人胰岛素样生长因子-1的真核表达及其生物学功能研究

人胰岛素样生长因子-1的真核表达及其生物学功能研究周海斌;郑祖根;董启榕
【期刊名称】《中国现代医学杂志》
【年(卷),期】2004(14)23
【摘要】目的构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)分泌型真核表达载体,并检测表达产物的生物活性.方法从人肝细胞克隆IGF-1基因,并将其连入Psec Tag/FRT/V5-His载体,用脂质体法转染CHO细胞,将转染细胞上清培养骨髓基质干细胞,用MTT 法测定骨髓基质干细胞的增殖情况.结果成功扩增210bp的IGF-1基因,表达产物经SDS-PAGE分析及Western bolt检测具有7.7KD特异性条带.骨髓基质干细胞的增殖随转染细胞上清的浓度、转染细胞上清培养时间的增加而增加.结论成功构建分泌型IGF-1真核表达载体,其表达产物对骨髓基质干细胞具有促增殖作用.%Objective: To construct IGF-1 expression vector and express it in CHO cells. Methods: Total RNA from human liver were prepared, and IGF gene by reverse transcriptase -polymerase chain reaction (RT-PCR) was amplified, then IGF-1 fragment to expression vector pSec Tag/FRT/V5-His was cloned, till the positive clone was verified by sequencing. Finally the positive plasmid to CHO cells was transfected by Lipofectamine, and medium for SDS/PAGE and Western Blot analysis was collected. Results: A 210-bp IGF-1 gene was successfully amplified, and a positive clone checked by sequence was got; Western Blot result suggested IGF-1 can be expressed in CHO cells.Conclusions: Type-1 insulin like growth factor was
successfuly constructed and expressed. The recombinant IGF-1can promote BMSCproliferation.
【总页数】4页(P21-23,27)
【作者】周海斌;郑祖根;董启榕
【作者单位】苏州大学附属第二医院,骨科,江苏,苏州,215004;苏州大学附属第二医院,骨科,江苏,苏州,215004;苏州大学附属第二医院,骨科,江苏,苏州,215004
【正文语种】中文
【中图分类】R
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