(17)--27.7HLA分型方法的应用
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◆ 代表受者血液循环中的抗HLA抗体 ◆ 反应受者对HLA抗原致敏程度 ◆ 移植前的重要指标 ◆ 与移植排斥反应和存活率密切相关
受者群体反应性抗体(PRA)检测方法
◆ 补体依赖的细胞毒试验 ◆ ELISA ◆ 流式
ELISA
操作步骤： ◆包被HLA抗原 ◆加入待测血清 ◆加入酶标记的抗人IgG或IgM抗体 ◆底物显色
HLA交叉配型方法
淋巴细胞交叉配型 流式细胞术交叉配型 自身交叉配型
淋巴细胞交叉配型
受者血清
混合
供者外周血
室温放置30min 加入补体
室温放置1h 加入染色液
室温放置3min 加入甲醛溶液
室温放置30min
计数死亡细 胞
流式细胞术交叉配型
Control
Sample 1
自身交叉配型
受者血清
混合
补体依赖的细胞毒试验
• 方法： 将受者血清 、供者淋巴细胞和补体共育 ，通过计数死
亡淋巴细胞的百分比 ， 以检测受者血清中预存抗供者淋 巴细胞抗体水平。 • 特点：
只检测补体结合的抗体 ， 即细胞毒性抗体 ，不能确定 阳性抗体的类别 ，可用于交叉配型。
ELISA
特点： ◆简单易行 ◆不需供者细胞 ◆敏感性高 ◆能检测抗HLA I或II类抗原IgG抗体 ◆定性和定量同时完成。
流式细胞术——磁性微球法
磁性 Y Y
微球
HLA分型方法的Байду номын сангаас用
HLA分型方法的应用
供 、受者HLA配型 HLA交叉配型与预存抗体的检测 群体反应性抗体的检测
HLA分型标准
1987年 ，强制性HLA-A、B、DR六抗原相配标准 ，相配率仅占2-5% 1995年 ，HLA-A、B、DR六抗原无错配（0 Ag MM） ，相配率≥15% 1996年3月 ， HLA-I类氨基酸残基配型 ，简称Res M
1996年10月 ， 中国汉族人HLA-I 、II类氨基酸残基配型标准—谭建明教授
HLA配型与移植物存活之间的关系
供 、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多 ，移植物的存活概率 越高；
供 、受者HLA-DR位点相配更为重要。 由于不同地区HLA位点连锁不平衡性存在差异 ，不同地区HLA匹 配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值。
受者淋巴细胞
室温放置30min 加入补体
室温放置1h 加入染色液
室温放置3min 加入甲醛溶液
室温放置30min
计数死亡细 胞
交叉配型的目的
◆ 供受者间同种反应性T细胞的反应性 ◆ 受者或供者血清预存抗对方淋巴细胞细胞毒抗体
受者群体反应性抗体(panel reactive antibody, PRA
受者群体反应性抗体(PRA)检测方法
◆ 补体依赖的细胞毒试验 ◆ ELISA ◆ 流式
ELISA
操作步骤： ◆包被HLA抗原 ◆加入待测血清 ◆加入酶标记的抗人IgG或IgM抗体 ◆底物显色
HLA交叉配型方法
淋巴细胞交叉配型 流式细胞术交叉配型 自身交叉配型
淋巴细胞交叉配型
受者血清
混合
供者外周血
室温放置30min 加入补体
室温放置1h 加入染色液
室温放置3min 加入甲醛溶液
室温放置30min
计数死亡细 胞
流式细胞术交叉配型
Control
Sample 1
自身交叉配型
受者血清
混合
补体依赖的细胞毒试验
• 方法： 将受者血清 、供者淋巴细胞和补体共育 ，通过计数死
亡淋巴细胞的百分比 ， 以检测受者血清中预存抗供者淋 巴细胞抗体水平。 • 特点：
只检测补体结合的抗体 ， 即细胞毒性抗体 ，不能确定 阳性抗体的类别 ，可用于交叉配型。
ELISA
特点： ◆简单易行 ◆不需供者细胞 ◆敏感性高 ◆能检测抗HLA I或II类抗原IgG抗体 ◆定性和定量同时完成。
流式细胞术——磁性微球法
磁性 Y Y
微球
HLA分型方法的Байду номын сангаас用
HLA分型方法的应用
供 、受者HLA配型 HLA交叉配型与预存抗体的检测 群体反应性抗体的检测
HLA分型标准
1987年 ，强制性HLA-A、B、DR六抗原相配标准 ，相配率仅占2-5% 1995年 ，HLA-A、B、DR六抗原无错配（0 Ag MM） ，相配率≥15% 1996年3月 ， HLA-I类氨基酸残基配型 ，简称Res M
1996年10月 ， 中国汉族人HLA-I 、II类氨基酸残基配型标准—谭建明教授
HLA配型与移植物存活之间的关系
供 、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多 ，移植物的存活概率 越高；
供 、受者HLA-DR位点相配更为重要。 由于不同地区HLA位点连锁不平衡性存在差异 ，不同地区HLA匹 配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值。
受者淋巴细胞
室温放置30min 加入补体
室温放置1h 加入染色液
室温放置3min 加入甲醛溶液
室温放置30min
计数死亡细 胞
交叉配型的目的
◆ 供受者间同种反应性T细胞的反应性 ◆ 受者或供者血清预存抗对方淋巴细胞细胞毒抗体
受者群体反应性抗体(panel reactive antibody, PRA