14章棒状杆菌检验
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琼脂平板毒力试验-Elek 平板
（五）免疫力测定
1、锡克试验（ Schick test ） ——白喉外毒素皮内试验
? 调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免 疫力
? 根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外 毒素测定机体有无相应抗毒素
? 缺点 —观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测 试
2、致敏红细胞凝集试验 ?测定血清中抗毒素水平 ?0.1ml血清，倍比稀释+外毒素致敏红细胞，
37℃、1h后观察结果 ?敏感度可达10-4单位，简便快速
㈣分离培养与鉴定
1、分离培养 ?吕氏血清斜面：
37℃、8～12h →→涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 ?亚碲酸钾BAP：
37℃、24～48h，黑色菌落 ?BAP：
轻型有β溶血环，应注意与溶血性链生化反应 ?糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原
—鉴别棒状杆菌属不同的种
3、毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据）
? 体外法： ?琼脂平板毒力试验（ Elek 平板毒力测定） ?SPA 协同凝集试验 ? 对流电泳 ?体内法 ： 用豚鼠作毒素 -抗毒素中和试验
白喉抗毒素 待测菌
对流免疫电泳
白喉抗毒素 阴性菌(-) 标准产毒株 待测菌(+) 待测菌(-)
3、K抗原 ? 细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 ? 抗吞噬
? 有利于细菌在黏膜表面的定植
? 所致疾病 ——白喉（急性呼吸道传染病） 传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染的物品 临床表现：
? 局部炎症：炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→ 窒息
? 全身中毒症状 ?外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 咽肌麻痹---吞咽困难 ?心肌---心肌炎
第一节 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae
一、临床意义
?致病物质
1、白喉外毒素 ?毒力强 ?抗原性强 ?编码外毒素的tox 基因——β-棒状杆菌噬
菌体
作用机制： ----影响蛋白质的合成 作用特点： ? 作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有
毒素受体 ? 肿瘤细胞对此毒素敏感
2、索状因子
细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线 粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化
第14章 棒状杆菌属
种类 白喉棒状杆菌（ C.diphtheriae ） 假白喉棒状杆菌（ C.pseudodiphtheriticum ） 干燥棒状杆菌（ C.xerosis ） 化脓棒状杆菌（ C.pyogenes ） 溃疡棒状杆菌（ C.ulcerans ） 假结核棒状杆菌（ C.pseudotuberculosis ） 溶血棒状杆菌（ C.haemolyticum ） J-K 群棒状杆菌（ C.jeikeium-CDC group JK ）
白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾 BAP 中菌落
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图14-3 ㈡标本采集
分泌物，取双份
㈢直接涂片染色镜检： ?2～3张涂片→革兰染色、异染颗粒染色
镜检——初报“直接涂片检出形似白喉 杆菌”——早期诊断 ?用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本， 37℃10h，涂片染色镜检——提高阳性率
白喉棒状杆菌异染颗粒 1000×
㈡培养特性 ?营养要求高 ?吕氏(Loeffler) 血清斜面或鸡蛋斜面： ?形成灰白色、湿润、有光泽的光滑型菌苔 /菌
落
BAP（血琼脂平板）
?菌落灰白色、光滑型， 直径1～2mm 、有狭窄β 溶血环（轻型）
?多次传代后菌体变为 球形
BAP中菌落
亚碲酸钾BAP （选择鉴别培养基） ?黑色菌落 —— 鉴别依据 ?根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为：重 型、中间型、轻型 ?不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色菌落
白喉假膜
?免疫性：
?感染后机体可获得牢固的免疫力 ?机体还可通过其它方式获得免疫力：
?六月以下婴儿---------母亲 ?成人-----------隐性感染、人工主动免疫 ?易感者： ?2~4岁儿童 ?成人---也有可能
二、生物学特性
㈠形态与染色: ? G+细长微弯的杆菌 ? 一端或两端膨大呈棒状 ? 常排列呈V、L、X等文字形 ? 异染颗粒——形态上的鉴别特征 ? 无荚膜、无芽胞、无鞭毛
（五）免疫力测定
1、锡克试验（ Schick test ） ——白喉外毒素皮内试验
? 调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免 疫力
? 根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外 毒素测定机体有无相应抗毒素
? 缺点 —观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测 试
2、致敏红细胞凝集试验 ?测定血清中抗毒素水平 ?0.1ml血清，倍比稀释+外毒素致敏红细胞，
37℃、1h后观察结果 ?敏感度可达10-4单位，简便快速
㈣分离培养与鉴定
1、分离培养 ?吕氏血清斜面：
37℃、8～12h →→涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 ?亚碲酸钾BAP：
37℃、24～48h，黑色菌落 ?BAP：
轻型有β溶血环，应注意与溶血性链生化反应 ?糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原
—鉴别棒状杆菌属不同的种
3、毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据）
? 体外法： ?琼脂平板毒力试验（ Elek 平板毒力测定） ?SPA 协同凝集试验 ? 对流电泳 ?体内法 ： 用豚鼠作毒素 -抗毒素中和试验
白喉抗毒素 待测菌
对流免疫电泳
白喉抗毒素 阴性菌(-) 标准产毒株 待测菌(+) 待测菌(-)
3、K抗原 ? 细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 ? 抗吞噬
? 有利于细菌在黏膜表面的定植
? 所致疾病 ——白喉（急性呼吸道传染病） 传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染的物品 临床表现：
? 局部炎症：炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→ 窒息
? 全身中毒症状 ?外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 咽肌麻痹---吞咽困难 ?心肌---心肌炎
第一节 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae
一、临床意义
?致病物质
1、白喉外毒素 ?毒力强 ?抗原性强 ?编码外毒素的tox 基因——β-棒状杆菌噬
菌体
作用机制： ----影响蛋白质的合成 作用特点： ? 作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有
毒素受体 ? 肿瘤细胞对此毒素敏感
2、索状因子
细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线 粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化
第14章 棒状杆菌属
种类 白喉棒状杆菌（ C.diphtheriae ） 假白喉棒状杆菌（ C.pseudodiphtheriticum ） 干燥棒状杆菌（ C.xerosis ） 化脓棒状杆菌（ C.pyogenes ） 溃疡棒状杆菌（ C.ulcerans ） 假结核棒状杆菌（ C.pseudotuberculosis ） 溶血棒状杆菌（ C.haemolyticum ） J-K 群棒状杆菌（ C.jeikeium-CDC group JK ）
白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾 BAP 中菌落
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图14-3 ㈡标本采集
分泌物，取双份
㈢直接涂片染色镜检： ?2～3张涂片→革兰染色、异染颗粒染色
镜检——初报“直接涂片检出形似白喉 杆菌”——早期诊断 ?用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本， 37℃10h，涂片染色镜检——提高阳性率
白喉棒状杆菌异染颗粒 1000×
㈡培养特性 ?营养要求高 ?吕氏(Loeffler) 血清斜面或鸡蛋斜面： ?形成灰白色、湿润、有光泽的光滑型菌苔 /菌
落
BAP（血琼脂平板）
?菌落灰白色、光滑型， 直径1～2mm 、有狭窄β 溶血环（轻型）
?多次传代后菌体变为 球形
BAP中菌落
亚碲酸钾BAP （选择鉴别培养基） ?黑色菌落 —— 鉴别依据 ?根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为：重 型、中间型、轻型 ?不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色菌落
白喉假膜
?免疫性：
?感染后机体可获得牢固的免疫力 ?机体还可通过其它方式获得免疫力：
?六月以下婴儿---------母亲 ?成人-----------隐性感染、人工主动免疫 ?易感者： ?2~4岁儿童 ?成人---也有可能
二、生物学特性
㈠形态与染色: ? G+细长微弯的杆菌 ? 一端或两端膨大呈棒状 ? 常排列呈V、L、X等文字形 ? 异染颗粒——形态上的鉴别特征 ? 无荚膜、无芽胞、无鞭毛