胃癌Her检测

+
可接受赫赛汀治疗
Herceptin EU SmPC: humandocs/PDFs/EPAR/Herceptin/.
• 明视野方法优先
评分标准
For internal use only
明视野技术有利于发现HER2阳性肿瘤区域
• 相比乳腺癌，着色异质性 在胃癌和胃食管结合部癌 更常见1
• 胃癌中， 5–30%病例会出 现肿瘤异质性1-3
Image courtesy of Prof. G Viale
1. Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797–805.
肿瘤细胞团有弱到中度的基侧膜、侧 膜或完全膜染（不管染色的肿瘤细胞
所占整体百分比）
2+
≥10% 肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或 完全膜的强染色
肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的 强染色（不管染色的肿瘤细胞所占整
体百分比）
3+
阴性 可疑 阳性
Herceptin EU SmPC: http://www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/ Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.
胃癌组织学类型(WHO2000)：
1．管状腺癌（adenocarcinoma）最多见。 分高、中、低分化，此型癌多为高分化，恶性 度较低，转移较晚。
2．乳头状腺癌（ papillary form）：腺腔内 出现许多乳头。
3．印戒细胞癌（signet-ring cell）：癌细胞 胞浆内出现大量偏酸性粘液，常将胞核挤压于 癌细胞浆之一侧，形似戒指，故称之为印戒细 胞癌。
胃癌HER2检测的特性
For internal use only
组织采集
• 足够数量的有代表性的活 检标本（推荐6–8个）
• 有代表性的手术标本
组织形态
• 肿瘤异质性高(HER2-阳性 位点范围小)
• FISH检测应筛查整个切片
HER2检测流程
检测耗时
评分标准
胃癌HER2检测的特性
For internal use only
Ming（1977）：膨胀型 VS 浸润型
胃癌HER2检测
荧光原位杂交法原理 Fluorescence in situ Hybridisation (FISH)
HER2 gene
HER2 gene
HER2 gene
双链靶基因
变性的单链DNA 与荧光标记探针复 性\产生荧光信号
Probe for cent. 17
组织采集
• 足够数量的有代表性的活 检标本（推荐6–8个）
• 有代表性的手术标本
检测耗时
组织形态
• 肿瘤异质性高(HER2-阳性 位点范围小)
• FISH检测应筛查整个切片
HER2检测流程
• 和乳腺癌相似 • 首先采用免疫组化法（IHC） 检测
• HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+
胃癌Her检测
HER2基因
➢ HER2，又名HER2/neu，c-erbB-2，表皮 生长因子受体（EGFR）家族成员；
➢ 原癌基因，位于17q21，编码相对分子量 185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体， 表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；
➢ 通过参与信号传道通路的一系列活动影响细 胞的增殖与分化。
隐约可见染 色(40x 放大
倍率)
染色强度 (可见的不可疑的膜染色)
强染色 (2.5x–5x 放大倍 率)
评分为3+
弱到中度染色 (10x–20x 放大倍
率)
评分为2+
必须至少有: •活检标本中5个 (成簇) 细胞染色 •手术标本中10%的肿瘤细胞染色
胃癌HER2检测的特性
For internal use only
细mRNA 转录 3 = 细胞表面受体蛋白表达 4 = 细胞外受体功能域释放
➢ HER2癌基因的致瘤机制：
• 抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭 力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。
➢研究表明： • 30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增 /
过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等); 胃癌中HER-2/neu基因的过表达率为7%27%(-45%)，通过FISH检测基因扩增率为 10%-20%
Probe for Her-2/neu
Gene amplification due to multiple copies of chr. 17 (Aneuploidy)
True Gene amplification
HER2 probe
CEP 17 probe
HER2 / CEP17 HER2 / CEP17 HER2 / CEP17
手术标本 – 染色结果
活检标本 – 染色结果
评分
HER2 过表达情况评估
无反应或<10%肿瘤细胞膜染色 无反应或任何肿瘤细胞无膜染色
0
阴性
≥10% 肿瘤细胞微弱或隐约可见膜 染色; 细胞仅有部分膜染色
肿瘤细胞团微弱或隐约可见膜染色
（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分 比）
1+
≥10%
肿瘤细胞有弱到中度的基侧 膜、侧膜或完全膜染
边缘挤压所 至的假象
肿瘤组织 内
排除保存情况差的肿 瘤组织
排除非特异性染色
非肿瘤组 织内
肠型化生、 再生（邻近
溃疡）
胞浆、核、仅底边、腔缘部分 着色
IHC: 评分标准
For internal use only
评分为0 评分为1+
无染色 (40x 放大倍率)
特异性膜染色 (明显的 & 细胞间的)
完全膜染色或基侧膜、侧膜染色
色素原位杂交法原理
chromogenic in situ hybridization (CISH)
Denature target DNA and hybridise probe
Primary antibody Secondary antibody
binds to the probe
(with unactivated
IHC染色强度对应的放大倍率
For internal use only
• 为了分辨明显的细胞间（完全、底侧膜或侧膜）的膜染色，所需的 显微镜放大倍率（~ 工作距离）
评分
3+ 2+ 1+ 0
放大: x-倍
2.5x – 5x 10x – 20x 20x – 40x 40x
染色强度
强染色 (无放大) 弱到中度染色 隐约可见 (更高放大倍数) 阴性
组织采集
• 足够数量的有代表性的活 检标本（推荐6–8个）
• 有代表性的手术标本
检测耗时
• 检测所需时间不应该超过5个工 作日 (晚期胃癌进展十分快)
• 需应用多学科方法
组织形态
• 肿瘤异质性高(HER2-阳性 位点范围小)
• FISH检测应筛查整个切片
HER2检测流程
• 和乳腺癌相似 • 首先采用免疫组化法（IHC） 检测 • HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+
2. Rüschoff J, et al. der pathologe 2010; 31:208–17.
3. Rüschoff J, et al. Virchovs Archive 2010; accepted for publication.
胃癌HER2检测的特性
For internal use only
For internal use only
完全、基侧膜或侧膜染色反应
• HER2阳性胃癌和胃食管结 合部癌可能表现为基侧膜、 侧膜或完全膜染
• 底侧膜、侧膜染色的发生 通常与低分化胃腺癌细胞 结构有关
Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797–805. Image reproduced courtesy of TARGOS Molecular Pathology GmbH.
组织采集
• 足够数量的有代表性的活 检标本（推荐6–8个）
• 有代表性的手术标本
检测耗时
组织形态
• 肿瘤异质性高(HER2-阳性 位点范围小)
HER2检测流程
• FISH检测应筛查整个切片
• 和乳腺癌相似 • 首先采用免疫组化法（IHC） 检测
• HER2-阳性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+
• 明视野方法优先
评分标准
• ≥10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧 膜强染或完全膜强染定义为IHC 阳性
• 不界定活检标本染色的肿瘤细 胞占总体肿瘤细胞的百分比： 需要5个 (成簇) 细胞染色
For internal use only
可接受赫赛汀胃癌治疗的欧盟标准
肿瘤标本 IHC
0
+1
+2
+3
FISH
–
HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径
生长因子（配体）
细胞膜
信号传导 至细胞核
接合部
酪氨酸激酶 活性部分
细胞浆
细胞核
癌基因活化
细胞分裂
HER2过度表达：正常状态的10-100倍
细胞质
正常
C
扩增/过度表达
3
B
A
细胞膜
A = HER2 DNA B = HER2 mRNA C = HER2 receptor protein
胃癌HER2检测
胃癌HER2检测
胃癌HER2检测的流程
For internal use only
组织采集
• 足够数量的有代表性的活 检标本（推荐6–8个）
• 有代表性的手术标本
组织形态
HER2检测流程
检测耗时
评分标准
多处活检的必要性
For internal use only
Image courtesy of Prof. G Viale
放大倍率和HER2评分
IHC 3+
5x
IHC 2+
10x
20x
甚至无需显微 镜也可见
For internal use only
IHC 1+
40x
无需放大视野可见膜染色
需更高的放大倍数
需高倍放大
5x
20x
40x
For internal use only
IHC: 样本排除标准
HER2检测ICH法染色的活检/手术标本
ratio = 1
ratio = 1
ratio = 7
No amplification No amplification; HER2 gene
tetraploidy
amplification
(ratio >2.2)
比值 <2.2 提示Her-2无扩增
比值 提示Her-2有扩增
比值介于～临界值
Aneusomy, Not amplified
• 明视野方法优先
评分标准
• ≥10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧 膜强染或完全膜强染定义为IHC 阳性
• 不界定活检标本染色的肿瘤细 胞占总体肿瘤细胞的百分比： 需要5个 (成簇) 细胞染色
For internal use only
胃癌HER2检测的评分标准
For internal use only
4…….
Lauren分型(1965): 根据胃癌细胞形态和胃癌 组织中粘液性质将胃癌分为肠型和弥漫型两大 类。
肠型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多见，发生于肠 化生上皮；肠型胃癌多见于老年患者，恶性度较低， 分化程度差别大，与肿瘤大小反比，组织学上多为 乳头状腺癌或腺管状腺癌。
弥漫型胃癌中中性粘液多见。弥漫型胃癌多见于青 年人，恶性度较高，肉眼类型多为皮革胃，组织学 上多为粘液细胞癌（印戒细胞癌）及未分化癌。
visualisation agent)
binds to primary antibody
CISH：无HER2基因扩增
CISH： HER2基因低扩增
CISH： HER2基因高拷贝扩增
组织固定 方法
IHC检测:
抗原修复 有/无
变异性
评分标准
抗体选择
IHC vs FISH
C-erbB2 score 0
1
2
3
Gene amplification by FISH 4%
7%
10-35%
>90%
Fig. 1 HER-2 protein expression evaluated by immunohistochemistry (A-C) (original magnification 200) and HER-2 gene amplification assessed by FISH (D-F) (original magnification 1000) in gastric carcinoma tissue. A and D, 3+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. B and E, 2+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. C and F, 1+ by immunohistochemicalstaining with HER-2 amplification.