蛋白质的两性电离及等电点测定实验
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实 验 一 蛋 白 质 两 性 电 离 与 等 电 点
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第1页
【教学目标】
➢ 1、独立操作，一丝不苟地作试验。 ➢ 2、仔细观察不一样阶段试剂颜色改变及沉淀出现
和消失，经过现象观察能分析蛋白质两性电离性 质，正确填写试验汇报。 ➢ 3、经过往五支不一样pH值溶液试管内加入酪蛋 白，观察沉淀出现情况，确定其等电点。 ➢ 4、共同讨论测定等电点原理。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第11页
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第2页
一、蛋白质两性电离 多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，
如：末端-COO-、-NH3+，酸性氨基酸侧 链- COO- ，Lysε-NH3+，Arg胍基，His 咪唑基。
*蛋白质等电点(pI) 当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为 零，此时溶液pH称为蛋白质等电点。
滴入NaOH溶液
继续滴入NaOH溶液 至沉淀溶解
试验结果
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
简明分析
第8页
2、酪蛋白等电点测定
（1）取5支试管，编号后按下表次序准确地加入各 种试剂，．然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸钠 溶液后，须马上摇匀该管)。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第9页
试剂(ml)及管号
（1）取一支试管，加入0.5％酪蛋白醋酸钠溶液20滴和 0.01％溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，统计， 并分析原因。
（2）用细滴管迟缓加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇， 直至有显著大量沉淀发生，此时溶液pH值靠近酪蛋白等 电点。观察溶液颜色改变，统计，分析原因。
（3）继续滴入0.02mol／L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色 改变，统计，分析原因。
pH3.8～5.4。指示剂酸色型为黄色，碱色型为 蓝色。 ➢ 3、0.02mol／L盐酸溶液 ➢ 4、0.02mol／L氢氧化钠溶液 ➢ 5、1.00mol／L乙酸溶液 ➢ 6、0.10mol／L乙酸溶液 ➢ 7、0.01mol／L乙酸溶液
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第6页
【操作】
1、蛋白质两性电离
第4页
【试验原理】
蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液 pH值为等电点时游离为两性离子，溶解度 最低，轻易沉淀析出。若在大于或小于等 电点溶液中，因蛋白质分子带有同种电荷 而相互排斥，不易产生沉淀。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第5页
【试剂】 ➢ 1、0.5％酪蛋白醋酸钠 ➢ 2、0.01％溴甲酚绿指示剂 变色范围是
（4）再滴入0.02mol／L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否 出现沉淀，统计，解释原因。当继续滴入0.02mol／L氢 氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色改变。解释其原因。 作好统计。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第7页
结果及分析
操作
在酪蛋白溶液中加入 指示剂 滴入HCL至出现大量 沉淀 继续滴入HCL
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第3页
蛋白质性质之一：两性电离与等电点
NH3+
P
+OH-
COOH +H+
正离子
pH＜pI
P NH3+ +OH-
+H+
COO--
兼性离子 pH=pI
NH2
P
COO-
负离子 pH＞pI
各种蛋白质氨基酸组成不一样，解离情况不一样， 等电点不一样。多数靠近5.0。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
1
2
3
4
5
蒸馏水（ml)
1.6
_
3.0 1.5 3.4
0.01mol/L醋酸溶液
_
_
_
2.5 0.6
0.10mol/L醋酸溶液_
1.0mol/L醋酸溶液
2.4
_
_
_
_
酪蛋白醋酸钠溶液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
溶液最终pH
3.2 4.1 4.7 5.3 5.9
沉淀出现多少
(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液混浊度，以-，+，
++，+++，++++符号表示沉淀多少，将结果统计于上表
中。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第10页
（3）该试验要求各种试剂浓度和加入量必须相当 准确。除了需要精心配制试剂以外，试验中应严 格按照定量分析操作进行。
思索题
• 依据试验观察结果，指出哪一支试管pH是酪蛋 白等电点？在等电点时蛋白质溶解度为何最低？ 请结合你试验结果和蛋白质胶体性质加以说明。
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【教学目标】
➢ 1、独立操作，一丝不苟地作试验。 ➢ 2、仔细观察不一样阶段试剂颜色改变及沉淀出现
和消失，经过现象观察能分析蛋白质两性电离性 质，正确填写试验汇报。 ➢ 3、经过往五支不一样pH值溶液试管内加入酪蛋 白，观察沉淀出现情况，确定其等电点。 ➢ 4、共同讨论测定等电点原理。
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一、蛋白质两性电离 多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，
如：末端-COO-、-NH3+，酸性氨基酸侧 链- COO- ，Lysε-NH3+，Arg胍基，His 咪唑基。
*蛋白质等电点(pI) 当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为 零，此时溶液pH称为蛋白质等电点。
滴入NaOH溶液
继续滴入NaOH溶液 至沉淀溶解
试验结果
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简明分析
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2、酪蛋白等电点测定
（1）取5支试管，编号后按下表次序准确地加入各 种试剂，．然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸钠 溶液后，须马上摇匀该管)。
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试剂(ml)及管号
（1）取一支试管，加入0.5％酪蛋白醋酸钠溶液20滴和 0.01％溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，统计， 并分析原因。
（2）用细滴管迟缓加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇， 直至有显著大量沉淀发生，此时溶液pH值靠近酪蛋白等 电点。观察溶液颜色改变，统计，分析原因。
（3）继续滴入0.02mol／L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色 改变，统计，分析原因。
pH3.8～5.4。指示剂酸色型为黄色，碱色型为 蓝色。 ➢ 3、0.02mol／L盐酸溶液 ➢ 4、0.02mol／L氢氧化钠溶液 ➢ 5、1.00mol／L乙酸溶液 ➢ 6、0.10mol／L乙酸溶液 ➢ 7、0.01mol／L乙酸溶液
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【操作】
1、蛋白质两性电离
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【试验原理】
蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液 pH值为等电点时游离为两性离子，溶解度 最低，轻易沉淀析出。若在大于或小于等 电点溶液中，因蛋白质分子带有同种电荷 而相互排斥，不易产生沉淀。
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【试剂】 ➢ 1、0.5％酪蛋白醋酸钠 ➢ 2、0.01％溴甲酚绿指示剂 变色范围是
（4）再滴入0.02mol／L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否 出现沉淀，统计，解释原因。当继续滴入0.02mol／L氢 氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色改变。解释其原因。 作好统计。
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结果及分析
操作
在酪蛋白溶液中加入 指示剂 滴入HCL至出现大量 沉淀 继续滴入HCL
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蛋白质性质之一：两性电离与等电点
NH3+
P
+OH-
COOH +H+
正离子
pH＜pI
P NH3+ +OH-
+H+
COO--
兼性离子 pH=pI
NH2
P
COO-
负离子 pH＞pI
各种蛋白质氨基酸组成不一样，解离情况不一样， 等电点不一样。多数靠近5.0。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
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蒸馏水（ml)
1.6
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3.0 1.5 3.4
0.01mol/L醋酸溶液
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2.5 0.6
0.10mol/L醋酸溶液_
1.0mol/L醋酸溶液
2.4
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酪蛋白醋酸钠溶液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
溶液最终pH
3.2 4.1 4.7 5.3 5.9
沉淀出现多少
(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液混浊度，以-，+，
++，+++，++++符号表示沉淀多少，将结果统计于上表
中。
蛋白质的两性电离及等电点测定实验
第10页
（3）该试验要求各种试剂浓度和加入量必须相当 准确。除了需要精心配制试剂以外，试验中应严 格按照定量分析操作进行。
思索题
• 依据试验观察结果，指出哪一支试管pH是酪蛋 白等电点？在等电点时蛋白质溶解度为何最低？ 请结合你试验结果和蛋白质胶体性质加以说明。