内质网应激蛋白(BiP、CHOP)在多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上表达的探究 (2)

ASK-1 IVF-ET
ICSI-ET
TVS HMG HCG
HRP
glucose-regulated protein 78 /binding 葡萄糖调节蛋白 78/结合免疫
immunoglobulin protein
球蛋白
PKR-like ER kinase
PEK 内质网激酶
activating transcription factor6
6
结论:
PCOS 组患者卵巢黄体颗粒细胞上内质网应激标志性蛋白 BiP、CHOP 的表达 异常，尤其在高胰岛素血症组和高雄激素血症组，提示 PCOS 患者卵巢黄体颗粒 细胞存在异常凋亡，内质网应激可能参与 PCOS 的发病。 关键词：多囊卵巢综合征；颗粒细胞；内质网应激；CHOP；BiP
7
Expression of BiP and CHOP in luteal Granulosa Cells of Follicles
1
英文缩略词表（Abbreviation）
英文缩写 PCOS E2 FSH LH PRL T FTI A2 SHBG GLU INS HOMA-IR ER UPR AD PD CHOP
英文全称 polycystic ovary syndrome estradiol follicle stimulating hormone luteotropic hormone prolactin testosterone free testosterone index androstenedione sex hormone-binding globulin fasting glucose fasting insulin HOMA insulin resistance index endoplasmic reticulum unfolded protein response alzheimer’s disease parkinson’s disease C／EBP homologus protein
结果
1．两组患者临床指标的比较 PCOS 患者的平均年龄（28.68±3.63）岁，对照组平均年龄（29.96±4.20）岁。
两组间年龄、雌激素（E2）、卵泡刺激素（FSH）、空腹血糖（GLU）、泌乳素（PRL）、 Gn 天数、Gn 支数、获卵数、受精数、卵裂数、MII 卵数、受精率和卵裂率之间比 较差异无统计学意义（P>0.05）；两组间体重指数（BMI）（23.10±3.27 VS 21.36 ±2.68）、黄体生成素（LH）（9.43±6.09 VS 4.80±2.92）、雄烯二酮（A2）（3.02± 1.09 VS 1.81±0.63）、雄激素（T）（1.82±0.93 VS 1.12±1.29）、胰岛素（INS）（10.60 ±5.20 VS 8.60±3.40）及 HOMA-IR（2.50±1.31 VS 1.99±0.84）之间比较 PCOS 患者均高于对照组患者，差异有统计学意义（P<0.05）。而 PCOS 患者的性激素结 合球蛋白（SHBG）（42.37±27.90）明显低于对照组患者的 SHBG（55.47±23.64）， 差异有统计学意义（P<0.05）。
4．BiP 及 CHOP mRNA 在 PCOS 胰岛素抵抗组与非胰岛素抵抗组卵巢黄体颗粒 细胞上的表达
BiP mRNA在胰岛素抵抗的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非胰 岛素抵抗组显著增高（1.41±0.88VS 0.80±0.31），差异有统计学意义（P=0.004）。 CHOP mRNA在胰岛素抵抗的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非胰岛 素抵抗组显著增高（0.50±0.16 VS 0.38±0.19），差异有统计学意义（P=0.025）。
50英文缩略词表abbreviation英文缩写英文全称中文全称pcosfshlhprlshbggluinshomairerupradpdchoppolycysticovarysyndromeestradiolfolliclestimulatinghormoneluteotropichormoneprolactintestosteronefreetestosteroneindexandrostenedionesexhormonebindingglobulinfastingglucosefastinginsulinhomainsulinresistanceindexendoplasmicreticulumunfoldedproteinresponsealzheimersdiseaseparkinsonsdiseasecebphomologusprotein多囊卵巢综合征雌二醇卵泡刺激素促黄体生成素泌乳素睾酮游离睾酮指数性激素结合球蛋白空腹血糖胰岛素胰岛素抵抗指数内质网未折叠蛋白质反应帕金森病ccaat增强子结合蛋白同源蛋白bipperkatf6ire1jnkirglut4mapkpi3ktraf2ask1ivfeticsiettvshmghcghrpglucoseregulatedprotein78bindingimmunoglobulinproteinpkrlikeerkinaseactivatingtranscriptionfactor6inositolrequiringenzymecjunnh2terminalkinaseinsulinresistancesugartransporters4mitogenactivatedproteinkinaselecithinexceptioninositol3kinasetumornecrosisfactorreceptorassociatedfactorapoptosissignalregulatingkinasevitrofertilizationembryotransplantationintracytoplasmicsperminjectionembryotransplantationtransvaginalsonographyhumanmenopausalgonadotropinhumanchorionicgonadotropinhorseradishpero
人绝经期促性腺激素
human chorionic gonadotropin
人绒毛膜促性腺激素
horseradish peroxidase
3
辣根过氧化物酶
内质网应激蛋白(BiP、CHOP)在多囊卵巢综合征患者卵 巢黄体颗粒细胞上表达的研究
中文摘要
多囊卵巢综合征((polycystic ovary syndrome, PCOS) 是育龄妇女最常见的内分 泌异常性疾病。PCOS 患者双侧卵巢存在大量小窦卵泡（直径：2-9mm），但卵泡 发育障碍，不能周期性产生成熟卵泡。其机制可能与卵泡的选择、发育及闭锁的 调控异常有关。大量研究揭示，在卵泡的生长发育过程中，细胞凋亡起着重要的 作用，凋亡可发生在卵子生成、卵泡形成及卵母细胞选择/丢失和闭锁中。胎儿期， 凋亡主要涉及卵母细胞；生育期，凋亡主要累及生长卵泡的颗粒细胞，故 PCOS 患者可能存在异常的颗粒细胞凋亡调控。研究证明 PCOS 卵巢颗粒细胞存在异常 凋亡。内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)是内质网生理功能发生紊 乱的一种病理状态，是机体的一种自我防御机制，过度的 ER 应激将导致细胞凋亡。 ER 应激启动的凋亡途径是近年新发现的一种不同于死亡受体途径和线粒体途径的 信号转导凋亡途径。它通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR) 以保护由 ER 应激所引起的细胞损伤，恢复细胞功能。但如果 ER 应激过强或持续 时间过长，则诱导细胞凋亡。由促生存响应转为促凋亡反应。近年来研究发现 ER 应激与代谢类疾病的发生密切相关，在代谢综合征中的研究十分广泛， PCOS 患 者存在多种代谢异常,但关于 ER 应激与 PCOS 的关系目前国内外尚未见报道。因 BiP、CHOP 是 ER 应激的两个标志性蛋白，且 PCOS 患者存在多种代谢异常和卵 巢颗粒细胞的异常凋亡，因此本文采用 RT-PCR 和 Weston blotting 方法在基因和蛋 白水平观察 BiP、CHOP 在 PCOS 患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达变化，以探讨 ER 应激是否参与 PCOS 的发病。
目录
目 录……………………………………………………………… 1 英文缩略词表………………………………………………………… 2 中文摘要……………………………………………………………… 4 英文摘要……………………………………………………………… 8 引 言……………………………………………………………… 12 实验材料……………………………………………………………… 14 实验方法……………………………………………………………… 17 实验结果……………………………………………………………… 23 实验讨论……………………………………………………………… 30 实验结论……………………………………………………………… 35 实验创新……………………………………………………………… 35 参考文献……………………………………………………………… 36 附 录……………………………………………………………… 41 致 谢……………………………………………………………… 44 综 述……………………………………………………………… 45 参考文献……………………………………………………………… 50
活化转录因子 6
inositol-requiring enzyme 1
肌醇激酶 1
C-Jun NH2-terminal kinase
C-Jun 氨苯末端激酶
insulin resistance
胰岛素抵抗
sugar transporters-4
糖转运蛋白-4
mitogen-activated protein kinase
5． BiP、CHOP mRNA 在 PCOS 高雄激素血症组与非高雄激素血症组卵巢黄体 颗粒细胞上的表达 BiP mRNA在高雄激素血症的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非高雄 激素血症组明显增高（1.28±0.72 VS 0.77±0.67），差异有统计学意义（P=0.031）。 CHOP mRNA高雄激素血症的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非高雄 激素血症组明显增高（0.49±0.20 VS 0.34±0.08），差异有称 多囊卵巢综合征 雌二醇 卵泡刺激素 促黄体生成素 泌乳素 睾酮 游离睾酮指数 雄烯二酮 性激素结合球蛋白 空腹血糖 胰岛素 胰岛素抵抗指数 内质网 未折叠蛋白质反应 阿尔茨海默病 帕金森病 CCAAT－增强子结合蛋白同 源蛋白
BiP
PERK ATF6 IRE-1 JNK IR GluT-4 MAPK PI3K TRAF-2
有丝分裂原激活蛋白激酶
lecithin exception inositol-3-kinase
磷脂酞肌醇-3-激酶
tumor necrosis factor recep- 肿瘤坏死因子受体相关因子
tor-associated factor
-2
apoptosis signal regulating kinase 1 凋亡信号调节激酶-1
in vitro fertilization-
体外受精-胚胎移植
embryo transplantation
Intracytoplasmic sperm injection-
卵胞浆单精子注射-胚胎移植
embryo transplantation
transvaginal sonography
阴道超声
human menopausal gonadotropin
3．内质网应激标志性蛋白 BiP、CHOP 蛋白在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平 PCOS 组患者卵巢黄体颗粒细胞上 BiP 蛋白条带灰度值高于对照组(0.56±0.13
VS 0.40±0.17)，两组比较有统计学差异( P=0.040)。PCOS 组患者卵巢黄体颗粒细 胞上 CHOP 蛋白条带灰度值较对照组有增高趋势（0.62±0.26 VS 0.56±0.17）， 但差异无统计学意义 ( P =0.261)。Western blotting 检测结果与 RT-PCR 结果基本 一致。
5
2. 内质网应激标志性蛋白 BiP、CHOP mRNA 在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平 PCOS 组患者卵巢黄体颗粒细胞上 BiP mRNA 的表达明显高于对照组(1.09±
0.63 VS 0.79±0.34)，差异有统计学意义( P =0.021)。PCOS 组患者卵巢黄体颗粒细 胞上 CHOP mRNA 的表达较对照组有增高趋势（0.45±0.20 VS 0.40±0.18），但 差异无统计学意义( P=0.061)。
from Polycystic Ovary Syndrom
ABSTRACT
目的：
旨在研究多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上内质网应激蛋白 BiP、 CHOP 蛋白的表达水平。初步探讨 ER 应激是否参与 PCOS 的发病。
4
方法：
收集 45 例 PCOS 不孕患者在安徽医科大学第一附属医院生殖中心行 IVF-ET 取卵时的黄体颗粒细胞。PCOS 的诊断均符合 PCOS 鹿特丹诊断标准，年龄在 18~35 岁之间，并排除经过相关治疗的患者。同时收集同期同年龄段因男方因素不孕患 者行 IVF/ICSI-ET 取卵时的黄体颗粒细胞 45 例作为对照组，月经周期规则，并排 除鹿特丹标准中月经规律的 PCOS 患者。该实验经临床研究伦理委员会批准，所 有患者均签署知情同意书。(1) 应用 RT-PCR 方法检测内质网应激蛋白 BiP、CHOP mRNA 在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平，比较两组之间是否存在差异；(2)应用 Western-blotting 方法检测内质网应激蛋白 BiP、CHOP 蛋白在卵巢黄体颗粒细胞上 的表达水平，以验证 RT-PCR 的检测结果。HOMA-IR( HOMA insulin resistance index) = GLU×INS / 22.5。当 HOMA-IR ≥1.66 时，表示患者存在胰岛素抵抗。游离睾酮 指数(FTI)=T(nmol/L) ×100/SHBG (nmol/L)，当 FTI≥3.36，时表示患者存在高雄 激素血症。