洋葱多糖及其含量的测定_李茵萍

[作者简介]　李茵萍(1973-),女,实验师,主要从事有机分析
化学研究。

【化学测定方法】
洋葱多糖及其含量的测定
李茵萍1
,昆杜斯 托合塔森2
,孙　莲
3
(1.新疆师范大学生命与环境科学学院,乌鲁木齐　830054;
2.新疆师范大学教务处,乌鲁木齐　830054;
3.新疆医科大学药学院,乌鲁木齐　830054)
[摘要]　目的:对洋葱中的多糖进行提取与测定。

方法:采用超声法对洋葱中的多糖进行提取,并采用苯酚-硫酸法[1],
测定其多糖的含量。

结果:多糖的含量为43%,平均回收率为98.5%,RS D =2.5%。

结论:结果表明,采用超声波提取洋葱中的多糖,提取时间短,此方法比用沸水提取的方法简单,快速,灵敏度高。

[关键词]　洋葱;超声波;多糖;分光光度法
[中图分类号]　O 657.3 [文献标识码]　A [文章编号]　1004-8685(2006)03-0300-02 洋葱,百合科植物,多年生草本,具有强烈的香气。

又名玉葱、葱头,鳞茎大[2]。

随着近年来人们对绿色天然食品的崇尚,我们对洋葱多糖进行了测定,洋葱是一种在我国广泛种植的植物,多糖含量丰富。

洋葱除含一般营养素外,还含有杀菌利尿降脂降压抗癌等生物活性物质。

近年来医学临床和研究证明,洋葱具有多种较高的生理药用价值,在营养食疗上被推崇为多功能的降脂降压抗癌的营养保健食品。

我们初次利用超声波提取洋葱中的水溶性多糖,超声波提取是一种利用外场介入强化提取过程,具有被浸提的活性物质活性不被破坏,提取时间短,收率高,条件温和等优点。

并采用了分光光度法测定其含量。

1　材料与方法
1.1　仪器与试剂
旋转蒸发仪RE -52A 型(上海安亭生化仪器厂);KQ 3200DB 超声波发生器(昆山电子有限责任公司);721E 型分光光度计(上海光谱仪器有限公司);真空干燥DZF -6030(上海一恒);电子分析天平(瑞士梅特勒);葡萄糖(AR ,105℃干燥至恒重);洋葱(市售新疆的哈密白皮,洗净晾干粉碎后过40目筛);其他试剂均为分析纯。

2　实验部分
2.1　葡萄糖标准溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品29.4mg ,置250m l 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为0.1176mg /m l 的标准溶液,闭光保存。

2.2　5%苯酚试剂的制备
取苯酚100g ,加入0.1g 铝片和0.05g N a 2CO 3,在176℃～178℃,常压蒸馏,空气冷凝,得白色针状结晶,称取重蒸馏苯酚12.6g ,置250m l 棕色容量瓶中,取水稀释至刻度,摇匀,闭光保存。

2.3　标准曲线的绘制
精密吸取葡萄糖标准溶液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25m l ,置于25m l 的具塞试管中,分别加水至1.5m l ,再分别加入5%苯酚试剂2.0m l ,混匀。

加浓H 2S O 46.5m l ,混匀冷却至室温,置于40℃水浴中放置30m in ,取出冷却至室温,加水稀释至10m l ,混匀。

在490n m 处测定吸光度[3],得回归方程:A =0.0145+62.687C ,r =0.9998。

2.4　洋葱多糖的提取与精制
称取干燥过40目筛的洋葱粉末100g ,用95%乙醇回流提取40m in ,除去脂溶性成分和色素等,残渣挥干后于烧杯中加水700m l ,于90℃超声提取30m in ,提取3次,过滤后,合并滤液于旋转蒸发仪减压浓缩至200m l ,加入95%乙醇至含醇量为80%,静置于4℃过夜,倾出上清液,分离,得到粗多
(上接第299页)
[参考文献]
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(收稿日期:2005-11-05)
糖,将粗多糖溶解于热水中,用sevage 除蛋白(氯仿∶正丁醇=4∶1),萃取18次后,取水层,并用活性碳进行脱色,脱色后的溶液加95%乙醇至含醇量达80%,静置4℃过夜,离心,分离,沉淀用无水乙醇,丙酮,乙醚依次洗涤3次,室温下减压干燥至恒重,即得浅棕色的洋葱精制多糖[4]。

2.5　换算因子的测定
精密称取干燥至恒重的洋葱多糖14.7mg ,定容于100m l 容量瓶中配成浓度为0.147m g /m l 的洋葱多糖溶液。

精密吸取此液1.0m l ,按2.3项操作,于490n m 处测定吸光度值,根据回归方程求出多糖供试液中葡萄糖浓度,按下式计算换算因子[5],测得f =1.61(n =6)
f =W /(C ×D )
W 为多糖的质量(g );C 为多糖稀释液中葡萄糖的浓度(g /L );D 为多糖的稀释因素。

2.6　样品溶液的制备及测定
精密称取洋葱粉末0.2008g 于100m l 容量瓶中,加水80m l ,于90℃超声提取30m in ,过滤于另一100m l 容量瓶中,残渣用少量蒸馏水洗涤多次,合并后稀释至刻度,摇匀。

准确吸取此溶液25m l 于100m l 容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,按2.3项操作,于490n m 处测定吸光度值,并按下式计算多糖含量,样品中多糖的含量为43%(n =4)。

多糖含量(%)=CD f W /W 为供试液的质量(g );C 为供试液中葡萄糖的浓度(g /L );D 为供试液中的稀释因素;f 为供试液的换算因子。

2.7　精密度试验
精密吸取对照溶液1.0m l ,10份,同2.3项操作,结果RSD =2.32%。

2.8　稳定性实验
准确吸取样品溶液1.0m l ,按2.3项操作,于490n m 处测定吸光度值,每隔30m i n 测定吸光度值,连续8h ,测定结果表明,该显色反应稳定。

2.9　回收率测定(采用加标回收法)
准确吸取多糖样品溶液0.5m l 共12份,分为4组,每组3份,第1组为本底样品,于第2、3、4组分别加入浓度为0.1176m g /m l 的标准入标准葡萄糖溶液0.25、0.75、1.25m l ,按2.3项操作,测定回收率,计算得平均回收率为98.5%,RS D =2.5%(n =9)。

3　讨论
3.1　最佳测定波长的选择
精密吸取葡萄糖标准溶液1m l 按2.3项操作之后,在400～610nm 围内进行扫描,结果见图1所示,在波长为490n m 处有最大吸收,以此作为测定波长。

图1　不同波长对吸光度的影响
3.2　超声波提取对多糖产率的影响
如图2所示,相同的温度条件下,采用不同时间超声波提取和常规水提取得的多糖产率不同,超声波提取10、20、30、40m i n 的产率为20.4%、34.2%、43%、42%,采用水提2h 的产率为32.4%,超声波提取30m i n 得到的多糖产率最高,所以采用超声提取。

3.3　沉淀多糖对乙醇浓度的选择
超声波提取的滤液浓缩至200m l ,平均分成5份,分别加入95%乙醇至含醇量达50%、60%、70%、80%、90%,实验结果如图3示,实验数据表明80%的乙醇对多糖的沉淀效果最好,多糖的含量最高[6]。

图2　不同时间条件对超声波及水提洋葱多糖的影响
图3　不同浓度的乙醇对洋葱多糖的沉淀实验结果
4　小结
从实验结果来看,使用超声波提取洋葱中的多糖,在相同的温度条件下,超声提取时间要明显优于沸水提取的时间,这主要是由超生震荡引起的。

不同浓度的乙醇对洋葱多糖的沉淀也是影响多糖产率的因素之一。

本实验方法准确度和精密度较高,时间短,提取率高。

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(收稿日期:2005-12-12)。