高效液相色谱手性流动相添加法拆分阿替洛尔对映体

高效液相色谱手性流动相添加法拆分阿替洛尔对映体
周采菊;贺德龙
【摘要】采用C_(18)固定相,以磺丁基醚-β-环糊精为手性流动相添加剂,提出了阿替洛尔对映体的高效液相色谱拆分方法.选用Kromasil C_(18)色谱柱(250
mm×4.6 mm,5 μm),流动相为含20 mmol·L~(-1)磺丁基醚-β-环糊精的pH 8.2的10 mmol·L~(-1)磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈(60+35+5),紫外检测波长275 nm,柱温为25℃,进样量20μL,流量为0.5 mL·min~(-1)时,分离度达到1.63.
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2010(046)002
【总页数】3页(P184-185,188)
【关键词】高效液相色谱法;阿替洛尔;对映体;磺丁基醚-β-环糊精;手性添加剂【作者】周采菊;贺德龙
【作者单位】天津科技大学,生物工程学院,天津工业微生物重点实验室,天
津,300457;天津科技大学,生物工程学院,天津工业微生物重点实验室,天津,300457【正文语种】中文
【中图分类】O652.63
阿替洛尔是一种β 肾上腺素能受体阻滞剂,为含手性因素的对映体药物(图1),但均以消旋体用药[12]。

研究表明:其各对映体在体内的药代动力学[3]、药理作用[4]和毒性[5]均存在明显差异,因此,研究阿替洛尔对映体的手性分离分析方法对于研究其药理和药效作用具有重要意义。

已有用手性固定相[67]和毛细管电泳法[8]分离拆
分阿替洛尔对映体的报道。

而高效液相色谱法(HPLC)法以磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)作为手性流动相添加剂分离阿替洛尔国内外尚未见报道。

本工作以SBE-β- CD为手性流动相添加剂,采用高效液相色谱法拆分阿替洛尔对映体,考察了手性流动相添加剂的种类和浓度、有机极性调节剂、缓冲盐的浓度、流动相的pH 值和流量及柱温等因素对分离的影响。

Agilent 1100型高效液相色谱仪,HP 1100系列VWD检测器,HP1100化学工作站。

甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯,水为二次重蒸水。

Kro masil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:pH 8.2的10 mmol·L-1磷酸盐缓冲溶液甲醇乙腈(60+35+5),含20 mmol·L-1 SBE-β-CD,流量为 0.5 mL ·min-1,检测波长为275 nm,进样量20μL,柱温25 ℃。

称取一定量的阿替洛尔标准品于50 mL容量瓶中,用甲醇溶解稀释至刻度,制成质量浓度为1.000 0 g·L-1标准储备溶液,于4℃条件下保存。

临用前加流动相稀释制成0.100 0 g·L-1的溶液,并用0.45μm微孔滤膜过滤,得样品溶液。

在色谱条件下进行阿替洛尔对映体的拆分。

2.1.1 手性添加剂
分别考察了以β-CD、羟丙基 (HP)-β-CD 或SBE-β-CD作为流动相的手性添加剂对阿替洛尔对映体的拆分情况。

阿替洛尔对映体在β-CD、HP-β-CD体系中不能分离,而在以SBE-β-CD为手性添加剂的流动相体系中能达到较好的分离。

磺丁基醚对β-CD分子结构中羟基的取代增加了环糊精在流动相中的溶解性,以及与阿替洛尔的疏水相互作用、立体排阻效应,从而增大了与阿替洛尔对映体的立体选择性作用差异,使阿替洛尔对映体得到了分离。

SBE-β-CD浓度对药物对映体分离的结果表明:当 SBE-β-CD浓度为20 mmol·L-1时分离度为1.63,两对映体达到了完全分离。

考虑到SBE-β-CD浓度增加对分析柱
的使用寿命、柱效均不利,选择SBE-β-CD 浓度为20 mmol·L-1。

2.1.2 有机极性调节剂
分别考察了采用甲醇、乙腈或甲醇和乙腈作调节剂对分离的影响。

试验中有机极性调节剂乙腈对分离阿替洛尔有较大的影响,未添加乙腈时,当磷酸盐缓冲溶液与甲醇的体积比为55比45时,分离基本完全,但峰形不好。

当添加了乙腈,流动相的组成为缓冲溶液、甲醇、乙腈的体积比为60比35比5时,不但分离完全,而且峰形大大改进。

2.1.3 缓冲溶液浓度
考察了磷酸盐缓冲溶液浓度在5～20 mmol·L-1范围内对映体分离的影响。

无机盐存在下,不仅可以增加 SBE-β-CD的溶解度,还能稳定药物与SBE-β-CD所形成的包容物,增强手性识别能力[9]。

由于磷酸盐缓冲溶液浓度过高对色谱柱和色谱仪都有损害,在保证分离度的前提下,选择磷酸盐缓冲溶液浓度为10 mmol·L-1。

2.1.4 流动相的pH值
在其他色谱条件不变时,改变流动相的pH值,考察pH值对阿替洛尔对映体分离的影响。

当pH值为7.2～8.8时,随着pH值的增加,分离度明显增加,当pH值为8.2时分离度达到1.63。

考虑到色谱柱的适用范围,pH值太高对色谱柱不利,且色谱峰形也不佳,选择流动相pH为8.2。

试验中,随着温度的升高,阿替洛尔对映体的分离度变化不大。

较低的柱温有利于对映体的分离,但是过低的柱温会增加流动相的黏度,使色谱系统柱压过高。

试验选择柱温为25℃。

考察了流动相的流量对阿替洛尔对映体分离的影响。

虽然流量为0.6 mL·min-1比流量为0.5 mL·min-1的分离度高,但兼顾分离度和色谱峰形,试验选择流动相的流量为0.5 mL·min-1。

在最佳色谱条件下分离阿替洛尔对映体(图2),进样5次,两对映体保留时间的相对
标准偏差分别为1.3%和1.4%,说明该方法的重复性良好。

试验采用以SBE-β-CD为手性流动相添加剂的高效液相色谱法拆分阿替洛尔对映体,方法简单,灵敏度高,且比手性固定相分离法成本低,从而为阿替洛尔对映体的进一步深入研究提供了一种新的方法。

【相关文献】
[1] ROU GE N,ALL∗MANN E,MARIANNE GF,et parative pharmaco kinetic study of a floating multipleunit cap sule,a highdensity multipleunit cap sule and an immediaterelease tablet containing 25mg atenolol[J].Pharm Acta Helve,1998,73(2):8187.
[2] BARBARA S,RICHARD P,J EANETTE S J,et al.Effect ofβ1 blockade with atenolol on progression of heart failure in patients treated with highdo se enal[J].Eur J Heart
Fail,2000,2(4):407412.
[3] CLAUDIO G,ANNA T,SERGIO C,et al.Simulta neo us determination of atenolol and chlorthalidone in plasma by high performance liquid chro matograp hy ap plication to pharmaco kinetic studies in man[J].J Chromatogr B,1997,698(1/2):187194.
[4] BROWN R A,LL GK J,CHEN A F,et al.Dietary Mg2+supplementation resto res impaired vasoactive re spo nses in isolated rat ao rta induced by chro nic ethanol
consumption[J].Eur J Pharmacol,2002,442(3):241 250.
[5] BISWAS N M,RANOJOY S G,ALOK C,et al.Effect of atenolol on cadmiuminduced testicular to xici ty in male rats[J].Rep ro To xicol,2001,15(6):699 704.
[6] 杨非,王嗣岑,贺浪冲.β2受体阻滞剂对映体在Chiral cel?OD手性柱上的拆分特性[J].西安交通大学学报:医学版,2004,25(2):124.
[7] 左文坚.高效液相色谱法手性色谱柱分离β2阻滞剂对映体[J].天津药学,2001,13(6):17.
[8] 陈仲益,夏宗玲,胡纯琦,等.手性毛细管电色谱拆分比索洛尔、阿替洛尔、克仑特罗和特布他林[J].分析化学,2007,35(2):181.
[9] 安登魁.现代药物分析选论[M].北京:中国医药科技出版社,2001:91.。