杨树Na +／H +反向运输蛋白基因(PtNHX1、PtNHX6)的克隆和检测
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第４ ２卷 第 １ 期 １
２ ６年 １ ０ ０ １月
林
业
科
学
Ｖｏ０６
Ｓ ＥＮＴＩ ＣＩ Ａ
Ｓ ＬＶＡＥ Ｉ
Ｓ ＮＩ Ｉ ＣＡＥ
杨 Ｎ ＋Ｈ＋ 向运 输 蛋 白基 因 （ ｔＨ ＰＮ Ｘ ） 树 ａ／ 反 ＰＮ Ｘ 、 ｔＨ ６
在 模 式植 物 拟 南 芥 中分 离 出 ＡＮ Ｘ 、 ｔＨ ２ ＡＮ Ｘ 、 ｔＨ ４ ＡＮ Ｘ ｔＨ ￣ ＡＮ Ｘ 、 ｔＨ ３ ＡＮ Ｘ 、 ｔＨ ｓ和 ＡＮ Ｘ 共 ６个 成 员 ， 发 现 部 分 成 员 对 ｔＨ ６ 并 盐 胁 迫 有 不 同 程 度 的响 应 。 以 ＡＮ Ｘ ｔＨ ￣和 ＡＮ Ｘ ｔＨ ６的 ｃ Ｎ Ｄ Ａ核苷 酸序 列 为 信 息探 针 ， 于 可 利 用 的 杨 树 Ｅ Ｔ数 据 库 基 Ｓ 和 毛 果 杨 全 基 因组 测 序 结 果 ， 过 电子 杂 交辅 助 的 克 隆技 术 ， 毛 白杨形 成 层 ｃ Ｎ 中分 离 得 到 长 度 分 别 为 １ ３ ｐ 通 从 ＤＡ ５ｂ ６ 和 １ ０ ｐ的 ２个 ｃ Ｎ 其 分 别 含 有 编 码 ５４个 和 ５６个 氨 基 酸 残 基 的 完 整 开 放 阅读 框 。由 它 们 所 推 导 的 蛋 白质 ９ｂ ７ Ｄ Ａ， ４ ２ 序列与拟南芥 、 稻 、 麦和玉米 的 Ｎ Ｘ 水 小 Ｈ 和 Ｎ Ｘ Ｈ ６基 因的 蛋 白质 序 列 高 度 同 源 ，同源 性 分 别 为 ７ ％ 、６ 、９ 和 ９ ７％ ６％ ７ ％ 以及 ８ ％ 、 ２ 、 ７ 和 ２ ％ ，故 将 其 命 名 为 ＰＮ Ｘ ４ ２ ８％ ２％ ６ ｔＨ ￣和 ＰＮ Ｘ Ｇ ｎ ａｋ 注 册 号 分 别 为 Ａ ６ ０４ 和 ｔＨ ６（ ｅＢ ｎ Ｙ ６ ７９ Ａ ８２ １） ｏ山 ｍ 杂 交 分 析 表 明 ，ＰＮ Ｘ 和 ＰＮ Ｘ 均 为 低 拷 贝 基 因 （ 有 一 些 高 度 同 源 的 基 因 ）在 杨 树 基 因 Ｙ ３９２ 。Ｓｕ ｅ ｔＨ ￣ ｔＨ ６ 或 ， 组 中 以 １— ４个 拷 贝 形 式 存 在 。组 织 特 异 性 Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ结 果 显 示 ，ＰＮ Ｘ 和 ＰＮ Ｘ ｔＨ ， ｔＨ ６基 因 在 杨 树 根 、 和 叶 片 中 均 有 茎 表达 ， 其 表 达 模 式 稍 有 不 同 ： ｔＨ ￣ 根 部 、 成 层 、 成 熟 木 质 部 、 熟 叶 和 嫩 叶 中均 高度 表 达 ， 韧 皮 部 和 成 但 ＰＮ Ｘ 在 形 未 成 在 熟木 质部 中有 少 量 表 达 ， ＰＮ Ｘ 而 ｔＨ ６在 根 部 、 熟 叶 和 嫩 叶 中 表 达 丰 度 较 高 ， 韧 皮 部 、 成 层 、 成 熟 木 质 部 表 达 成 在 形 未 丰 度较 低 ， 成 熟 木 质 部 中表 达 丰 度 极 低 。Ｎ Ｃ 诱 导 的 杨 树 叶 片 差 异 表 达 Ｒ －Ｃ 在 ａＩ ＴＰ Ｒ检 测 结 果 初 步 表 明 ， ｔＨ ￣和 ＰＮ Ｘ ＰＮ Ｘ 基 因 均 受 盐诱 导 表 达 ， ｔＨ ６ 当溶 液 中 Ｎ Ｃ 浓 度 在 １０—４Ｏｍ ｏ・ Ｉ 内 ， 着 盐 浓 度 的 提 高 ， ｔＨ ￣和 ＰＮ Ｘ ａＩ ０ Ｏ ｍ ｌＬ１ 随 ＰＮ Ｘ ｔＨ ６ 基 因 的 表 达 丰 度 逐 渐 增 强 ， 超 过 ４Ｏｍ ｏ・Ｉ后 ， 表 达 丰 度 均 有 所 降 低 ， 与所 测 定 的 叶 片 Ａ Ａ含 量 匹 配 。 但 Ｏ ｍ ｌＬ １ 其 这 Ｂ 关 键 词 ： 杨 树 ； ａ ／ 反 向运 输 蛋 白 ；反 转 录 Ｐ Ｒ Ｎ Ｈ Ｃ ；盐诱 导 的差 异 表达
Ａ ｔ ｏｔｒＧｅｅ ＰＮＨＸ１ ｔ ｎ ｐ ｒｅ ｎ ｓ（ ｔ ｉ ，ＰＮＨＸ６ ｎ Ｐ ｐ ｌｓ ）ｉ ｏ ｕｕ
Ｚｈ ｎ ｑ ａ ｇ Ｚ ａ ｈ ｔｎ Ｌ ｎ ｚ ｕ Ｔ ａ ｉ ａ ｇ Ｄｅ ｉｎ ｈ ｏ Ｓ ｕ ａ ｇ ｕ Ｍｅ ｇ ｈ ｉｎ Ｌ ｎ
（ ｅ ａｃ ｎｔｕ ｏ ｔ Ｒｓ ｒ ｓｔｔｏ ｒ ｒ ｅ ｈＩ ｉ ｅｆＦ ｅ ｙ，Ｃ Ｆ ＫｙＬ ｂｒ ｏ ｏ ｒ ｒ ｄ ｇａｄＣ ｌｖ ｉｎ ｔｅＦ ｒｔ Ａ ｍｎｓａｏ ＆ ， ０ ０ １ ｓ Ａ ｅ ｏａ ｒ ｆ Ｔｅ Ｂｅ ｉ ｎ ｕｉ ｏ ，Ｓ ｔ ｏｅｒ ｄ ｉｉｒ ｉ ａ ｔｙ ｅ ｎ ｔａ ｔ ａ ｓ ｙ ｔ ｎ ｔ ｌ １０９ ） ｇ
的克 隆和检 测
张德 强 赵 树 堂 卢 孟柱 田 ‘ 林
（ 国林 业 科 学 研 究 院 林 业研 究 所 国家 林 业 局林 木 培 育 重 点 实 验 室 中 北 京 １０ ９ ） ００ １
摘
要 ： Ｎ ／ 反 向运 输 蛋 白 基 因 （ Ｈ 是 在 细 菌 、 物 和 动 物体 内 普 遍 存 在 的 一 类 膜 蛋 白基 因家 族 。迄 今 已 ａ Ｈ Ｎ Ｘ） 植
中 图分 类 号 ：７ ８４ ； ９ ３ ２ ￥ １ ． Ｑ ４ ． ６ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ １ ４ ８ ２０ ） １ ０ ２ —０ １０ —７ ８ （ ６ １ — ０ ９ ８ ０
Ｉ ｏａ ｉ ｎ ａ ａ ａ ｔ ｒｚ ｔｏ ｆＴｗｏ Ｎａ —ｎｄ ｉ ｌ ｃ ｏ ａ ／ ｓ ｌ ｔ ｎｄ Ｃｈ ｒ ｃ ｅ ｉａ ｎ ｏ ｏ ｉ ＣｌＩ ｕｃｂ ｅ Ｖａ ｕ ｌ ｒ Ｎａ Ｈ
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒ ｃ ： Ｔｅ ｈ Ｎａ Ｈ ａ ｔｐ ｒｅ ｓ ａ ｕ ｉ ｕ ｔ ｕ ｍｅ ｒ ｎ ｐ ｏｅ ｎ ｅ ｅ ａ ｌ ｏ ａ ｔ ｒａ ｐ ａ ｔ ａ ｄ ／ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｂ ｑ ｉ ｓ ｏ ｏ ｍｂ ｅ ｒ ｔ ｉ ｇ ｎ ｆ ｍｉ ａ ｙ ｆ ｂ ｃ ｅ ， ｌ ｎ ｓ ｎ ｍａ ｉ ｍｍａｓ Ｉ ｌ． ａ
第４ ２卷 第 １ 期 １
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张德 强 赵 树 堂 卢 孟柱 田 ‘ 林
（ 国林 业 科 学 研 究 院 林 业研 究 所 国家 林 业 局林 木 培 育 重 点 实 验 室 中 北 京 １０ ９ ） ００ １
摘
要 ： Ｎ ／ 反 向运 输 蛋 白 基 因 （ Ｈ 是 在 细 菌 、 物 和 动 物体 内 普 遍 存 在 的 一 类 膜 蛋 白基 因家 族 。迄 今 已 ａ Ｈ Ｎ Ｘ） 植
中 图分 类 号 ：７ ８４ ； ９ ３ ２ ￥ １ ． Ｑ ４ ． ６ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ １ ４ ８ ２０ ） １ ０ ２ —０ １０ —７ ８ （ ６ １ — ０ ９ ８ ０
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