蛋白纯化
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蛋白质样品的纯化（使用Clean-up Kit进行）
1）将Kit中的wash buffer在－20℃预冷1小时，并准备冰盒、2ml EP管等；2）取上述收集的每个蛋白质样品液300μl加至2ml的EP管中；
3）加入900ul的precipitant液，震荡混匀后冰上静置15分钟；
4）再加入900ul的co-precipitant液，震荡混匀；
5）4℃、12000g离心8分钟，去上清；
6）再次离心1分钟，吸去残留液体，避免触及沉淀的蛋白质；
7）加入约4倍沉淀蛋白质体积的co-precipitant液，避免扰动沉淀的蛋白质，冰浴中静置5分钟；
8）4℃、12000g离心8分钟，去上清；
9）加入约25ul MilliQ，用10ul 枪头将沉淀打散；
10）加入预冷的wash buffer 1ml，以及wash additive液5μl；
11）于－20℃放置30分钟，每隔10分钟震荡20~30秒；
12）4℃、12000g离心8分钟，去上清，管底可见白色蛋白质沉淀；
13）加入适量Standard lysis buffer （2D-DIGE用）或Rehydration buffer（2-DE 用）并震荡，至沉淀的蛋白质完全溶解即可；
14）若有必要去除泡沫或存在的不溶物，可4℃、12000g离心5分钟，取上清液。
纯化好的蛋白质可－80℃冻存或直接进行下一步操作。