黄色葡萄球菌和枯 草芽胞杆菌黑色变种芽胞为试验菌进行试验 。试验 分为 6 组 : (1) 消毒剂 + 菌悬液 。(2) (消毒液 + 菌悬 液) + 中和剂 。(3) 中和剂 + 菌悬液 。(4) (消毒剂 + 中和剂) + 菌悬液 。(5) 稀释液 + 菌悬液 。(6) 稀释 液 + 中和剂 + 培养基直接培养 ,连续试验 3 次 。评 价标准 : (1) 组无试验菌 ,或仅有极少数试验菌菌落 生长 。(2) 组有较 (1) 组多 、但明显少于 (3) 、(4) 、(5) 组 。(3) 、(4) 、(5) 组有相似量试验菌生长 ,回收菌在 (1 ×107 ) ～ (5 ×107 ) CFU/ ml 之间 ,且其组间菌落 数误差率 ≤15 %。(6) 组无菌生长 。符合以上全部 条件 ,可判定中和剂及其使用浓度合格 。 11 21 3 细菌定量杀菌试验 在 (20 ±1) ℃水浴环境 条件下进行定量杀菌试验。试验分为两组 :试验组取 各试验菌悬液 01 5ml 加入 015ml 3 %无菌小牛血清白 蛋白溶液混匀作用 5min 后 ,再加入 410ml 消毒剂作 用至 10 、60 、90 、120min ,分别取 015ml 试验菌与消毒
表 2 O PA 的细菌定量杀菌试验结果
试验菌种
阳性对照组菌落数
不同时间 ( min) 平均杀灭率 ( %)
( ×107 CFU/ ml) 10
60
90 120
金黄色葡萄球菌
11 7
991 99 1001 00 1001 00 1001 00
大肠埃希菌
11 5
1001 00 1001 00 1001 00 1001 00
各组回收菌数 (CFU/ ml)
12
3
4
5
3 、4 、5 组 间误差率 6 ( %)
64 312 21 9 ×107 21 4 ×107 21 7 ×107 0 61 6
102 484 31 8 ×107 31 6 ×107 41 4 ×107 0 71 9
21 3 细菌定量杀菌试验 在 20 ℃条件下 ,O PA 作 用 60min 可完全杀灭细菌繁殖体 ,对枯草芽胞杆菌 黑色变种芽胞的平均杀灭率为 991 94 % ;作用 90min 可完全杀灭细菌芽胞 ,见表 2 。 21 4 有机物影响试验 在 10 %小牛血清含量情况 下对 O PA 杀灭细菌繁殖体无影响 。 21 5 模 拟 现 场 试 验 O PA 消 毒 液 作 用 6 0 min ,对人工污染于止血钳齿部上的枯草芽胞杆
Abstract : OBJECTIVE To st udy t he disinfectio n and sterilization effect s of ort ho2p ht halaldehyde ( O PA ) . METHODS A quantitative suspension inactivation effect test wit h standard bacteria st rains was applied. RESUL TS Result s showed t hat wit h a 60 minute contact time O PA could kill 991 90 % bacteria , while wit h a 90 minute co ntact time O PA could kill 100 % bacteria. CONCL USIONS This st udy indicated t hat O PA is an effective , new , rapid disinfectant . Key words : Ort ho2p ht halaldehyde ; Inactivation ; Disinfection and sterilization
低浓度 ( 01 55 %) 的 O PA 具 有 很 强 的 杀 菌 活 性 。我们认为 ,作为醛类的一种 ,O PA 杀灭微生物 的机理与戊二醛相似 ,主要依靠其自由醛基的烷基 化作用 ,直接或间接作用于生物蛋白质分子的不同 基团 , 使其失去生物学活性 , 从而导致微生物死 亡[1] 。一般来讲 ,决定醛类活性主要有两个条件 :一 是分子内醛基的距离 ,距离越大 ,醛类活性越强 ;二 是分子间的聚合倾向 ,它与醛类活性成反比 ,第 2 点 是其中的决定因素 。在水溶液中 ,戊二醛分子内醛 基距离近 ,单体活性较高 ,但其分子间多以醛基聚合 形式存在 ,裸露的自由醛基数较低 ,且极易受溶液酸 碱度的影响 。与之相反 ,O PA 分子内醛基距离近 , 单体活性稍低 ,但其分子间聚合倾向较低 ,多以单个 分子存在于水溶液中 ,相同浓度 O PA 的游离醛基 数要大大高于戊二醛 ,自由醛基能充分发挥消毒效 果 。故 O PA 的使用浓度较低 、性质较稳定 、不受溶 液 p H 值影响 、使用方便 (不需活化) 。同戊二醛相 比 ,O PA 具有作用时间短 、使用浓度低 、性质稳定等 优点 ,这在国外也有报道[2] 。此外 ,健之素 O PA 是 复方产品 ,主要通过复合醇类 、双长链季铵盐类与乳
中华医院感染学杂志 2005 年第 15 卷第 6 期
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剂混合液加入 415ml 中和剂中 ,混匀作用 10min 去除 消毒剂后 ,取 110ml 样液接种平皿 ,倾注培养基并混 匀 ,于 37 ℃恒温培养 48～72h (细菌繁殖体培养 48 h , 枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞培养 72h) ,计菌落数 ,计 算杀灭率 ;阳性对照组用 PBS 代替消毒液进行平行 试验 ;中和剂、培养基直接培养作为试验阴性对照 。 以上试验 ,重复 3 次。评价标准 : 对试验菌杀灭率 ≥99190 %为消毒合格 ,杀灭率 100 %为灭菌合格。 11 21 4 有机物影响试验 分别配制含 10 %小牛血 清 (56 ℃灭 活 30 min) 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 悬 液 与 01 55 %O PA 作定量杀菌试验比较 ,观察杀灭率 ,与 不含小牛血清的定量杀菌试验比较 ,达到标准时消 毒剂浓度增加一倍或时间延长一倍者为有影响 。 11 21 5 医疗器械的灭菌模拟现场试验 以枯草芽 胞杆菌黑色变种芽胞为试验菌 ,取 9 把截断的医用 止血钳的轴至齿端部分作为载体 。载体经脱脂处理 和压力蒸汽灭菌后 ,用枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞 的菌悬液人工污染止血钳齿部制成试验样本 ,并将 其随机分为 3 组 :试验 (1) 、(2) 组浸于消毒液中 ,在 (20 ±1) ℃水浴中分别作用 60 、90min 后取出样本 , 移至含有 10ml 中和剂肉汤的塑料试管内 ,分别于 37 ℃恒温培养 3～7d (无菌生长时 ,培养延长至 7d) , 观察结果 ;阳性对照 (1) 、(2) 组用无菌蒸馏水代替 O PA 消毒液进行对应的平行试验 。
铜绿假单胞菌
31 8
991 99 1001 00 1001 00 1001 00
白色念珠菌
21 5
1001 00 1001 00 1001 00 1001 00
枯草芽胞杆菌芽胞
41 3
911 49 991 94 1001 00 1001 00
菌黑色 变 种 芽 胞 的 平 均 杀 灭 率 为 991 96 % , 作 用 90min ,杀灭率为 100 % ,见表 3 。
1 材料与方法
11 1 材料 11 11 1 试验菌 金黄色葡萄球菌 A TCC6538 、大肠 埃希菌 A TCC8099 、铜绿假单胞菌 A TCC15422 、白 色念珠菌 A TCC10231 、枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞 A TCC9372 ,试验菌株由广东省临床检验中心提供 。 11 11 2 消毒剂 由北京健之素公司生产的 p H = 71 5 、浓度为 01 55 %的邻苯二甲醛消毒原液 。 11 11 3 中和剂 2 %甘氨酸 + 1 %卵磷脂 + 1 %吐温 80 。 11 2 方法