中图版高中生物选修1 1.3测定微生物的数量教案设计

测定微生物的数量
【教学目标】
1．测定某种微生物的数量。

2．用土壤浸出液进行细菌培养，仅以尿素为氮源，测定能生长的细菌的数量。

3．了解测定微生物数量的原理和方法。

4．观察菌落数，进行微生物数量的统计。

5．理解稀释平板计数法的原理和操作过程。

【教学重难点】
1．了解测定微生物数量的原理和方法。

2．观察菌落数，进行微生物数量的统计。

3．理解稀释平板计数法的原理和操作过程。

【教学过程】
一、测定微生物数量的方法
（一）精读教材、自我领悟
1．测定微生物数量的方法
测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。

2．直接计数法
（1）常用方法：
直接计数法中常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。

（2）特点：
该法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。

其缺点是难以计数微小的细菌。

这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。

3．间接计数法
间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法。

在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。

（二）质疑解惑、合作探究
1．直接计数法
（1）常用方法：显微镜直接计数法。

（2）过程：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。

根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。

（3）优点：所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。

（4）缺点：难以计数微小的细菌。

2．间接计数法
（1）间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法。

（2）过程：将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。

再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。

经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个菌落就代表着一个微生物个体。

统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。

（3）优点：在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。

（4）缺点：由于死亡的细菌不能繁殖产生菌落，所以稀释平板计数法只计数活菌数，故又称活菌计数法。

特别提醒：
设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。

为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。

二、土壤中好气性细菌的计数
（一）精读教材、自我领悟
1．测定土壤含菌量的意义：
土壤中微生物的种类和数量极其丰富，它们对提高土壤肥力有重要作用，因此，测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。

2．制备土壤稀释液：
取土壤表层5～10cm处的土样。

称取1g土样，放入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制成102倍的稀释液。

3．取样及倒平板：
用无菌移液管3支，分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液各0.2mL，注入到相应编号的培养皿中。

将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化、冷却至45～50℃左右时，倾入到上述各培养皿中。

4．培养：
待这些接种好的平板培养基冷却后，倒置放入28～30℃的恒温箱中培养24～36h，直至长出菌落为止。

5．选取具有合适菌落的稀释倍数并计数：
细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜。

霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。

6．计算：
将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。

每克土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均数÷细菌培养时所用的稀释液体积×稀释倍数（二）质疑解惑、合作探究
1．土壤中好气性细菌的计数
制备土壤稀释液、取样、倒平板、培养、观察记录。

特别提醒：
移液时，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，让菌液混合均
匀并减少稀释中的误差。

每配一个稀释度要换用一支移液管。

2．土壤中分解尿素的细菌的计数
（1）土壤取样：
①土壤微生物大约70～90%是细菌。

②细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3～8cm的土壤层。

（2）样品处理：
样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300之间，便于计数。

（3）微生物的培养与观察：
将培养基平板放置于30～37℃温室中培养1～2d，每隔24h统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。

（4）细菌的计数：
当菌落数目稳定时，取同一条件下的至少3个平板进行计数，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

三、课堂小结。