葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较

图 3 三种不同方法的标准曲线 Fig. 3 Standard curve of different methods
结果表明，香草醛-盐酸法测定原花青素含量 有着较高的精密度（相对标准偏差为 0. 79%）和准 确度（加标回收率为 98. 1%）。该法所依赖的反应 基团为原花青素 A 环的间苯二酚或间苯三酚，儿茶 素或表儿茶素及其低聚体等都能参加反应。正丁 醇-盐酸法测得的原花青素含量偏低，仅为17 . 56 % ， 究其原因可能是由于正丁醇-盐酸法对原花青素化 学结构的依赖性大，选择性高，对于儿茶素等单体 原花青素不反应，而对于原花青素的聚合体，其花 色素反应也不可能很完全。在香草醛-硫酸法实验 过程中，硫酸的加入会引起反应体系急剧产热，从 而导致原花青素的氧化分解，这可能是其较之香草 醛-盐酸法所得结果偏低的原因所在。
第 14 卷第 2 期 2002 年 4 月
化学研究与应用 C1emicaI Researc1 and AppIicatiOn
文章编号：1004-165（6 2002）02-0230-03
葡萄籽提取物中原花青素含量 不同测定方法比较
VOI. 14，NO. 2 Apr. ，2002
姚 开，何 强，吕远平，石 碧!
相对标准偏差 （%） 1 . 80 0 . 79 2 . 44
参考文献：
［1］石碧，狄莹 . 植物多酚［M］，北京：科学出版社，2000， 126—133 .
［2］Porter L，Hrstich L，Chan B. Phytochemistry［J］，1986，25： 223 - 230 .
［3］Deshpande S，Cherycm M. . Food Sci［. J］，1985，50：905 -
910 . ［4］Foo Y，Porter L. Appita［J］，1986，3（9 6）：477 - 480 . ［5］Deshpano S，Cheryan M. . Food Sci［. J］，1987，52（2）：332
- 334 .
Comparison of determination methods for proanthocyanidin from grape-seed extracts
2.3 不同方法的测定结果 图 3a，b，c 分别是正丁醇-盐酸法（以原花青
素作标 样 ），香 草 醛-硫 酸 法 和 香 草 醛-盐 酸 法（ 以 儿茶素作标样）的标准曲线，表 2 为三种不同方法 对葡萄籽提取物中原花青素含量的测定结果。
图 1 花色素反应 Fig. 1 Reaction of producing cyanidin
（四川大学轻工与食品工程学院，四川 成都 610065）
关键词：葡萄籽；原花青素；测定方法
中图分类号：0657.32 文献标识码：A
"""
原花青素是从植物中分离得到的一类黄烷醇 单体及其聚合体的多酚类化合物，前者为黄烷-4醇或 黄 烷-3，4-二 醇，后 者 则 为 缩 合 单 宁、红 粉 和 酚酸，如下图所示。该类化合物具有生物活性，如 抗氧化和自由基清除能力等［1］，而机体内脂质氧 化和自由基的产生是引发肿瘤等多种疾病的主要 原因。国外以葡萄籽提取物中原花青素作为主要 活性成分的药品及食品营养补充剂较多，国内也 有多家 企 业 正 着 手 该 类 产 品 的 研 发 与 生 产。 目 前，关于原花青素含量的测定方法尚无统一标准， 相关文献报道也较少。本文对葡萄籽提取物中原 花青素含量测定的三种不同方法进行了对比，其 结果可为建立该产品的分析方法提供依据。
" 收稿日期：2001-08-20；修回日期：2001-11-02 基金项目：国家自然科学基金资助项目（29872025）
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第2期
姚开等：葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较
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素。对于聚合原花青素，其单元间连接键易在酸 作用下被 打 开，下 部 单 元 生 成 黄 烷-3-醇，上 部 单 元生成花色素，如图 1 所示。
YAO Kai，HE Oiang，LU Yuan-ping，SHI Bi
（College of Light Industry and Food Engineering，Sichuan University，Chengdu 610065，China）
Abstract：Three methods，n-butyl alcohol-hydrochloric acid，vanillin-hydrochloric acid and vanillin-sulfuric acid， were used to determine the proanthocyanidin from grape-seed extracts . The different methods were compared according to the choice of standard samples and the reaction theory . As a result，the vanillin-hydrochloric acid method was shown to be the best for the determination of proanthocyanidin wherein catechin was used as the standard sample，the test wavelength was 500nm，the linearity range was 10 ~ 150!g/ml，the reaction was finished at 20 1 1C for 15h，the relative standard deviation being 0 . 79% and the recovery was 98 . 1% .
配制）和 6mI 正丁醇-盐酸溶液（正丁醇 1 浓盐酸 = 95 1 5，V/V），摇匀。反应液于 95C 水浴中冷凝回流 40min 后，迅速冷却，在 546nm 波长处测定其吸光 度［2］，以甲醇代替样品溶液作为空白对照，用原花
青素（Sigma 公司，含量 98 . 5%）标准曲线计算样 品中原花青素含量。
0 . 79
线性范围（!g/ml） 10 ~ 130 10 ~ 100 10 ~ 150
232
测定方法 正丁醇-盐酸法 香草酸-盐酸法 香草酸-硫酸法
1 17 . 19 21 . 46 17 . 03
化学研究与应用
表 2 三种不同方法的标准曲线 Table 2 The results of determination for different methods
1.2 香草酸-盐酸法 将待测样品配制成 0 . 1g/L 的甲醇溶液，取其
1mI 移 入 25mI 比 色 管 内，依 次 加 入 6mI 浓 度 为 4 . 0g/100mI 的香草醛甲醇溶液和 3mI 浓盐酸，加 塞摇匀，在 20 1 1C、避光条件下反应 151 后，于 500nm 处测其吸光度［3］，以甲醇代替样品溶液作 为空白对照，用儿茶素（Sigma 公司，含量 98%）标 准曲线计算样品中原花青素含量。
香草醛-硫酸法同 1. 2 所述，以 6mOI·L- 1 硫酸 代替浓盐酸，缓缓加入到反应体系中。
Hale Waihona Puke 2 结果与讨论1 实验
1.1 正丁醇-盐酸法 将待测样品配制成浓度为 0 . 1g/L 的甲醇溶
液，取其 1mI 移入 50mI 圆底烧瓶中，然后依次加 入 0 . 2mI 2% 的硫酸铁铵溶液（用 2mOI·L- 1 的盐酸
原花青素纯度（ % ）
2
3
4
5
均值
加标回收率 （%）
17 . 66
17 . 85
17 . 86
17 . 26
17 . 56
93 . 3
21 . 70
21 . 55
21 . 78
21 . 36
21 . 57
98 . 1
17 . 17
17 . 70
16 . 82
17 . 78
17 . 30
91 . 4
第 14 卷
2.2 标准物选择 由于原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿
茶素单体及其聚合体形成的多酚化合物，这就涉 及到选择什么样的标准物建立标准曲线。基于实 验原理的不同和葡萄籽提取物中原花青素主要是 以儿茶素、表儿茶素及其二聚体为主。由于正丁 醇-盐酸法对儿茶素等单体不反应，故选择原花青 素作标准物，而香草醛法选择原花青素或儿茶素 作为标准物较为合理。表 1 为选用不同标准物对 云南高原生物资源开发有限公司葡萄籽提取物样 品中原花青素含量 5 次平行检测结果。可以看 出，香草醛-盐酸法选用儿茶素作为标准物有较低 的相对标准偏差和较宽的线性范围。
《化学研究与应用》编辑部
Key words：grape-seed；proanthocyanidin；determination
（责任编辑 李 方）
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更正
本刊第 14 卷各期封面上的“Ulrish”应为“Ulrich”，特此更正。并向《Ulrich Directory》及 广大读者致歉。
2.1 实验原理 正丁醇-盐酸法测定原花青素的原理是基于
其花色素反应，即原花青素在热酸作用下能产生 红色物质，从而可用分光光度法进行测定。对于 单体原花青素黄烷-3，4-二醇来说，C-4 位具有极 强的亲电性，其醇羟基与 C-5，C-7 上的酚羟基组 成一个苄醇系统，使得 4 位碳易于生成正碳离子。 在强酸作用下，正碳离子失去质子，氧化生成花色
香草醛法的原理在于酸性条件下，原花青素 A 环的化学活性较高［4］，其上的间苯二酚或间苯 三酚可与香草醛发生缩合，产物在浓酸作用下形
成有色的正碳离子，如图 2 所示。采用分光光度 法测其吸光度，根据标准曲线即可得到样品中原