miRNA181a在肝细胞癌中的表达及其临床意义

miRNA181a在肝细胞癌中的表达及其临床意义
夏永欣;张金平
【摘要】目的探讨miR-181a基因表达与肝细胞癌发生发展以及肿瘤病理学特征之间的关系.方法提取30例肝细胞癌组织及癌旁组织和10例肝血管瘤患者的肝脏组织的总RNA,用Real time-PCR法检测miR-181a在上述组织中的表达情况.结果肝细胞癌组织中miR-181a表达与癌旁组织相比差异无统计学意义(P＞0.05);与正常肝脏组织相比,miR-181a在肝细胞癌组织中的表达水平显著低于正常对照组织,差异有统计学意义(P ＜0.01)；miR-181a表达下调与肝细胞癌分化程度、临床分期和合并肝硬化明显相关(P＜0.05),与肝细胞癌的大小、血AFP浓度、HBV感染均无明显相关性(P＞0.05).结论 miR-181a表达下调参与肝细胞癌的发生发展过程,miR-181a异常表达与肝细胞癌的肿瘤分化程度、临床分期和合并肝硬化相关.%Objective To explore the relationship of the miR-181a expression in hepatocellular carcinoma ( HCC) , tumorgenesis and pathological characteristics. Methods Real time PCR was used to detect the expression of miR-181a in 30 patients with HCC and its adjacent tissues. 10 normal liver tissues also were examined. Results There was no difference in expression of miR-181a between HCC and its adjacent tissues. The expression of miR-181a in HCC was significantly lower than that in normal liver tissues. Down-regulation of miR-181a expression was related to differentiation, the clinical stage and liver cirrhosis (P <0.05) , but not related to the size, AFP concentration and hepatitis B infection. Conclusion Down-regulation of miR-181a takes part in the tumorgenesis and
development of HCC. The expression of miR-181a is associated with the tumor differentiation, the clinical stage and liver cirrhosis.
【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》
【年(卷),期】2012(021)007
【总页数】3页(P597-599)
【关键词】肝细胞癌;miR-181a;肿瘤病理学特征
【作者】夏永欣;张金平
【作者单位】南阳市中心医院消化内科二病区,河南南阳473009;郑州大学第一附属医院消化内科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
在世界范围内，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的发病率位于肿瘤发病率第5位，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中占第3位［1-3］。

HCC死亡率已占我国恶性肝病死因的第2位，在农村中则为第1位。

miRNA是近年来发现于真核细胞中的一类内源性非编码小分子RNA，长约21～22个核苷酸，可通过与靶mRNA的3'UTRs(untranslated regions)或5'UTRs近乎完全互补结合在转录后水平使其降解，或者与之不完全互补结合在翻译水平抑制蛋白合成，从而在基因表达中发挥重要的调节作用［4-5］。

我们新近研究发现恶性程度较低的Hep3B细胞与侵袭力更强的HepG2细胞相比较:miRNA181a表达明显上调。

本研究检测肝细胞癌、癌旁组织和正常肝组织中
miRNA181a的表达水平，探索分析miRNA181a表达异常与肝细胞癌病理学特征如肿瘤大小、肿瘤分化程度、临床分期、是否合并肝硬化、血AFP浓度等的关系。

1 材料与方法
1.1 临床资料收集南阳市中心医院及郑州大学第一附属医院普外科2010年5月－2011年5月手术切除HCC标本30例，癌旁组织取自距离癌组织2 cm的肝脏组织，所有病例均经病理证实。

其中男22例、女8例，平均年龄(50±10.60)岁。

术中、术前均未经放、化疗及免疫治疗。

另取来源于肝血管瘤患者的正常肝组织10例作为对照。

1.2 方法
1.2.1 总RNA的提取及质量检测:按照TRIzol®试剂(Invitrogen life technologies)说明书的步骤，逐步提取出组织标本中的总RNA。

应用紫外分光光度计测定总RNA的吸光度A260值和A280值，用A260值计算其浓度，并计算A260/A280值检测其纯度。

1.2.2 实时定量PCR检测目的miRNA表达量:取2 μg总RNA作为初始模板，总反应体系为20 μL，应用miScript Reverse Transcription Kit说明书进行逆转录合成cDNA，反应条件为:37℃，60 min;95℃，5 min。

然后取1 μL上述cDNA 为模板，以U6 SnRNA作为内参照，每个检测样本做3个复孔，在Rotor-Gene 3000 Real-time PCR仪(Corbett Research)上进行实时定量PCR，反应条件为:95℃预热15 min;95℃，10 s;58℃，30 s;72℃，30 s，35个循环;实验中所用引物均由Invitrogen公司合成。

1.3 统计学分析采用内参基因U6 SnRNA标化、计算每一种被检miRNAs的△Ct 值。

应用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，组间比较采用t检验或单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 肝细胞癌组织中miR-181a基因表达量的比较与癌旁组织相比，30例HCC组织中有13例miR-181a基因表达上调，占4
3.33%(13/30)，17例表达下调，占56.67%(17/30)，两组相比，差异有统计学意义。

与正常肝脏组织相比，30例HCC组织中有23例miR-181a基因表达下调，占76.67%(23/30);7例表达上调，占23.33%(7/30)。

miR-181a基因在HCC组织中的表达量低于正常肝组织(P＜0.01)。

肝癌组织中miR-181a与癌旁组织相比无显著性差异(P＞0.05);与正常组织相比具有显著性差异(P＜0.01，见图1)。

图1 miR-181a相对表达量 HCC:肝癌组织;NT:癌旁组织;NL:正常肝组织Fig 1 The relative expression of miR-181a in different liver tissues
2.2 miR-181a基因表达相对倍数与肿瘤病理学特征的关系 miR-181a表达下调与临床分期、HCC分化程度和合并肝硬化明显相关(P＜0.05)。

而miR-181a基因表达上调与肝细胞癌的大小、血AFP浓度、是否并发HBV感染均无明显相关性(P＞0.05，见表1)。

3 讨论
表1 miR-181a基因表达相对倍数与肿瘤病理学特征的关系Tab 1 The relationship of the miR-181a expression and pathological characteristics of HCC肿瘤病理特征例数miRNA下调平均倍数(x－± s)P 值性别男22 2.34
±0.16 0.57女8 2.76 ±0.85年龄(岁)30 ～60 19 2.12 ±0.16 0.86＞60 11 2.34
±0.16血AFP浓度(ng/mL)＜20 8 2.04 ±0.28 0.24 20 ～200 10 2.39 ±0.34＞200 12 2.45 ±0.18 HBV阴性7 2.56 ±0.47 0.36阳性23 2.75 ±0.12合并肝硬化阴性8 3.93 ±0.19 0.01阳性22 2.04 ±0.26肿瘤大小(cm)＜5 8 2.14 ±0.09
0.82 5 ～10 19 2.36 ±0.36＞10 3 2.54 ±0.25分化程度高分化17 4.84 ±0.35 0.01中低分化13 2.13 ±0.126临床分期Ⅰ期2 0.03Ⅱ期12 3.62 ±0.11Ⅲ期 13
2.11 ±0.19Ⅳ期3
研究表明，在多种肿瘤中存在miRNA的异常表达;此外亦发现miRNA的靶基因中有许多作用于肿瘤相关的信号转导通路，提示miRNA与肿瘤发生及转移有密切的关系［6-7］。

目前研究已表明miRNA参与了HCC的发生及转移过程［8-11］。

许多基础和临床研究认为miRNAs可能是一组新的致癌基因或抑癌基因。

miRNAs既可作为抑癌基因，下调原癌基因的活性;也可作为癌基因，下调抑癌基
因的活性。

我们实验室前期的研究发现，miR-181a能在体外培养的肝癌细胞中调节骨桥蛋白依赖的肝癌转移［12］。

Frueht等［13］用弗斯可林(forskolin)处理
内耳细胞，检测基因表达变化，发现miR-181a表达变化，功能实验显示miR-181a能促进听毛细胞的增殖。

最近的研究显示miR-181a能与凋亡相关的mRNA Bim靶相结合，抑制套细胞淋巴瘤或非Hodgkin淋巴瘤细胞的化疗相关
的凋亡，从而抑制淋巴瘤细胞对化疗药的敏感性［14］。

本研究从临床标本水平，研究miR-181a在肝癌组织中的表达量与肿瘤病理学特征的关系，结果发现癌组
织与癌旁组织及正常组织相比，miR-181a表达显著下调。

我们研究结果进一步发现肝细胞癌miR-181a表达量与肿瘤分化程度、临床分期和合并肝硬化明显相关。

究其详细机制尚不十分清楚。

推测可能由于miR-181a作用于转录因子EZF家族，进一步促使癌细胞从G1期向S期的转变，促进细胞增殖，抑制细胞分化。

目前还没有miR-181a表达与肝细胞癌肿瘤病理学特征的关系方面的研究报道。

miR-
181a的作用机制值得进一步深入研究。

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