育种学课件

1.2.1 DNA标记鉴定法
SSR：它最早是用于测定DNA序列的研究 上。用RFLP探针两端重复序列合成特异性 引物,再进行PCR,扩增多态性DNA片段,将 繁琐的RELP分析转换成了简单的PCR反 应 ，操作难度较低,但由于它需要先知道 DNA序列,在实际应用中受到很大限制。
2、蛋白质电泳原理
3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
•原理：是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、 形状的不同，在电厂的作用下，产生不同的移动速度而 分离的方法。它具有电泳和分子筛的双重作用。 •聚丙烯酰胺凝胶，是由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺在 催化剂的作用下，通过自由基引发聚合反应，形成不 带电荷、且具有分子筛性质的网状结构凝胶。 通常聚丙稀酰胺凝胶电泳包括： PAGE（非变性）、 SDS-PAGE（变性）
1.1 常规鉴定方法
1.1.1 田间小区种植鉴定 ：田间小 区种植鉴定是鉴定品种真实性和测 定品种纯度最为可靠、准确的方法， 比较接近生产实际。但所需周期长， 成本高。而且许多性状表现常常受 栽培措施及环境因子的影响。
1.1 常规鉴定方法
1.1.2 物理化学快速鉴别法 ：根据 种子在某些特殊的化学试剂或其它 特殊条件下,产生特定的反应,鉴定 品种的纯度。此方法快速、简便,但 因特异反应很有限,应用范围受到很 大限制。只能适用某些作物种子。
1两种技术,重复性好,多态性极高, 探测位点多的优点 ；技术要求高,设备昂贵,在纯度鉴 定应用上受到很大限制。
RAPD：优点:操作简单,周期短,成本较低,对 DNA的纯度显示不高,RAPD引物通用性。但 有结果不稳定,重复性差,各实验室结果没有可 比性等缺陷。
B-保持系
A-不育系 R-恢复系 F1-杂种
4个杂交稻盐溶液SDS-PAGE图谱
4、SDS-PAGE测种子纯度的操作方法
4.1 试剂及贮液的制备 4.2 蛋白质样品的处理
4.3 SDS-PAGE电泳操作方法
4.4 图谱解析
4.1 试剂及贮藏液的配制
SDS溶液
样品提取液 凝胶贮备液
配胶
莫 言 深善 闺舞 空红 寂袖 寞传 飞 鸿
转 彩 流描 光形 纳绘 美影 景画 缤 纷
山 河 日 月 总 成 对
一 句 悠 然 尘 世 间
黑 白 纵 横 三 千 里
经 天 纬 地 一 点 通
与 君 弹 做 天 籁 曲
行 遍 天 涯 谁 知 音
点 滴 皆 为 天 作 物
千 杯 品 来 都 是 香
博 览 群 书 是 为 智
学 若 烟 海 化 入 囊
蛋白质电泳测种子纯度
1、种子纯度鉴定方法
2、蛋白质电泳原理
3、PAGE和SDS-PAGE测种子纯度
1、种子纯度鉴定方法
1.1 常规鉴定方法：田间小区种植鉴 定 ；物理化学快速鉴别法 ；幼苗鉴 别鉴定法 ；形态鉴定法。
1.2 生理生化鉴定法：蛋白质电泳鉴 定法 ； DNA标记鉴定法（包括RFLP、 RAPD、AFLP、SSR等）。
七 尺 清 锋 仰 天 笑
试 问 天 下 谁 英 雄
1.1 常规鉴定方法
1.1.3 形态鉴定法：根据种子形态特 征，逐粒观察,同标准样品或鉴定图 片等比较。该方法最为简便、快速、 经济,但对品种间形态差异较小的品 种和杂交种中混有的自交系很难区分。
1.1 常规鉴定方法
1.1.4幼苗鉴别法：幼苗鉴别可通过 两个主要途径:一种是提供给植株加 速发育的条件,当幼苗达到适宜评价 的发育阶段时,对幼苗进行鉴定:另 一种途径是让植株生长在特殊的逆 境条件下,测定不同品种对逆境的不 同反应来鉴别不同品种。只能用于 品种间有差异样品的鉴定。
电泳时，带电荷的蛋白质分子在电场中向相 反电荷的电极移动，因分子大小的不同，蛋 白质所带的净电荷密度不同，因此在电场中 的移动速度也不同，故不同蛋白质在电泳时 彼此可以分开。
2.1 蛋白质电泳技术分类
2.1.1 按支持介质的不同分类：纸电泳 ；醋 酸纤维素薄膜电泳； 琼脂糖凝胶电泳 ； 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） ；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 2.1.2 按支持介质形状不同分为：薄层电泳； 板电泳（垂直和水平）；柱电泳；U型 2.1.3 按缓冲液系统组成：连续和不连续缓 冲系统；解离和非解离缓冲系统
1.2 生理生化鉴定法
利用电泳技术,在分子水平上对具有 不同遗传特性的种子予以鉴别。这些 方法直接测定的是蛋白质或DNA,准确 性高，周期短，鉴定成本也较低。 包括：DNA标记鉴定法；蛋白质电泳 鉴定法
1.2.1 DNA标记鉴定法:RFLP、RADP、AFLP、SSR等
RFLP 检验的准确性高,重复性好 这种方法需要的设备昂贵,成本高,操 作技术难度大,周期长,需要的DNA纯度 高,且常使用放射性物质,危险性大,应 用推广受到很大限制。
2.2 影响蛋白质泳动速率的因素
•外部因素： 1、电场强度
2、缓冲液PH（决定蛋白质电荷）
3、缓冲液离子强度（蛋白电动势） 4、其他
•蛋白质性质
1、电荷 2、分子大小
3、分子形状（球状>纤维状）
水平电泳
垂 直 板 电 泳
3、蛋白质电泳鉴定种子纯度
两种蛋白：贮藏蛋白和同工酶 原理：根据蛋白质合成的中心 法则说明了有什么样的遗传基 因（DNA），就有其特征的蛋 白质，因而，种子蛋白质可以 作为种子遗传基因的标志，能 反映种间遗传组成的差异。