牛乳中微生物的检测与分析

牛乳中微生物的检测与分析

张月月刘敏王荣峰王君孙鹏郭海萌张帅

（山东农业大学生命科学学院，泰安271000）

摘要：【目的】了解牛乳的消毒和细菌学检查的重要性，及其卫生质量的判断标准。学习牛乳的巴斯德消毒法和细菌学检查的方法。【方法】采用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。【结果】微生物显微镜直接计数法随机性大，对茵体数量不能做出较为宏观，全面的反应．优点是计数快速；美蓝还原酶实验法是用于测定牛乳质量的一种定性检测法，操作简便，不需特别设备。它不能做为定量检查；平板茵落计数法速度慢，需要平板上长出茵落一段时后才能计数。【结论】由于平板茵落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大．由于是茵悬液涂布，所以比较均匀，能较好的反应茵落的疏密程度。重复性，平行性很好。是经典的计数方法。

关键词：牛乳;微生物;检测;分析

Detection and analysis of microorganisms in milk

Yueyue Zhang，Min Liu，Rongfeng Wang，Jun Wang，Peng Sun，Haimeng Guo，Shuai Zhang (College of Life Sciences, Shandong Agricutual University, Tai’an, 271000, China)

Abstract:【Purpose】to understand the milk sterilization and bacteriological examination of importance, and its hygienic quality judgment standard. Learning milk Pasteur disinfection method and bacteriological examination method. 【MEFHOD】Uses the microscope count the methylene blue reductase method，the standard plating count method to carry on the determination of the number of bacteria，determined different origin the fresh COWS milk rank，pasteurized milk hygienic standard．【RESULTS】Microorgaism microscope direct countmethod 。It has big ran domness cannot make comparatively macroscopic ，overall comprehensive for milk quantity ．But the advantages are coninung and fast for counting of bacteria ；The methyrlene blue reductases method is used in determining the COW'S milk quality．It is simple．No special equipments needed．But it cannot use for the quantitative examination ；The plating colony count methods is relatively slow，needs the growth of bacteria on the plate and colonies can be counted．【CONCLUSION】Because the plating count method usually makes the gradient to dilution，therefore the counting linear scope is broad ．Because bacterium suspended solution is poured out on the culture of bacterium uniformly ．The bacterial colony density degree can obtain ．The retentiveness，parallelism is very good．It is the classical method of counting bacteria ．

Key words: milk ；microbial ；detection；analysis；

前言

牛乳是一种营养全面的液态天然饮料,含有人体所需的碳水化合物、蛋白质、脂肪、各种矿物质和维生素[1] 。其中的细菌会很快繁殖，因此，采用不同细菌学检查方法对牛乳中细菌进行卫生检查，比较得出最佳检测方法，确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。现今常用显微镜计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板计数法进行测定，切入点不同的方法各有优缺。随着人们生活水平的提高,对乳制品的需求亦不断上升。目前

国内对乳制品的研究主要集中在发酵酸奶上,但由于国人习惯消费短期内的乳制品,故巴氏

杀菌乳在整个消费中仍占主导地位。

牛乳的细菌学检查一般有显微镜直接计数法、检测大肠菌群、美蓝还原酶试验和标准平

板计数法[2]，现通过试验来了解掌握牛乳的巴斯德消毒方法以及微生物细菌学检测方法,

试验通过美蓝还原酶试验和标准平板计数法分别定性、定量检测牛乳样品的细菌数含量，同

时通过对照试验，确定在牛乳消毒中被广泛应用的巴斯德消毒法的卫生标准是否达标。

1材料与方法

1.1实验器材

1.1.1培养基和牛乳样品

亚奥特巴氏消毒牛奶样品

亚奥特巴氏消毒变质牛奶样品

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂15～20g 水1000ml PH 7.0～7.2 121℃灭菌20nin

1.1.2溶液和试剂

美兰溶液（1：250 000）

无菌水

1.1.3主要仪器和其他用品

超净工作台，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯，恒温培养箱，9 cm无菌培养皿，无菌

18×180mm试管，试管架。无菌250ml三角瓶，无菌棉塞，移液枪与相应规格的无菌

枪头

1.2试验方法

1.2.1材料预算，培养基配制，无菌水分装，高压灭菌。

1.2.2美兰还原酶试验法

1)标记3个无菌试管1、2、3

2)分别向3个试管中加入10ml不同品牌的生鲜牛乳样品（1号变质亚奥特牛奶，2亚

奥特纯牛奶，3号亚奥特纯牛奶）

3)分别向试管中各加入1ml美兰，盖紧管塞

4)轻轻倒转试管约4次，置于37℃水浴中，并记录培养时间

5)测试管在水域中稳定5min中后，取出，轻轻倒转一次后再放回水浴中

6)每隔30min观察记录试管中美兰颜色的变化，直至3～6h

1.2.3巴斯德法消毒牛乳

1)将水浴锅的温度调至80℃

2)将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布

3)用灭菌的10ml吸管吸取5ml生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将试管放入调好温度

的水浴锅中，水面要超过牛乳表面

4)保持15min，并不时摇动

5)一到15min立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其中的牛乳迅速冷却。

1.2.4标准平板计数法

1)将巴氏消毒的牛乳样品充分摇匀，系列稀释至10-2、10-3和10 -4。

2)用1ml无菌吸管从三个梯度分别取1ml注入空白平板内

3)各平板倾注约15ml已经融化并冷却至45 ℃左右的牛肉膏蛋白胨培

4)凝固后，倒置于37 ℃培养箱内，培养24h。