【doc】喹乙醇对鸡的毒性及组织药物浓度研究

喹乙醇对鸡的毒性及组织药物浓度研究
华南农业大学14(4)1993:53～5B
J.SouthChinaAgr.Univ.
喹乙醇对鸡的毒性及组织药物浓度研究'
董漓波曾振灵杖榴
—雨医系当弓/.L
摘要本文对鸡内鼹睦乙辞的毒性及多荆t,中毒剂t的组织裱皮进行了研究.用寇民法铡碍
石歧杂鸡内眼哇乙醇的LV.y~304.9mB/.在饲料中添加哇乙醇0.012及其以上剂量组,连
续喂饲22天后发生中毒死亡.采用定期递增染毒法,哇乙醇的蓄积系欺为3.24.属中等蓄积?以
30r~/kg体重剂量每天睡服2扶.连用3天的多剂t和129Ⅱ喀/l噜体重的1扶中毒剂量培坞难
服后,定期宰彖动物?用高教藏相色谱法测定哇乙醇在肝,肾,肌肉,膏,脂肪组织中的残留t,结
果表明多判量用药后24h,在5种组织中的浓度均低于0.24坶,窖.说明哇乙醇在鸡体冉捎毒簧程
迅速.在始1次中毒剂量后72h.哇乙醇在5种组织中的浓度均在0.16坶,gl}i下,说明增至中
毒剂t.喳乙辞在坞体内谤豫较幔.残留时同较长,剖捡观察及组织切片均出现以出血性为主的
痛变?
',
关键词
.!坚生I盥一望塑堕壅一高教藏相色谱法
中田分类号$859.8
睦乙.
LAQUINDOX)畜禽饲料垂加具有促进蛋白质同化作用,可使更多的氯
储存,促进瘦肉生长.此外,对革兰氏阳性菌及阴性菌均有抗菌作用.经试验痊z|醇对家禽
几种致病菌如禽巴氏杆菌,自痢杆菌,变形扦菌及大肠杆菌的MIC分别为4,8,16及l6岵/
mL]?故对禽霍乱疗效特别显着.但睦乙醇安全范羼小,不易溶于水.当用量及用法不当时,
极易产生中毒,给养禽业带来严重损失[5].国外研究喹乙醇对实验动物如小白鼠,大白鼠,兔
等的毒性较多,而对家禽的毒性特别是多剂量及中毒剂量在组织浓度方面未见报道.
奉试验的目的是以鸡为受试动物,测定睦乙醇的内服半敦致死量,在饲料中添加睦乙醇
的中毒剂量,蓄积毒性,并以多剂量,中毒剂量给鸡内服后,测定其在肝,肾,胄,
肌肉及脂肪
组织的浓度.以上研究不仅可以进一步认识睦乙醇对鸡的毒性,而且还可以为养禽业安全应
用喹乙醇及食品卫生提供可靠的理论依据.
1材料与方法
1.1供试药品及试剂
喳乙醇原粉,含量98?47,批号87021,,_东省京南兽药厂生产.标准品,含量99.7,
批号881,中国兽药监察所提供.甲醇,乙酸乙酯,磷酸二氧钾,硫酸铵,氧氧化钠均为分析
纯.乙脯为化学纯.
'
毒文为广东省科委科学基金肾助项目哇乙醇的札茜作用及其在家禽的药动学研究蚺内容之一
.
1993～03一O8驶稿
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54华南农业大学第14卷
1.2仪器
高效液相色谱仪为BECKMAN--334型(美国BECKMAN公司).1Hz一84型台式恒温振
荡器(上海跃进医疗器槭厂).xw一80旋涡台器(上海第一医学院仪器厂).800型离心沉淀
器(上海手术器械厂)Jc一3型超声处理机(通化市超声设备厂).
1.3试验动物
石螋杂鸡,鞠自广东省家禽研究所.
1.4试验方法
1.4.1内服喹乙醇LD.的测定参照寇氏法".取育成鸡50只,雌雄各半分为5组,以等比剂量按每公斤体重用556.337,2(14,124,75mg喹乙醇,分别装入胶囊,给5/卜组的鸡只逐
个投服.
1..2在饲料中添加喹乙醇中毒量的测定取出壳雏鸡观察3天后,随机分为6组,每组
l7只.试验组设5组,分别以每公斤饲料添加喹乙醇90,120,l50,180,210mg,连续饲喂;对
照组喂相同的饲料但不添加喹乙酵.出现第1只小鸡中毒死亡的当天,即停止用药1.{.3蓄积性毒性采用剂量定期递增染毒法",取成鸡30只,雌雄各半,分为3组,对照
1组.试验2组试验组每4天换1/卜剂量投药,l～4天用LDso的0'l,5～8天用LD 的
0.15,9～12天用LD的0.22,18～16天用LD50的0.34,17～20天用LDso的0.5,21～24天
用LD的0.75.25～28天用u)讪的Ll2
1.4.多剂量给药后组织浓度的试验方法取成鸡36只,雌雄各半,体重每只1.52~0.2 kg,按30mg/kg体重装入破囊投服,每天2次,连用3天,最后1次用药后分别于6,8,10,
12,16,24h各剖杀6只,取肝,肾,肌肉,胃,脂肪等组织各l0g,置一20℃低温水箱保存. 组织样品处理口].组织解冻后,取lg加4叫,lmol/LKH,PO?溶液,用超声处理机打成匀浆,称取2.5g匀浆(相当0.5g组织)加入l饱和硫酸铵溶液,置台式振荡器上以200 次/min振10rain,再以4000r/rain离心15min,吸出上清液,加入提取液(乙脯与乙酸乙酯
按3:2混台)3ml,振荡后再离心,吸出有机相,采液再重复处理2次,以上操作均在37℃恒
温水浴中进行.将3次有机相合并后,加入0.2mol/LNaOH溶液l叫,经振荡,静置后吸出
有机相于lO叫的离心管中,置80～90℃砂浴中,通氨气流将有机相挥发干后,置一20'C冰
箱中保存待测.'
1.4—51次给予中毒剂量后组织痕度的试验方击取成鸡36只,雌雄各半,体重1.53士
0.21kg,按120mg/kg体重剂量1次内服,用药后分别于12,24,36,48,60,72h各剖杀6 只,取肝,肾,肌肉,胃,脂肪组织各10g,置一2O℃低温水箱保存.组织样品处理同多剂量组.
l?4.6样品中药物浓度的测定以标准曲线法定量,在0.1～5.12g/县组织的浓度范唇内的线性关系良好(f=0.9981~0.9996).组织提取出的样品,重新用流动相溶解,在旋涡混
台器上混合2rn,吸取101作高效液相色谱分析.最后从标准曲线中算得药物浓度高效液相色谱测定条件:C~,--ODS柱(25廿n×4.6mm),流动相为甲醇一水(~5/s5,v/ V),流速1.0/m_m,记录仪纸速2ram/rain,紫外检测器波长260nIn.
第{期董请渡等哇乙醇对鸡的毒性及组织药物浓度研究!1
2结果
2.1喹乙醇内服的半数致死量试验结果
死亡率见表1.
表l哇乙醇【D砧溅定时鸡的死亡率
按寇氏法计算鸡内服喹乙醇的慨0为304.9mglkg,LDs.的95可信限为373?6～27s.1m~/kg.
2.2喹乙醇在饲料添加荆中,其中毒量的测定结果
其死亡率见表2,,
袭2饲料中舔加中毒量噎乙醇时鸡的死亡率
2.3喹乙醇中毒症状及病理变化
鸡只发生喹乙醇中毒后的症状为精神不振,羽毛松乱,蹲下不动,采食减少,冠发黑,流
少量口涎,排稀粪,中毒严重者衰竭死亡.肉眼所见的病理变化为口腔有粘液,嗦囊积水,肠
道(特别是十二指砀,盲肠)及扁桃体出现弥漫性出血,有些病鸡胃肠呈出血病变I 脾脏水肿,
有些出现少量出血点,肝胜稍肿大,边缘有出血点及出血斑,肾脏肿大,质地变脆,淤血或出
血,有些出现尿酸盐沉积}心脏心冠脂肪处有少量针头大出血点.组织切片检查腺胃及肠粘
膜上皮局部坏死,淋巴细胞增生,腺胃固有膜小血管淤血,浆膜淤血,脾脏血管充血,淋巴细
胞灶性浸润{肝脏中肝小叶淋巴细胞弥漫性浸润,成淋巴细胞,幼质淋巴细胞增多.局部出现
细胞核碎裂t肝窦郁血;肾脏呈弥漫性出血,肾小管上皮有颗粒变性{心脏局部心肌变性,局
部出血,心肌闻轻度淤血..
56华南农业犬学第】●畚
2.4蓄积性毒性试验结果
用药后16天.试验组死亡10只,即死亡一半?累计剂量为987'9g/kg?
K(蓄积系数)一LD5o(n)/LD~o(1)=g87,9/3o,~?93t24
2.5鸡多剂量及中毒剂量给药后组织浓度的副宅结票
分别见表3及表4
ND一不出
裹{鸡内服中毒剂量(】20mg/k岳)哇乙醇后的组织浓震(g组织?平均值士标准差) NtD--洲不出
3讨论
3.1喹乙醇对石岐杂鸡内服的LDso为30
4.9mg/kg,而实验动物小白鼠,大白鼠,兔内服睫
乙醇的LDc4分别为3316,1704,l000~2000nlB/kg].说明本试验喹乙醇对鸡的毒性比实验
动物大5～10倍,也说明鸡对喹乙醇是敏感的.,
3.2喹乙薛在饲辩中添加()0.02],0.018,0.O15,0.012,0.00g,连续应用22天,其死亡
率()分别为41.O,17.6,n.e.1】.8,0,停药1O无后死亡停止.说明睦乙醇在饲辩中添加浓度在0.012以上即会引起石岐杂小鸡中毒死亡,荆量越大,死亡率越高.
3-3鸡发生喹乙醇中毒后,其症状以流涎,冠发黑,排稀粪为主要特征,病理变化以隧道出
血性炎症,肾出血为主要变化,病理组织学检查以肝,肾出血性病变为主.以上症状与鸡瘟,
出敷等传染性疾病相似,故需鉴别诊断结合病史调查,才能确诊.
3—4喹乙醇在鸡体内的蓄积系数为3.24.根据蓄积系数的评价标准为中等蓄积,这一结果
第期董漓波等:哇己醇对鸡的毒性及组织药物浓度研究57
与大鼠进行喹乙酵亚慢性毒性试验的结果一致".
I临床应用畦乙醇不能随意加大剂量,特别是作为饲辩添加剂长期喂饲?应严格控制,否
则易发生中毒.
3.5喹乙醇单剂量给药(30mg/kg)后,在鸡的肌肉,肝,肾,脾,肺中的浓度较低,24h后降
至0.2/g下".而本试验多剂量给药(30mg/kg),每天2次,连用3天后,检测肝,肾,肌肉,胃,脂肪组织,给药24h后的喹乙醇浓度分别为024±015,0.11士0.05,0.13±008t 004士0.070.04以下.说明以30ms/kg体重的单剂量或多剂量喹乙醇给药,其24h 的组
织浓度相接近,在鸡体内消除迅速.
36喹乙醇中毒剂量120ms/kg体重给药,分别于给药后】2,2d,36,48,6O,72h测定肝, 肾,肌肉,胃,脂肪组织药物浓度,在给药后72h的浓度分别为0.16士05,0.06士0.07,0.06
以下,0.06以下,0.O6以下.说明剂量增高,在鸡组织中残留时间延长,特别是在肝,肾组织
的残留与畦乙醇具有中等蓄积作用有关,并易造成组织明显的病理变化.可以认为饲料中添
加噎乙醇的量过太,会引起鸡的中毒.
致谢孟论文是在冯淇辉教授的悉心指导下完成的,组织痛理切片观察得到陈玉汉教授指导.叶启藏实
验师及蒋佩莲等同吉参加部分工作,特此表示衷心感诗}.
参考文献
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58华商农业大学第l'卷
STUDIESONTHETOXICITY ANDTISSUECONCENTRA TIONOF OLAQUINDOXINCHICKENS
DongLiboZengZengⅡngChenZhangliu
(DeltaofV eterinm~Moclicine.SouthaAgr.Univ.) AbstractThetoxicityandtissuecoucentrationofolaquindoxinchickenswereinvestisatedaft er
multipleoraldoses(30mg/kg.twicedaiiyfor3days)andsingleoraldose(120rag/kg).TheLD n
valueofolaquindoxinchickensdetectedbyKarbesmethodwag304.9mg/kgbodyweight.Th e toxicisyofolaquindoxinchickensappearedwhenusedintheconcentration畦O.012infeedfed
for22daysandsomeoftheanimals山ed.Asse~edbyaccumulativetoxicityte*t.theaccumulative coefficientofolaquindoxinchickenswas3.24whichwasavalue.Theolaquindoxconcentrati ons
infiver,kindney,muscule,Vzzardandfat.fchickensweredeterminedbyhighperformanceli quid
chromatography(HPLC)afteradministrationofmultipleoraldosesandsingleoraldose,The con—
Centrationsofthedrugintheabovetissueswerebelow0.04峙/gat24haftermultipleoraldoses.
andbelow0.16g/sat72haftersingleoraldose.Theformerfigureindicatedthatolaquindoxwa s
eliminatedveryrapidlyinchickens,whilethelatterOiReshowedthatthe~drugwaseliminate
dslower
andbersistc~longerinthetissuesasthedosageapproachtoxiclevels.Thepost--morter~andh isto-
.
1~giealfindingsofctzickenswhichdiedolaquind.xopoisoningwerechieflyseverehaemorr hagein
heart.1iver,spleenandkidney.
KeywordsOlaqumdox;Toxicity;Tissueconcentration;HPLC}C~Jcken。