小麦粉破损淀粉测定法

小麦粉破损淀粉测定法
中华人民共和国国家标准
小麦粉破损淀粉测定法GB9826-88α-淀粉酶法
Methodfordeterminationofstarchdamageinflour-Alpha-amylase method
1主题内容与适用范围本标准规定了用α-淀粉酶测定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析的步骤以及结果计算。

本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。

2方法原理小麦粉中破损淀粉对α-淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉,在常温下能被α-淀粉酶降解生成糊精和一定量的还原糖。

利用此特性,在规定的条件下,用α－淀粉酶降解小麦粉中破损淀粉,再用铁氰化钾法测定其还原糖量,并根据法兰德的经验公式计算小麦粉中的破损淀粉值。

3试剂以下试剂未经标明的均为分析纯试剂,水为蒸馏水。

缓冲溶液溶解g无水乙酸钠于水中,加入3mL冰乙酸,再用水稀释至1000mL,pH值应为±。

提取溶液将20g氯化钠及乙酸钙溶于水中,再稀释至1000mL。

α-淀粉酶液称取活性相当于15000±1500A的α-淀粉酶制剂溶于500mL提取液中,再加入500mL缓冲液,α-淀粉酶活性测定见附录A(补充件)α-淀粉酶活性测定。

此溶液用时现配。

10％(V/V)硫酸溶液。

12％钨酸钠溶液。

碱性铁氰化钾溶液称取干燥纯净的铁氰化钾与无水碳酸钠溶于1000mL水中,贮于棕色瓶避光保存。

乙酸盐溶液70g氯化钾和40g硫酸锌溶于水中,加入200mL冰乙酸,再用水稀释至1000mL。

10％碘化钾溶液。

1％淀粉溶液。

硫代硫酸钠溶液称取硫代硫酸钠(含5个结晶水)和四硼酸钠溶于1000mL水中,贮于棕色瓶避光保存,一星期后按GB5490《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录B规定方法标定其浓度。

酸洗石英砂。

4仪器和用具
玻璃试管:φ25×220mm。

量筒:50mL;25mL。

恒温水浴:可控温30±℃。

秒表。

加液器或移液管:2mL;10mL。

移液管:5mL。

玻璃漏斗及中速滤纸。

电炉。

锥形瓶:100mL。

滴定管:10mL。

天平:感量;。

pH计或精密pH试纸:可测±。

5分析步骤
称样量一般小麦粉均假定其水分含量为％,淀粉含量为68％～72％,称样量为±。

如果淀粉含量过高或过低时,则称样量应按式(1)计算:
70
称样量(g)＝──── (1)
(95-P-M)
式中:P--100g试样中蛋白质的克数(含氮量×);M--100g 试样中水分的克数。

酶解称取规定量的试样于玻璃试管中,加入1小勺酸洗石英砂,混匀并将式样摇松倾斜于试管底部,准确量取46mL 已预热至30℃的α-淀粉酶液,先将少许α-淀粉酶液加入试样中并尽量摇匀,立即计时,再加入其余α-淀粉酶液,加盖试管并
上下颠倒摇动约30次使试样均匀悬浮.迅速将试管浸入30℃水浴中,然后每隔10min取出试管,上下颠倒摇动10次使试样重新均匀悬浮,恒温酶解刚好60min时,取出试管,立即加入2mL10％硫酸溶液,充分混匀后,再加入2ml12％钨酸钠溶液,摇匀并放置约2min后,用中速滤纸过滤。

充去最初几滴,收集滤液于干净锥形瓶中,此滤液即为试样测定液。

另取一支试管不加小麦粉试样,同时同上操作,所得滤液即为空白对照液。

测定还原糖准确吸取5ml试样液于试管中,再准确加入10mL碱性铁氰化钾溶液,混合后将试管浸入剧烈沸腾的水中(可将试管置于铁丝笼架放入铝锅煮沸的水中,每次可同时作多个样品的测定),继续加热待水再沸腾后开始计时,准确反应20min后,取出试管立即置流水冷却。

冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶中,并用25mL乙酸盐溶液分三次洗涤试管一并倒入锥形瓶内,再加入10mL10％碘化钾溶液。

然后用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色,再加入约1mL1％淀粉液,继续滴定至溶液蓝色消失(半分钟内溶液不返蓝色),记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V1(mL)。

吸取空白对照液5mL代替试样液,同上操作,记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V2(mL)。

6结果计算
氧化5mL样品液(相当于小麦粉样品)中还原糖所需铁氰化钾体积V按式(2)计算:CV＝(V2－V1)×──-………………………………………………(2)式
中:V--氧化试样液中还原糖所需的铁氰化钾液的体积,mL;V1--滴定试样液用去硫代硫酸钠的体积,mL;V2--滴定空白液用去硫代硫酸钠的体积,mL;C--硫代硫酸钠的摩尔浓度,M;换算成铁氰化钾溶液体积的系数。

小麦粉麦芽糖值的确定根据式(2)计算所得V值在表1中用插入法查出相应的100g小麦粉中含有麦芽糖的克数,即为该样品的麦芽糖值L。

表1小麦破损淀粉的麦芽糖值换算表
被还原的铁氰化钾mL每100g面粉麦芽糖值g被还原的铁氰化钾mL每100g面粉麦芽糖值g被还原的铁氰化钾mL每100g面粉麦芽糖值g被还原的铁氰化钾mL每100g 面粉麦芽糖值g
小麦粉破损淀粉值(P)按式(3)计算:
P＝(5×L－)×6………………………………………(3)式中:L--小麦粉麦芽糖值。

7结果允许差两次测定结果之差不得超过平均值的5％,测定结果保留小数点后一位。

附录Aα-淀粉酶活性的测定(补充件)
A1主题内容和适用范围本补充件规定了用比色法测定α-淀粉酶活性的方法。

本补充件适用于各种来源的α－淀粉酶制剂及谷类产品的α-淀粉酶活性的测定。

A2方法原理α-淀粉酶能降解β-限制糊精,经过不
同的反应时间后.反应混合物与碘的显色强度随时间增加而降低,用测定这种显色强度随时间降低的速度来反映α-淀粉酶的活性。

A3试剂以下试剂未经标明的均为分析纯,水为蒸馏水。

％氯化钙溶液
碘贮备液溶解碘化钾于少量水中,加入结晶碘,搅抖至碘完全溶解,再稀释至250mL,置棕色瓶中贮于暗处。

此液可保存一个月。

碘稀释液溶解碘化钾于水中,加入碘贮备液,用水稀释至1000ml,用时现配。

缓冲溶液溶解164g无水乙酸钠或272g三水乙酸钠(CH3COONa·3H2O)于水中,加入120ml冰乙酸,用水稀释至1000mL。

可溶性淀粉。

β-淀粉酶液取10g具有酶活性的新鲜黄豆粉(粗细度为通过孔筛的筛下物)于烧杯中,加入85mL水和15mL硫酸溶液,充分搅匀,静置15min后,用中速滤纸过滤,该滤液用于制备β-限制糊精。

硫酸溶液。

β-限制糊精称取(以干态计)可溶性淀粉于小烧杯中,加入约20ml水,搅拌使成悬浮液,然后将悬浮液边搅拌边缓慢倒入盛有约100mL沸腾水的高型烧杯中,并用洗瓶将小烧杯中
淀粉全部转移至高型烧杯,继续搅拌并加热使缓慢沸腾2min,然后用表面皿盖上烧杯口,取出用流水冷却,再加入25mL缓冲溶液及50mLβ-淀粉酶液,在室温下,放置24h后,加入一匙浮石粉,在10min内缓慢加热至沸,保持沸腾5min后,取出流水冷却,最后用水定容至250mL,摇匀、过滤,滤液中加几滴甲苯,在25℃以下贮存5天,此溶液的pH须在±。

A4仪器和用具
玻璃试管。

高型烧杯:250mL。

容量瓶:250mL;100mL。

玻璃漏斗:φ6cm。

表面皿:φ7cm。

移液管:2mL;5mL;15mL。

量筒:25mL;50mL。

加液器或移液管:10mL。

电炉:1000W。

恒温水浴:可控温30±℃及20＋℃。

秒表。

实验磨粉机。

筛子:孔径为及。

pH计或精密pH试纸:可测±。

分光光度计。

A5分析步骤α-淀粉酶溶液的配制
酶制剂α-淀粉酶液的配制称取α-淀粉酶制剂4～8mg,用％氯化钙溶液溶解并稀释至100mL。

根据该溶液酶活性的大小再用％氯化钙稀释至适合于测定活性的溶液,稀释后的溶液应使35％～60％的限制糊精在15～40min内被降解,即最后测得的吸光度值应为底物校准时吸光度值的40％～65％。

麦芽粉及其他产品α-淀粉酶液的配制测定麦芽粉可称样100g,如测定其他产品,则根据酶活性的大小拟定称样量,均按下述步骤提取酶液。

将预先在30℃水浴中恒温10min以上的％氯化钙溶液100±加入试样中,加塞振摇使充分混合,立即置于30℃水浴中,每隔15min取出试管,上下颠倒混合10次,再浸入水浴(振摇次数与程度对结果有影响),恒温提取60min 后取出过滤(不要振A。