骨髓间充质干细胞形态观察

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2 结果
2.1 骨髓间充质干细胞形态观察 利用淋巴细胞分离液分离骨髓血可得到明显的白膜层，接种到培养瓶中的白膜层细胞第2、3天开始贴壁，两端有较长突起，胞核卵圆形，细胞呈克隆样生长，形成大小不一的集落，起初生长较慢，2周左右达到80%~90%汇合。

传代后细胞呈均匀分布生长，形态为长梭形，倍增时间二三天，见图2。

分离培养的骨髓间充质干细胞经反复传代仍能保持多向分化潜能，且纯度可达到90%以 上[22]。

2.2 骨髓间充质干细胞的鉴定 分离培养的第3代细胞免疫荧光显示大部分呈CD44阳性，不表达
CD34；体外可诱导分化为脂肪细胞，油红O 染色阳性，具有多向分化潜能。

以上结果表明实验所分离培养的为骨髓间充质干细胞。

2.3 神经细胞形态观察 培养2 d 后，神经细胞大部分已贴壁，胞体饱满，多呈纺锤形，胞质透亮，细胞胞体伸出小的突起，生长状态良好。

有些细胞胞体扁平，体积较大，伸出1个或多个棒状的大突起，此为胶质细胞。

培养6~7 d 后，神经细胞的胞体增大，呈圆形或椭圆形，胞体周围的突起充分伸展并延长，形成单极、双极或多极突起。

2.4 共培养细胞形态变化及免疫荧光检测结果
共培养组第3天可见原来扁平的骨髓间充质干细胞收缩变小，胞体大多圆形，形成突起，细胞逐渐变成星状，见图3，4。

Figure 2 The third passage of bone marrow mesenchymal stem cells （×40） 图2 第3代的骨髓间充质干细胞（×40）
Figure 3 Stellate cells extended in growth in the co-cultu re grou p at day 3（×40） 图3 共培养第3天细胞伸展生长呈星状（×40） Figure 4 Stellate neuron-like cells in the third day of co-culture （×200） 图4 共培养第3天星状神经样细胞（×200）
共培养组第4~5天后星状细胞数目逐渐增多，并可互相形成连接，具有神经样形态结构，免疫荧光显示神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达，见图5，阳性率为 （32.7±11.5）%，表现神经元细胞的特性。

对照组培养8 d 时，大部分骨髓间充质干细胞依然呈扁而宽的形态特点，未形成神经样形态结构，免疫荧光显示神经元特异性烯醇化酶呈阴性。

Figure 5
Neuron specific enolase-positive cells in the fifth day of co-culture （×100） 图5 共培养第5天神经元特异性烯醇化酶染色阳性（×100）。