HPLC法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量_李小燕

HPLC 法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量
收稿日期:2002-02-07
作者简介:李小燕(1961~),女,广西陆川县人,副主任技师,主要从事药品检验及仪器分析工作。

电话:(0771)3132340.
李小燕
(南宁市药品检验所,广西南宁530001)
关键词:HPLC;三黄片;盐酸小檗碱
摘要:目的:建立三黄片(大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱)中盐酸小檗碱的含量测定方法。

方法:采用高效液相色谱法,用K F -C 18色谱柱(250mm @4.6mm,10L m),以乙腈-0.05mol #L -1三乙胺溶液(用磷酸调节pH 至3.0)(35B 65)为流动相,流速为1.0mL #min -1,检测波长347nm 。

结果:本法线性关系良好,平均加样回收率为98.21%,RSD 1.01%(n =9)。

结论:本法操作简便,结果准确,分离效果好,可用于三黄片的质量控制。

中图分类号:R927.11 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2002)09-0679-02
Assay of berberine hydrochloride in Sanhuang Tablets by HPLC
LI Xiao -y an
(Nanning I nstitute f or Dr ug Contr ol,Nanning 530001,China )
Key words :H PLC;Sanhuang Tablets;berberine hydrochloride
Abstract :Objective :To establish the assay of berberine hydrochloride for Sanhuang T ablets (Radix et Rhizoma Rhei ,Extractum Scutellariae and berberine hydrochloride ).Methods :The HPLC w ith a KF -C 18column (250mm @4.6mm,10L m)w as used.Acetonitrile-0.05mol #L -1triethylamine buffer solution (adjusted pH to 3.0with conc.H 3PO 4)(35B 65)w as used as mobile phase.The flow rate was 1.0mL #min -1,and the detec -tion wavelength w as at 347nm.Results :The method has a good linear dependuce.T he average recovery of loading sample w as 98.21%with RSD 1.01%.(n =9).Conclusion :The method is convenient for a good res -olution and can be used for the quality control of Sanhuang Tablets. 三黄片由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成,是一种具有清热泻火、消炎利便功效的常用中成药。

收载于5中国药典62000年版一部
[1]。

其中盐酸小
檗碱的含量测定标准未作规定。

目前文献报道的测定方法有薄层扫描法[2]、脉冲极谱法[3]、分光光度法[4]、示波极谱法[5]和离子选择电极法[6]等。

本文采用HPLC 法测定了三黄片中盐酸小檗碱的含量,本法操作简便、精密度高、分离效果良好。

1 仪器与试药
高效液相色谱仪:日本岛津LC -10AT VP 泵,SPD -10A VP 紫外检测器。

威玛色谱工作站(深圳深软电子有限公司)
试药:盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,713-9204);乙腈为色谱纯,水为高纯水,甲醇、三乙胺、磷酸为分析纯;三黄片为市售品。

2 方法与结果2.1 色谱条件
色谱柱:KF -C 18(250mm @4.6mm,10L m,中国科学院大连化学物理研究所);流动相:乙腈-0.05mol #L -1三乙胺溶液(用磷酸调节pH 至3.0)(35B 65),柱温:室温;流速:1.0mL #min -1
;检测波长:
347nm;进样量:20L L 。

2.2 系统适用性试验
照2.8.1项,2.8.2项下方法制备对照品、供试品和阴性空白样品溶液,照2.1项下色谱条件,各进样20L L 记录色谱图(图1)。

理论塔板数按盐酸小壁碱峰计算不低于3900,盐酸小檗碱与其它杂质峰分离良好。

盐酸小檗碱保留时间为11.85min 。

2.3 线性关系考察
精密称取盐酸小檗碱对照品15mg 置50m L 量
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瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。

精密量取上述对照品溶液各1.0,2.0,3.0,4.0,5.0m L 分别置25mL 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,各进样20L L 按上述色谱条件测定,以峰面积为横坐标,对照品进样量(L g )为纵坐标,绘制标准曲线。

回归方程为C =2.48@10-7A +5.87@10-3 r =0.9999,线性范围为0.24L g~1.20L g。

Fig.1 HPLC C hromatograms
A.Blank Sample
B.Standard
C.Sample
1.berberine hydrochloride
2.4 进样精密度试验
取2.7.1项下的对照品溶液,重复进样5次,峰面积的RSD 为0.35%。

2.5 重复性试验
取三黄片(批号20010513)按2.7.2项下平行制备5份供试品溶液,按样品测定法测定,结果每片含盐酸小檗碱分别为4.51,4.55,4.58,4.50mg 和4.59mg (RSD =0.89%,n =5),表明本法重现性好。

2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液(批号:20010513)每天连续进样2次,共5天,记录色谱图并计算,结果平均含量为4.55mg #片-1,RSD =1.20%(n =5)。

说明供试品溶液至少在5日内稳定。

2.7 加样回收率试验
结果见表1。

Table 1 Result of Recovery Test of Berberine Hydrochloride (n =9)
Sam ple (mg)Added (mg)Found (mg)Recovery (%)Average Recovery (%)RSD (%)0.2426 1.200 1.402896.6898.21
1.01
0.2479 1.200 1.421797.820.2480 1.200 1.435298.930.2972 1.500 1.777698.690.3041 1.500 1.772997.920.2914 1.500 1.744496.870.4489 1.800 2.244499.750.4450 1.800 2.220398.630.4444
1.800
2.2188
98.58
2.8 样品测定
2.8.1 对照品溶液制备
精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加流动相制成36L g #mL -1
的对照品溶液。

2.8.2 供试品溶液的制备
取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于盐酸小檗碱1.8mg),置50mL 量瓶中,加流动相适量,超声处理5m in,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,再经0.45L m 的微孔滤膜滤过后,即得。

取大黄粉、黄芩浸膏和其它辅料,按处方比例同法制得三黄片阴性空白溶液。

2.8.3 测定结果
分别取上述对照品与供试品溶液20L L 注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图,以外标法计算样品中盐酸小檗碱的含量,结果见表2。

从表2看出,不同厂家的产品间存在着较大的差异。

Table 2
A ssay results of samples (n =3)
Batch Content (mg #tablet -1)
RS D (%)010608 3.750.63000629 3.120.8720010513 4.550.89010901
2.73
1.02
3 小结
3.1 取盐酸小檗碱对照品溶液和阴性空白溶液分别进行紫外扫描,在200~300nm 二者均有较强吸收,在300~400nm 阴性空白溶液吸收较小,故选择在盐酸小檗碱有最大吸收的347nm 作为测定波长。

3.2 曾分别选用乙腈-水,甲醇-三乙胺溶液,乙腈-0.05mol #L -1
三乙胺溶液(pH= 6.0)和乙腈-三乙胺溶液(pH =3.0)作为流动相。

结果以乙腈-0.05mol #L -1三乙胺溶液(pH= 3.0)(35B 65)为最佳。

盐酸小檗碱与相邻峰基线分离较好。

4 结论
通过实验研究,本文建立了三黄片中盐酸小檗碱含量的H PLC 测定法,并具有良好的准确性和重现性,可用于该药品的质量控制。

参考文献:
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2000:345-346.
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