HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量

HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦
参碱和槐果碱的含量
药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(5)一671一
HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱的含量
耿革霞一,孙英华,向柏,何仲贵
(1.沈阳药科大学药学院,沈阳110016;2.石家庄制药集团中诺药业,石家庄050051) 摘要目的:建立同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱及槐果碱含量的HPLC测定法.方法:色谱柱为Hypemil—NH柱
(4.6mm×200mm,5in),流动相为乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加入到1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇
(80:10:10),检测波长为220nm,柱温35℃,流速1.0mI?min一,进样量20.结果:槐定碱,苦参碱,槐果碱分别在13.0～
108.0ing.L～,11.4～95.2mg?L和4.6～82.1mg?L浓度范围内呈良好的线性关系,r 分别为0.9999,0.9996,0.9999.
平均回收率(n:9)分别为99.41%,100.0%,100.6%.结论:可通过HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱和槐果碱
的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子的成药的质量控制.
关键词:苦豆子总碱;槐定碱;苦参碱;槐果碱;HPLC法
中图分类号:R917文献标识码:A文章编码:0254—1793(2006)05-0671一o3 HPLCsimultaneousdeterminationofthecontentsofsophoridine, matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.
GENGGe—xia一,SUNYing—hua,XIANGBai,HEZhong—gui'
(1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;
2.ShijiazhuangPharmaceuticalGroupZhongnuoPhamaCo.,Ltd.,Shijiazhuang050051,C hina)
Abstract0bjective:ToestablishanHPLCmethodforsimultaneousdeterminationoftheconte ntsofsophoridine,
matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecuroidesL.Method:Chromatogr aphicconditionincluded
HypersilNH2(4.6mm×200mm,5p.m)columnandmobilephaseconsistingofamixtureofacetonitrile—triethyl—aminephosphatebuffer(1.0mLphosphoricacidaddedto1000mLwater,adjustedtopH2.5wi thtriethylamine)
一
anhydrousalcohol(80:10:10).Thedetectionwavelengthwas220nm.Theflowratewas1.0m L?min～.
Result:Themethodhasagoodlinearityandcorrelationcoefficient:thesophoridinewasl3.0—108.0mg?L一,the
matrinewas11.4—95.2mg?L—andthesophocarpine4.6—82.1mg?L
一.Themeanrecoveries(n=9)wel'~
99.41%,100.0%and100.6%respectively.Conclusion:Thismethodissimple,rapidandaccu rateassayforthe
determinationofsophoridine,matrineandsophocarpineintotalalkaloidofSophoraalopecur oidesL.,andsuitablefor qualitycontrolintheproductionofSophoraalopecuroidesL.
Keywords:SophoraalopecuroidesL.;sophoridine;matrine;sophocarpine;HPLC
苦豆子(Sophoraalopecuroides)为豆科槐属植
物,其味苦,性寒,广泛分布于我国的内蒙古,山西,
陕西,甘肃,新疆及西藏等地.我国苦豆子资源蕴藏
丰富,药用其根,根茎,全草及种子,具有清热燥湿,
止痛,杀虫的功效,在民间其临床应用已很久.苦豆
子中富含生物碱,其主要成分为氧化槐果碱,氧化苦
参碱,槐定碱,槐果碱,苦参碱,苦豆碱和金雀花碱等
20多种生物碱….近年来的多项研究表明其总生
物碱或其单体生物碱有多方面的生物活性,大力开
发和推广苦豆子生物碱的临床使用有很大的经济价
值和社会价值.目前已经有了关于苦豆子中生物碱
的种类及其含量分析的报道,但由于苦豆子中各生
物碱单体的化学结构和极性较接近,对生物碱单体
的分离和含量测定一直是该产品质量标准的难点.
本文建立了用HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定
碱,苦参碱,槐果碱(化学结构式见图1)3种主要
十通迅作者Tel:(024)23986320,23986321:E—mail:***************
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生物碱的方法,该方法分离度好,专属性强,准确度
高,可用于苦豆子类产品的质量控制.
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图1槐定碱(A),苦参碱(B)和槐果碱(C)的化学结构式
Fig1Thechemicalstructuresofsophoridine(A),matrine(B)andsoph? ocarpine(C)
1仪器与试药
苦豆子总碱(批号:030301,030406,030602),槐
定碱对照品(批号:2003—01),苦参碱对照品(批
号:2003—01),槐果碱对照品(批号:2003—01),氧
化苦参碱对照品(批号:2003—01)均由宁夏博尔泰
力药业股份有限公司提供,含量均为99.6%.
高效液相色谱仪[L一2130泵,AutosamplerL一
2200型自动进样器,uV—VISDetectorL一2420紫
外分光光度检测器(日本日立公司)];pHS一3C型
酸度计(上海雷磁仪器厂).
2色谱条件
色谱柱:Hypersil—NH2柱(4.6mm×200mm,
5m);流动相:乙腈一磷酸缓冲液(1.0mL磷酸加
人1000mL水中,三乙胺调pH2.5)一无水乙醇(80:10:10);检测波长:220am;柱温35oC;流速: 1.0mL?min～.
3方法与结果
3.1线性关系考察
精密称取苦豆子总碱0.1050g,置100mL量瓶中,加0.1mol?L盐酸20mL使溶解,并加流动相定容.精密吸取上述溶液1mL,置10mL量瓶中, 并加流动相定容,摇匀,用0.45m微孔滤膜滤过, 作为样品溶液.
精密称取槐定碱,苦参碱,槐果碱对照品21.6. 19.1,22.8mg,分别置10mL量瓶中,加0.1mol?
L的盐酸2mL使溶解,并加流动相定容,摇匀,作为对照品储备液I.精密吸取上述对照品储备液I 各2mL,置10mL量瓶中加流动相定容,作为对照品储备液Ⅱ.
精密吸取槐定碱,苦参碱储备液Ⅱ各0.3,0.5,
1.0,1.5,
2.0,2.5mL,槐果碱储备液110.1,0.2,
0.4,0.9,1.3,1.8mL,置10mL量瓶中,加流动相定容,摇匀,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液
20,按上述色谱条件进行分析.以质量浓度为横
坐标(),峰面积值为纵坐标(y)进行线性回归,得
槐定碱,苦参碱,槐果碱的回归方程分别为:
y:8.305×10X一1.004r=0.9999
Y:9.519×10X一1.788×10r=0.9996
Y:2.062×10X一2.645×10r=0.9999
线性范围分别为13.0～108.0mg?L～,11.4～95.2mg?L一和4.6～82.1mg?L～.
3.2精密度试验分别精密吸取槐定碱,苦参碱,
槐果碱对照品储备液lI1.9,1.8,0.3mL,置10mL
量瓶中,加流动相定容得混合对照品溶液.以
0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液20L,按上述色
谱条件重复进样6次,记录峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为1.28%,1.30%, 1.67%.
3.3稳定性试验在室温条件下,取苦豆子总碱样
品溶液,按0,2,4,6,8,10,12h时间间隔,分别测定
色谱峰峰面积.槐定碱,苦参碱,槐果碱峰面积的RSD分别为0.53%,0.42%,0.79%.表明样品溶
液在12h内稳定性良好.
3.4重复性试验按"3.1"项下方法制备样品溶
液5份,按上述色谱条件进行分析,测得苦豆子总碱样品中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含量分别为
37.53%,32.72%,6.29%;RSD分另U为1.30%,
1.51%,0.94%.
3.5回收率试验取已知含量的苦豆子总碱样品
9份,每份30IIlg,精密称定.分别精密加人槐定碱, 苦参碱,槐果碱对照品溶液,使对照品的加入量分别为槐定碱5,l0,15mg;苦参碱4,8,12mg;槐果碱1, 2,3mg,按"3.1"项下方法制备含对照品为高,中,
低3种浓度的样品溶液,每组样品3份,以0.45
微孔滤膜滤过,在上述色谱条件下取续滤液20
进样分析,测定回收率.结果槐定碱,苦参碱,槐果
碱的平均回收率(,l=9)分别为99.4l%,100.0%, 100.6%.
3.6样品测定精密吸取样品溶液,以0.45m微
孔滤膜滤过,取续滤液20,按上述色谱条件进样
分析;'另取3种对照品适量,按"3.2"项下方法配制
成含槐定碱,苦参碱,槐果碱分别为82.08,68.58,
l3.68mg?L一的混合对照品溶液,同法测定,色谱
图见图2.按外标法以峰面积计算供试品中槐定
碱,苦参碱,槐果碱的含量,结果见表1.
药物分析杂志ChinjPharmAnal2006,26(5)一673—025*******ttmin
AB
图2对照品(A)和样品(B)的色谱图
Fig2Chromatogramsofreferencesubstances(A)andsample(B)
I.槐定碱(sophocarpine)2.苦参碱(nl~'ine)
3.槐果碱(帅ph0ridine)
表13批样品的含量测定结果(%,n=5)
Tab1Determinedresultsofsamples
4结果与讨论
4.1苦豆子总碱原料药已收载于国家药品标
准.4],原标准中采用薄层色谱法对槐定碱,苦参碱
和氧化苦参碱加以鉴别,并用高效液相色谱法测定
槐定碱的含量.通过高效液相色谱法对苦豆子总碱
所含生物碱成分的分离可知该几批样品中氧化苦参
碱的含量较少,其对照品色谱图见图3,在苦豆子总
碱色谱图相同的位置没有明显的氧化苦参碱色谱
峰,测定结果与文献[5]报道一致.
4.2色谱条件的选择过程中,曾经试用过ODS—
c..色谱柱,采用反相离子对色谱条件进行分离,但
由于苦豆子总碱中的几种主要生物碱成分在该色谱
条件下峰位较集中,虽然试用过多种离子对试剂并
对流动相组成进行了反复摸索,但仍不能达到较好
的分离效果.
4.3使用氨基柱,以乙腈一磷酸三乙胺缓冲盐一无
水乙醇为流动相的色谱系统中,缓冲盐的pH及浓
度对分离情况有较大影响.在一定pH范围内,随
pH升高保留时间延长,分离效果得以改善.在缓冲
盐浓度较低时,增加缓冲盐浓度可以得到较好的分
离结果.
02550min
图3氧化苦参碱对照品的色谱图
Fig3Thestandardchromatogramofoxymatrine
4.4对苦豆子总碱中单体生物碱的含量测定结果
表明,在苦豆子总碱中槐定碱,苦参碱,槐果碱的含
量较高,分别约为38%,32%,6%,此3种单体生物
碱合计约占苦豆子总碱总量的76%.
参考文献
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