墨鱼缠卵腺糖蛋白的抗氧化及抑菌活性研究

春琳等［10］仅 研 究 了 墨 鱼 缠 卵 腺 的 组 织 学 及 超 微 结 构； 戴宏杰［2］研究了墨鱼缠卵腺的营养成分与评价。 而 有 关 墨 鱼 缠 卵 腺 糖 蛋 白 （ cuttlefish gland glycoprotein，CGG） 的研究鲜见报道，本试验对墨鱼缠 卵腺中糖 蛋 白 进 行 研 究 ，以 期 多 角 度 开 发 墨 鱼 资 源 ，提 高 墨 鱼 资 源 的 优 化 利用。
8期
墨鱼缠卵腺糖蛋白的抗氧化及抑菌活性研究
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有限公司； UV－ 3300 型紫外分光光度计，上海美谱达
仪器有限公司； DNP －9162 型电热恒温培养箱，宁波江
南仪器厂； SW-CJ－ 2FD 型双人单面净化工作台，苏州
净化设备有限公司； STARTER 3C 型 pH 计，奥豪斯仪
器（ 上海） 有限公司； KYC － 100B 空气恒温摇床，宁波
以葡萄糖标准液的质量浓度为横坐标，以吸光值（ A）
（ 宁波大学食品与药品学院，浙江 宁波 315211）
摘 要： 为了探究墨鱼缠卵腺糖蛋白（ CGG） 的抗氧化活性及抑菌活性，本试验通过测定 CGG 的超氧阴离 子自由基清除率、DPPH 自由基清除率、羟基自由基清除能力、小鼠体内过氧化氢酶（ CAT） 活性及谷胱 甘肽过氧化物酶（ GSH-PX） 活性等研究 CGG 体内外抗氧化活性，并通过抑菌试验探讨了 CGG 的抑菌活 性。结果表明，随着 CGG 浓度的增大，超氧阴离子自由基清除率从 17．51%增加至 55．84%，DPPH 自由 基清除率从 5．7%增加至 19．5%，羟基自由基清除能力从 10．38%增加至 57．94%； 与对照组相比，低、中、 高剂量组小鼠体内的 CAT 活性分别提高了 21． 91%、126． 29%、135． 63%，GSH-PX 活性分别提高了 2． 04%、24．69%、28．13%。抑菌试验结果表明，当 CGG 浓度为 14 mg·mL－1 时，大肠杆菌（ Escherichia coli） 、 金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus） 、假单胞菌（ Pseudomonadaceae） 的抑菌圈分别为 15．7、13．6、12．5 mm，MIC 分别为 1．25、7、7 mg·mL－1，MBC 分别为 14、28、14 mg·mL－1。综上表明，CGG 具有一定的抗氧 化和抑菌活性，但抑菌效果较弱。本研究结果为墨鱼缠卵腺的合理利用提供了一定的理论基础，同时对 提高水产资源利用率有一定的参考价值。 关键词： 墨鱼缠卵腺； 糖蛋白； 抗氧化； 抑菌特性 DOI： 10．11869 / j．issn．100－8551．2019．08．1544
1544
文章编号： 1000－8551（ 2019） 08-1544-07
核 农 学 报 2019，33（ 8） ： 1544 ～ 1550 Journal of Nuclear Agricultural Sciences
墨鱼缠卵腺糖蛋白的抗氧化及抑菌活性研究
薛张芝 张洪超 丁 源 徐晓蓉 李 杨 李和生*
1 材料与方法
1．1 材料与试剂 墨鱼缠卵腺购自宁波江北路林市场。邻苯三酚、
Tris-HCl 缓冲液、无水乙醇、水杨酸、磷酸缓冲液、三氯 乙酸、三氯化铁等均为分析纯，购自国药集团化学试剂 有限公司。 1．2 主要仪器与设备
GL21MC 冷冻离心机，湖南湘仪实验室仪器开发
收稿日期： 2018-10-09 接受日期： 2018-12-19 基金项目： 浙江省重大科技专项（ 2009C03017－3） ，宁波市自然科学基金项目（ 013A610156） 作者简介： 薛张芝，女，主要从事食品资源利用研究。E-mail： xuezhangzhi@ 163．com * 通讯作者： 李和生，男，教授，主要从事食品资源利用研究。E-mail： lihesheng@ nbu．edu．cn
墨鱼缠卵腺俗称墨鱼蛋，其味道鲜美，营养丰富， 富含优质蛋白，是一种高蛋白低脂肪的食品，在我国潮 汕地区、日照、宁波等地已成为一种特色美食，深受人 们的喜爱［1－2］。墨鱼缠卵腺中的蛋白与糖结合可形成 糖蛋白（ glycoprotein） ，糖蛋白是分支的寡糖链与多肽 链共价相连而成的复合糖，主链较短，一般情况下，糖 蛋白中糖含量小于蛋白质。国内外研究学者已从河 蚬［3］、扇贝［4］、章 鱼［5］、皱 纹 盘 鲍［6］、鱿 鱼［7］ 等 海 洋 生 物中提取了糖蛋白，发现其具有抗氧化、抗疲劳、抗肿 瘤、降血脂等免疫特性。王倩等［8］在鱿鱼缠卵腺中提 取出糖蛋 白 并 对 提 取 工 艺 进 行 优 化，发 现 采 用 0． 37 mol·L－1NaOH 在 25℃ 条件下提取 3． 5 h 时，糖蛋白提 取率最大，为 12．79%； Shigeru 等［7］从鱿鱼缠卵腺中发 现一种粘蛋白，鉴定其主要成分是糖蛋白，其中蛋白质 含量 16．4%，糖含量 80．3%，硫酸酯含量 3．3%，但并未 对其相关活性进行深入研究； 刘淑集等［9］研究了鱿鱼 缠卵腺糖蛋白的降血脂活性及非特异性免疫功能； 王
江南仪器厂。
1．3 试验方法
1．3．1 CGG 提取物的制备 参考文献［11］的方法。将 新鲜墨鱼缠卵腺去外层薄膜，匀浆，加入 0． 4 mol·L－1 NaOH 提取，料液比 1 ∶20，离心（ 8 000 r·min－1 ） 15 min
取上清液，2 倍无水乙醇进行醇沉 4 h 除去醇溶蛋白和
糖，MD44 透析袋（ 截留分子量 8 000 ～ 14 000 Da） 透析
48 h 除去小分子杂质，采用 DEAE－52 纤维素柱层析，
收集 11 ～ 20 min 时的重叠峰，冻干得糖蛋白粗品，再经
SephacrylM－300HR 凝胶柱层析收集出峰流出液，冻干 后得糖蛋白纯品。分别配制 14、7、3．5、2 mg·mL－1，糖
蛋白样液备用。 糖蛋白中总糖含量测定： 采用硫酸 －蒽酮法［12］。