科技创新论文-乙草胺对青蛙卵孵化率的影响研究

科技创新论文题目：乙草胺对青蛙卵孵化率的影响目录摘要 (3)1.前言 (3)2.实验材料与方法 (4)2.1材料 (4)2.1.1实验材料 (4)2.1.2 实验试剂.............................................. 错误！未定义书签。

2.1.3 实验仪器 (4)2.2实验方法 (4)2.2.1 材料处理 (4)3.实验结果 (5)3.1用乙草胺处理受精卵时期胚胎的发育情况 (5)3.2用乙草胺处理8-细胞时期胚胎的发育情况 (6)3.3用乙草胺处理囊胚期胚胎的发育情况 (6)3.4用乙草胺处理原肠胚期胚胎的发育情况 (7)4.结论与分析 (7)4.1青蛙早期胚胎对乙草胺敏感时期分析 (7)4.2乙草胺对青蛙卵致畸致死效应分析 (8)5.参考文献 (9)乙草胺对青蛙卵孵化率的影响研究摘要超量农药对土壤、水体的污染随降雨排水而广泛分布，严重影响了许多生物的生存，如赖以水生殖的青蛙。

本课题通过用浓度为1.0、0.5、0.2、0.1 和 0.05mg/ ml乙草胺溶液分别对青蛙受精卵、8-细胞期、囊胚、原肠胚四个阶段作用。

结果发现：随着药物浓度的增加，孵化率明显降低；不同发育时期的青蛙卵对乙草胺的敏感程度和耐受程度都有所不同，其中，原肠胚期的胚胎对乙草胺最为敏感，在1.0mg/ml浓度下全部死亡，在0.05mg/ml的处理下，孵化率仅有68.5%。

实验表明乙草胺对青蛙卵的孵化有明显的致畸致死效应。

关键词：乙草胺；青蛙卵；孵化率；发育Effects of acetochlor on hatching rate of eggs of the frog studies Author: Li Manyi, He Jiaojiao, Du Zhengran, Chen JianghuaiAbstract：Excess pesticide pollution of the soil, water drainage and extensive distribution of rainfall, severely affecting the survival of many organisms, on which the water such as reproduction of frogs. This subject through the concentration of 1.0, 0.5, 0.2, 0.1 and 0.05mg/ml solution of acetochlor on fertilized eggs, respectively 8-cell stage of four phases, the blast cyst, the intestinal germ. Results found: as the concentration increases, significantly reduced hatching rate; frog eggs at different developmental stages of acetochlor on sensitivity and tolerance levels vary, in which the original intestinal germ embryo most responsive to acetochlor, all died in the 1.0mg/ml concentration, under 0.05mg/ml, and hatching rate of only 68.5%. Experiments have shown that acetochlor on Frog eggs hatch has significant teratogenic effects of death.Key words: acetochlor; frog eggs; hatching rate; development1.前言为提高农作物产量，使农田杂草及害虫的消灭达到立竿见影的效果，大家想到的最直接最有效的就是使用化学农药了，然而各种化学试剂的使用和有害物质的排放, 使得环境污染越来越严重, 已经对许多生物如蛙类等对人类有益的动物造成了极大的危害[1,2]。

本文以不同浓度乙草胺处理青蛙早期胚胎, 就乙草胺对青蛙早期胚胎发育的影响以及青蛙早期胚胎对乙草胺的耐受程度、敏感时期等问题进行了研究。

青蛙属于两栖纲无尾目蛙科，民间把蛙科的蛙类统称青蛙，我国常见的种类有黑斑蛙、金线蛙和中国林蛙，在我国分布甚为广泛。

根据张孟阴的记载,西至西康,东至舟山、台礴、北至蒙古,南至海南都有其踪迹。

它在农田生态系统中处于重要的地位，是农业害虫生物防治的重要成员之一，“稻花香里说丰年，听取蛙声一片”就是人们对青蛙在农业生产上贡献的肯定。

乙草胺[3]，是一种除草剂类农药, 对许多田间杂草有致死作用, 是由美国 Monsanto 公司开发,在我国由化工部沈阳化工研究院于1982年研制成功, 是目前我国使用最多的 3种除草剂之一。

但是乙草胺等除草剂在使用过程中的残留同样给人类及动物带来了危害。

因此，乙草胺被美国环境保护局定为 B-2 类致癌物，欧洲许多国家将乙草胺逐渐排除在农药使用之外[4]。

目前，许多实验已经证实了乙草胺对一些动物的毒害。

Xiao等报道中指出，在实验条件下, 当乙草胺的浓度 > 20mg /kg时, 蚯蚓的生长率以及蚕茧的孵化率将大大降低[5]；杨晓梅等表明乙草胺对早期胚胎发育具有明显的致畸致死效应,并随着乙草胺浓度的增加致畸致死效应增强[6]。

但总的来说关于乙草胺的残留毒性对两栖动物和人类的造成的负面影响的报道还不够全面，研究乙草胺对青蛙卵的孵化影响是十分必要的。

合理使用和科学管理乙草胺等农药试剂，关注生物防治，保护身边动物。

2.实验材料与方法2.1 材料2.1.1 实验材料青蛙卵采集于衡阳县的一池塘中，PH值为6.6-6.8。

用来试验的卵是同种青蛙产后当天的卵。

实验用水为静置2d后的自来水，温度保持在15~ 20℃。

乙草胺LD50，为2 000 mg/ kg。

2.1.2实验仪器5支大试管、锥形瓶7个、放大镜两个、移液管一支、量筒一个、大小烧杯各两个、温度计一支、ph试纸。

7个90mL的培养皿、2个1000ml的烧杯，一个50ml量筒。

2.2 实验方法与流程2.2.1 方法单一变量控制法2.22 材料处理用静置2天后的自来水清洗采集回来的青蛙卵4~ 5 次，去除原本参杂的杂物，并用静置2天后的自来水做为溶剂，将乙草胺配成1.0、0.5、0.2、0.1 和0.05mg/ ml 共5 种浓度对受精卵、8 -细胞、囊胚期和原肠胚期4 个不同时期的胚胎分别进行作用[6]（药物处理只针对单个时期，另外各时期用静置后的自来水正常培养。

）设置一自然对照组进行对照。

实验中各胚胎培养于90 ml 培养皿中，每个培养皿中放置120~ 150 枚胚胎，置于15~20℃室温下培养，每天换水2 次。

定期用放大镜观察各组的胚胎发育情况，并及时记录相应数据。

每个浓度处理重复2次。

附：孵化至各阶段所需时间[7]阶段时长(h)受精卵—8-细胞期 3.3±0.088-细胞—囊胚期 5.4±0.2囊胚—原肠胚时期15.9±0.3整个胚胎发育70.4±3.03.实验结果3.1用乙草胺处理受精卵时期胚胎的发育情况表1 列出了经乙草胺处理的青蛙受精卵的发育情况。

实验表明：受精卵经0.05~ 1.0 mg/ ml 浓度的乙草胺处理后发育直至原肠胚期未见有明显异常发生，各浓度组发生原肠外突的比例与对照组相比没有显著差异。

但随着发育的进行，经1.0 mg/ ml和0.5 mg/ ml 乙草胺处理的受精卵发育成的蝌蚪却分别出现了4.0%和 2.86%的畸形，与对照组相比具有显著性差异。

研究发现，除了造成一定比例的畸胎外，乙草胺还能延缓胚胎的发育速度，当对照组发育至囊胚期时，实验组胚胎仍处于16或32细胞期。

表 1 经乙草胺处理的受精卵的发育结果浓度胚胎总数原肠外突( %) 畸胎( %) 正常胚胎( %) 对照组252 0 2（0.79）250（99.21）1.0 250 6（2.40）10（4.0）234（93.60）0.5 280 4（1.42）8（2.86）268（95.72）0.2 244 2（0.82）4（1.64）238（97.54）0.1 264 2（0.76）4（1.56）258（97.78）0.05 300 2（0.67）4（1.33）294（98.0）3.2 用乙草胺处理8 -细胞时期胚胎的发育情况表2 列出了经乙草胺处理的青蛙8 -细胞胚胎的发育结果。

从表2的数据中可以看出8 -细胞胚胎对乙草胺的敏感程度明显高于受精卵，出现了较高比例的原肠外突。

其中1.0 mg/ ml 和0.5mg/ ml浓度组产生的原肠外突比例与对照组相比具有极显著差异并明显高于经乙草胺处理的受精卵所产生的原肠外突比例。

各浓度乙草胺处理的8 -细胞胚胎所产生的畸胎比例也明显高于对照组。

同样在经乙草胺处理的8 -细胞胚胎的发育中发现了发育延迟的现象。

表 2 经乙草胺处理的8 -细胞胚胎的发育结果浓度胚胎总数原肠外突( %) 畸胎( %) 正常胚胎( %)对照组256 2（0.78）4（1.56）250（97.66）1.0 264 84（31.8）24（9.09）146（59.11）0.5 250 66（26.40）12（5.60）172（68.0）0.2 260 32（12.31）8（4.80）220(82.89) 0.1 258 12（4.65）8（3.10）238(92.25) 0.05 284 4（1.41）6（2.11）274(96.48)3.3 用乙草胺处理囊胚期胚胎的发育情况表3 列出了经乙草胺处理的囊胚期胚胎的发育结果。

实验表明：乙草胺浓度为1 mg/ ml 实验组的胚胎全部导致原肠外突，比例明显高于同浓度乙草胺处理的受精卵和8 -细胞胚胎。

0.5 mg / ml浓度乙草胺处理的囊胚期胚胎也产生了较高比例( 22.66%) 的原肠外突，与对照组相比具有显著性差异。

除1.0 mg/ ml 浓度组全部因原肠外突而停止发育外，0.5 mg/ ml和0.1 mg/ ml 浓度组分别产生了4.69%和2.82%的畸胎，也高于对照组。

表3 经乙草胺处理的囊胚期胚胎的发育结果浓度胚胎总数原肠外突( %) 畸胎( %) 正常胚胎( %)对照组247 1（0.41）2（0.81）243（98.38）1.0 268 268（100）0 00.5 256 58（22.66）12（4.69）186（72.65）0.2 264 34（12.88）10（3.79）220（83.33）0.1 284 12（4.23）8（2.82）264（92.95）0.05 248 4（1.61）4（1.61）240（96.78）3.4 用乙草胺处理原肠胚期胚胎的发育情况经乙草胺处理的原肠胚期胚胎的发育结果见表4。