生物药物分析思考题

⽣物药物分析思考题
1.⽣物药物的特点？p7
1)相对分⼦质量的测定2）⽣物活性检查3）安全性检查4）效价测定5）⽣化法
确证结构
2.⽣物制品的质量检定包括哪些⽅⾯？p14
⽣物制品的检定⼀般分理化检定、安全检定、效⼒检定三个⽅⾯
3.⽣物药物常⽤的定量⽅法有哪些？p17
1）酶法2）电泳法3）理化测定法4）⽣物检定法
4.什么是电泳？如何对其分类，分别有哪些？p94
电泳是指带电粒⼦在电场中向与⾃⾝带相反电荷的电极移动的现象。

按⽀持物，可分纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。

按凝胶形状分有⽔平平板电泳、圆盘柱状电泳及垂直平板电泳。

5.影响电泳迁移率的因素包括？p95
1）带电颗粒的性质2）电场强度3）溶液的ph值4）溶液的离⼦强度5）电渗作⽤
6.⾎清蛋⽩常⽤什么电泳技术分离？核酸常⽤什么电泳技术分
离？p99
⾎清蛋⽩常⽤醋酸纤维素薄膜电泳技术分离，核酸常⽤琼脂糖凝胶电泳技术分离
7.为什么聚丙烯酰胺凝胶电泳是应⽤最⼴泛的凝胶电泳技术？
p100
1）聚丙烯酰胺聚合物分⼦中可解离的基因很少，因⽽电渗作⽤⼩，对样品的吸附作⽤很⼩，容易制备，并可再⽣吸收。

2）凝胶的孔径可以按需要控制其⼤⼩，因⽽具有可拉的分⼦筛效应，可以根据要分离物质分⼦的⼤⼩，选择适合的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，⼜有⽐较好的机械性质。

3）在⼀定浓度范围聚丙烯暗暗对热稳定。

凝胶⼏乎⽆⾊透明，因⽽电涌结果易观察，可⽤检测仪直接测定。

4）丙烯酰胺是⽐较纯的化合物，可以精制，减少污染。

5）聚丙烯酰胺凝胶在280n波长处没有吸收，利于样品蛋⽩电泳后的扫描检测。

8.SDS-PAGE电泳⽤于测定？其中SDS的作⽤是什么？p102
SDS-PAGE电泳⽤于测定蛋⽩质的分⼦量。

SDS的作⽤是使蛋⽩质所带的负电荷远远超过天然蛋⽩分⼦的净电荷，消除了不同蛋⽩分⼦的电荷效应。

9.核酸在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率取决于哪三个因素？p98
核酸在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率取决于琼脂糖浓度、核酸分⼦的⼤⼩、核酸分⼦的形状三个因素
10.DNA分⼦在琼脂糖凝胶中泳动时，有什么效应与什么效应？
DNA分⼦在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分⼦筛效应
11.聚丙烯酰胺凝胶电泳包括连续系统和不连续电泳，其定义和区
别分别是什么？p102 & web
12.什么是分⼦筛效应？p95
分⼦筛效应：分⼦量或分⼦⼤⼩和形状不同的蛋⽩质通过⼀定的孔径分离胶时，受阻滞的程度不同⽽表现出不同的迁移率，这就是分⼦筛效应。

分⼦量⼩，阻⼒⼩，移动快；分⼦量⼤，阻⼒⼤，移动慢。

13.什么是等电点？什么是等电聚焦？p107
等电点：蛋⽩质或两性电解质(如氨基酸)所带净电荷为零时溶液的pH，此时蛋⽩质或两性电解质在电场中的迁移率为零。

等电聚焦：使电泳的介质中形成⼀定范围的pH梯度，电泳时待分离的两性分⼦可以在这种pH梯度中迁移，直到聚集于与其等电点相同的区域。

该技术特别适⽤于分⼦量相近⽽等电点不同的蛋⽩质分离和分析。

14.在⽣物⼤分⼦的⾼效液相⾊谱分离分析中，哪些是常⽤的分离
模式？各分离模式的原理和应⽤对象是什么？web
在⽣物⼤分⼦的⾼效液相⾊谱分离分析中，常⽤的分离模式有体积排阻、离⼦交换、反相液相和亲和⾊谱。

15.简述亲和⾊谱的分离机理。

Web
亲和⾊谱的分离机理：基于样品中各种物质与固定在载体上的配基之间的亲和作⽤的差别⽽实现分离的。

将⼀对能可逆结合和解离⽣物分⼦的⼀⽅作为配基（也称为配体），与具有⼤孔径、亲⽔性的固相载体相偶联、制成专⼀的亲和吸附剂，再⽤此亲和吸附剂填充⾊谱柱，当含有被分离物质的混合物随着流动相流经⾊谱柱时，亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质，⽽其他的蛋⽩质及杂质不被吸附，从⾊谱柱中流出，使⽤适当的缓冲液使被分离物质与配基解吸附，即可获得纯化的⽬的产物。

16.什么是⽣物检定法？p188
⽣物检定法：利⽤药物对⽣物体的作⽤来测定其⽣物活性的⼀种定量⽅法。

它是以药物的⽣物学作⽤为基础，采⽤适当的实验设计⽅法，在⽣物统计学⼯具的辅助下进⾏的。

17.氨基酸最常⽤的鉴别⽅法是什么？p201
1)化学鉴别法2）薄层⾊谱鉴别法3）紫外、红外光谱鉴别
18.蛋⽩质多⽤什么提取？
1.⽔溶液提取
2.有机溶剂提取
3.表⾯活性剂提取
19.蛋⽩质的纯化⽅法有哪些？web
蛋⽩质的纯化⽅法有沉淀法、⾊谱法、电泳法、膜分离法、双⽔相系统萃取法
20.什么是盐溶？什么是盐析? p218
⼀般蛋⽩质在低离⼦强度介质中表现为盐溶，⽽在⾼离⼦强度介质中表现为盐析。

21.常⽤于蛋⽩质沉淀的⽅法有哪些？p218
常⽤于蛋⽩质沉淀的⽅法有盐析法、PEG沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、热处理沉淀法等。

22.⾊谱法纯化蛋⽩质常⽤哪些类型？分别根据什么原理进⾏分
离？p220 & web
23.什么是密度梯度离⼼？
密度梯度离⼼：⽤⼀定的介质在离⼼管内形成⼀连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重⼒或离⼼⼒场的作⽤使细胞分层、分离的⽅法。

24.什么是透析？主要⽤途是什么？
透析是通过⼩分⼦经过半透膜扩散到⽔（或缓冲液）的原理，将⼩分⼦与⽣物⼤分⼦分开的⼀种分离纯化技术。

透析的主要⽤途是从⽣物⼤分⼦样品中除去盐类或其它⼩分⼦物质。

25.蛋⽩质的定量⽅法有哪些？ppt
26.什么是凯⽒定氮法？试分析出现奶粉事件的原因以及改进办
法？web & ppt
凯⽒定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的⼀种⽅法。

即在有催化剂的条件下，⽤浓硫酸消化样品将有机氮都转变成⽆机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随⽔蒸⽓馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。

由于蛋⽩质含氮量⽐较恒定，可由其氮量计算蛋⽩质含量，故此法是经典的蛋⽩质定量⽅法。

出现奶粉事件的原因:常常需要测定⾷品的蛋⽩质含量，由于直接测量蛋⽩质技术上⽐较复杂，所以常⽤⼀种叫做凯⽒定氮法的⽅法，通过测定氮原⼦的含量来间接推算⾷品中蛋⽩质的含量。

由于三聚氰胺与蛋⽩质相⽐含有更多的氮原⼦，所以在⼀些事件中被⼀些造假者利⽤，添加在⾷品中以造成⾷品蛋⽩质含量较⾼的假象。

改进办法: 凯⽒定氮法+三聚氰胺HPLC-UV检测⽅法，两者相结合
27.蛋⽩质的纯度如何鉴定？ppt
1）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）2）等电聚焦3）⽑细管电泳4）HPLC
28.蛋⽩质的分⼦量测定有哪些⽅法？分别有什么特点？ppt &
p100 & web
29.什么是双相电泳技术？p295
双相凝胶电泳即等电聚焦/SDS聚丙烯酰胺电泳。

双向凝胶电泳的分离系统应⽤了蛋⽩质分⼦的两个特性将其进⾏分离。

第⼀相是根据不同蛋⽩质分⼦所带电荷量的差异，⽤等电聚焦技术分离蛋⽩质；第⼆相是根据不同蛋⽩质分⼦量⼤⼩的不同，与SDS结合后在聚丙烯酰胺凝胶中迁移的速度不同达到分离蛋⽩质的⽬的。

30.核酸在酸溶液和碱溶液中分别发⽣什么变化？ppt
31.如何判断核酸样品纯度？ppt
根据A260/A280的⽐值判断核酸样品的纯度:纯DNA：A260/A280=1.8 ,纯RNA：A260/A280=2.0（若样品中含有杂蛋⽩或苯酚，则A260/A280⽐值明显降低）
纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量若260nm光吸收值为1相当于50µg/ml双螺旋DNA,或相当于40µg/ml单链DNA或RNA , 或相当于20µg/ml寡核苷酸。

32.糖类的⼀般鉴别⽅法是什么（定性）？ppt
A．Molisch’s test （莫利希试验）B．Seliwanoff’s test （西⾥⽡诺夫试验）C．Tollen’s test（⼟伦试验）D．Bial’s test（⽐亚尔试验，也称苔⿊酚试验）
33.举出两种多糖的分⼦量测定⽅法。

ppt
渗透压法、蒸⽓压法、光散射法、⾼压液相⾊谱法、粘度法、凝胶过滤法
34.掌握多糖的提取步骤ppt
35.常⽤于多糖纯度的鉴定⽅法有哪些？ppt
⽬前常⽤于多糖纯度的鉴定⽅法有:凝胶层析法、电泳法、⾊谱法、旋光度法等.
36.如何⽤紫外分光光度法检验多糖提取后的纯度？ppt
多糖类在200nm或⼩于200nm处有最⼤吸收峰。

200～400nm处扫描，260和280nm 处应⽆吸收。

37.植物提取多糖的含量测定常⽤什么⽅法？P254
植物提取多糖的含量测定常⽤⽐⾊法、紫外分光光度法、⾼效液相⾊谱法、⽓相⾊谱法、⽣物测定法等。

38.了解多糖的结构分析（糖苷键连接位置的测定）ppt。