半定量RT-PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达

半定量RT-PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA
转录表达
卢建雄;臧荣鑫;潘和平;杨具田;陈粉粉;杨公社
【期刊名称】《中兽医医药杂志》
【年(卷),期】2005(24)6
【摘要】在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中,为了检测生脂基因ACC l和FAS mRNA表达水平变化,细胞总RNA经反转录合成cDNA,以β-actin为内参照,分别与ACC l和FAS等基因同管扩增。

通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgC l2浓度和循环次数等参数,以及引物对间的扩增竞争,建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系。

结果显示,RT-PCR产物经电泳后,β-actin及生脂基因电泳带清晰,与预期产物大小一致,引物对间无扩增竞争,其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同,实验重复性好。

因此,该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达。

【总页数】3页(P16-18)
【关键词】原代培养脂肪细胞;生脂基因;半定量RT—PCR
【作者】卢建雄;臧荣鑫;潘和平;杨具田;陈粉粉;杨公社
【作者单位】西北民族大学生命科学与工程学院;西北农林科技大学动物脂肪沉积和肌肉发育实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R852.2
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