ZEEOAN 血清中HBV病毒DNA提取试剂盒 说明书

血清中HBV 病毒DNA 提取试剂盒
使用说明书
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一、产品简介
血清中HBV 病毒DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁粒，从血清样品中快速提取高质量的病毒DNA，纯化的DNA 溶液不含蛋白质、有机质等污染，适用于适时荧光定量PCR 等多种分子生物学实验。

本试剂盒通过使用裂解液和蛋白酶k 使病毒核酸释放出来，然后在结合液的作用下， 病毒DNA 特异性的结合到磁粒上，接着通过洗涤液的洗涤除去各种杂质，最后在洗脱液的作用下使DNA 从磁粒上释放下来而被收集。

此方法操作简单，不需要离心，不使用苯酚等有机试剂，适用于自动化提取。

二 试剂盒组成及储存条件 品名
规格 货号 血清中HBV 病毒DNA 提取试剂盒
100T
4hk101
本试剂盒仅供实验室使用，适用于处理100人份血清学样品。

缓冲液JTL 15ml 裂解液F5 70ml 磁粒 3.5ml 洗涤液JW1 80ml 洗脱液 15ml polyA 粉末 4mg ×1 说明书 1份
储存条件储存条件：：本试剂盒中的polyA 粉末请于－20℃保存，其余试剂均可以室温保存,并避免阳光直射。

当室温低于15℃时，缓冲液JTL 、裂解液F5中可能有结晶析出，38℃水浴加热几分钟，恢复澄清后即可使用，提取效率不受影响。

本试剂盒有效期为12个月， 请于有效期内使用。

安全信息：试剂中含刺激性化合物，操作时应小心，避免沾染皮肤，眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

三 使用者自备仪器和试剂
磁性分离架；
可调微量加液器及相应吸头； 旋涡混合器 ； 56℃加热设备。

蛋白酶K
四 操作规程
4.1 .1 实验前试剂准备实验前试剂准备实验前试剂准备
蛋白蛋白蛋白酶酶K 配制配制：：称取适量蛋白酶K粉末，加入去离子水配制成20mg/ml，充分溶解后，分装成可以被 10ul 整除的小管。

配置好的蛋白酶K于-20℃保存，使用时应避免反复冻融。

polyA 配制配制：：向polyA 粉末小管中加入1ml 的去离子水，充分溶解后，分装成可以被 10ul 整除的小管。

配置好的polyA 于-20℃保存，使用时应避免反复冻融。

4.2 提取步骤
重要提示重要提示：：在进行实验操作在进行实验操作中中吸取吸取磁粒磁粒磁粒溶液前溶液前溶液前，，请务必注意要充分摇匀请务必注意要充分摇匀，，以确保以确保磁粒磁粒磁粒悬浮状态均匀悬浮状态均匀悬浮状态均匀。

1. 取100ul 的血清样品，加入到1.5ml 离心管中， 加入缓冲液JTL 100 ul ，配置好的蛋白酶K 和 PolyA 各10ul ，震荡混
匀。

将离心管放入56℃加热设备，保温裂解10m in.
2. 加入600ul 裂解液F5，漩涡震荡5min ，使裂解液F5与裂解物充分混匀。

3. 加入30ul 磁粒。

室温下，用取液器反复吹打或用旋涡混合仪充分混匀，使磁粒始终保持悬浮状态5分钟。

在吸取在吸取磁粒磁粒磁粒前前，必须先涡旋振荡装必须先涡旋振荡装磁粒磁粒磁粒的试剂瓶的试剂瓶30秒或上下颠倒充分摇匀秒或上下颠倒充分摇匀，，以确保以确保磁粒磁粒磁粒悬浮状态均匀悬浮状态均匀悬浮状态均匀。

4. 磁分离。

将离心管放置于磁架上静置30秒，待磁粒完全吸附于离心管靠磁架一侧时方可吸去液体，液体尽量吸取干。

5. 从磁架上取下离心管，往离心管中加入500ul 洗涤液JW1，震荡混匀1分钟。

待磁粒在洗涤液JW1中完全分散均匀后
将离心管放置于磁架上，磁性分离30秒，尽量吸去液体。

6. 从磁架上取下离心管，往离心管中加入500ul 无水乙醇，重复以上洗涤步骤5。

7. 重复步骤6一次。

8. 离心管始终放在磁架上，室温晾干约5分钟，每隔几分钟，可能会从磁粒中渗出液体，聚集在离心管底部，用取液器将
这些液体及时取出。

乙醇残留会抑制后续试验乙醇残留会抑制后续试验，，所以晾干时要确保乙醇挥发干净所以晾干时要确保乙醇挥发干净。

但也不要干燥太长时间但也不要干燥太长时间，，以免难以洗脱DNA 。

晾干时间应根据根据磁粒磁粒磁粒用量用量用量、、实验室环境实验室环境、、温度等因素适当调节温度等因素适当调节，，以磁粒磁粒表面表面表面、、离心管内壁没有明显液体离心管内壁没有明显液体、、磁粒磁粒表面成光滑状态为界表面成光滑状态为界表面成光滑状态为界。

9. 向离心管中加入洗脱液100ul，震荡混匀5分钟，使磁粒始终保持悬浮状态。

10. 磁分离，取出液体放入新的离心管中，即为提取的HBV 病毒DNA 溶液。

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