猪瘟实验室诊断技术
猪瘟实验室检测与预防免疫
猪瘟实验室检测与预防免疫猪瘟，又称非洲猪瘟，是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、高度接触性和传染性的猪病。
此病主要通过猪之间的直接接触或通过受感染的猪粪便间接传播。
非洲猪瘟病毒并不会攻击人类，但是它对猪群的危害性非常大，病毒的传染性非常强，一旦猪群中出现猪瘟，常常会造成大规模的猪只死亡，给养猪业造成严重经济损失。
为了保护猪群不受猪瘟的侵害，猪场和养殖户需要密切关注猪瘟的实验室检测和预防免疫工作。
下面就来看一下关于猪瘟实验室检测与预防免疫的相关内容。
一、猪瘟实验室检测1. 症状观察猪瘟的感染期大约为5-15天。
感染后的猪只会出现食欲下降、发热、精神萎靡、呼吸急促、发生呕吐和腹泻等临床症状。
疑似猪瘟感染的猪只应立即进行隔离，并进行实验室检测确认是否为猪瘟感染。
2. 标本采集对于疑似感染猪只，需要采集相应的组织标本，常用的标本包括血液、淋巴结、脾脏等。
采集标本时要严格遵守无菌操作规范，避免交叉污染。
3. 实验室检测一旦采集到疑似感染的标本，需要立即送往专业的实验室进行猪瘟病毒的检测。
一般常用的检测方法包括PCR技术、ELISA技术等，这些检测方法具有高灵敏度和高特异性，能够迅速准确地检测出猪瘟病毒的存在。
4. 结果分析实验室检测出的结果需要由专业的兽医人员进行分析和判断，如果确认猪只确实感染了猪瘟，需要立即采取相应的隔离和控制措施，避免病毒的进一步传播。
二、猪瘟预防免疫1. 定期疫苗接种猪瘟病毒没有特效的治疗方法，预防和免疫是最为重要的措施。
养殖户需要根据兽医的指导，定期对猪只进行猪瘟疫苗接种。
猪瘟疫苗能够有效地提高猪只的免疫力，降低感染猪瘟的风险。
2. 维护猪场卫生猪场的卫生环境对于猪瘟的预防也非常重要。
养殖户需要定期清理卫生，保持猪场的清洁和干燥。
定期对猪舍进行消毒，定期更换饲料盆、饮水器等饲养设备，避免病毒通过环境传播。
3. 远离野猪和动物粪便猪瘟病毒的传播途径非常复杂，野猪和感染猪只的粪便等都是传播病毒的重要因素。
实验八 猪瘟的诊断
样本中抗体相对水平—效价（ET），其与S/P的关系如下： Lg（ET的倒数）=0.8115X+1.4751
X=S/P值
注：此效价是根据实验室目前对CSFV检测方法和免疫的抗体反应两方面综合而定； 在免疫时效检测和记录有代表性样本的抗体效价是对猪群的免疫状况的最好评价。
每人检测1份临床待检猪血清样品。 假设全班检测的样品为同一猪场接种猪瘟疫苗后抽检，试 评估该猪场猪瘟免疫效果。
从高温期急性病猪采血2～5ml，注入装有1ml 3.8％枸橼 酸钠的试管内，混匀后静臵2h；吸取上面含棕黄层的血 浆部分，以2000rpm离心10min，弃去上清液；将沉淀的 白细胞用5～10倍量的0.83%氯化铵处理30min，使残留的 红细胞溶解，以2000rpm离心10min，除去上清液；将沉
在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔 的OD值≥0.6，阴性对照孔的OD值必须＜0.1；样品中抗体存在与否， 或样品中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方 式处理： S/P=（样本OD450/630值-NCX）/(PCX-NCX)
NCX:阴性对照孔的OD值 PCX :阳性对照孔的OD值 当样本的S/P值≥0.2时判为阳性 样本的S/P值＜0.2时判为阴性
当检测样品为阳性时，样品中猪瘟病毒抗原（Ag）可与胶
体金标记鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Au-Ab1）结合形成复 合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线 时与预包被的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Ab2）形成“AuAb1-猪瘟病毒抗原-Ab2-固相材料”免疫复合物而凝聚显
色，游离金标记抗原则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富
动物选择与分组，1.5kg以上大小相似的家兔，2组，每 组4只 采病猪淋巴结和脾脏等病料做成1：10悬液，上清加抗 生素，肌肉接种试验组5ml/只，对照组不接种。 继续测温，每隔6h/次，连续3天。
生猪屠宰检疫中猪瘟检验检疫方式与处理方法
生猪屠宰检疫中猪瘟检验检疫方式与处理方法生猪屠宰检疫是保障生猪产品质量安全的重要环节，其中猪瘟检验检疫是很关键的一环。
猪瘟是由猪瘟病毒引起的，是一种具有较强传染性和致死性的病疫，它对猪只的生产性能和养猪业的经济影响都非常大，因此必须采取严格的检验检疫方式与处理方法。
猪瘟的检验检疫方式主要分为两大类：实验室检验和现场检验。
实验室检验主要是通过采集猪只的组织样品，如血清、淋巴结、肺组织等，进行PCR检测、血清学、免疫组化等方法来确认是否感染猪瘟病毒。
现场检验则主要是通过审查猪只的临床症状、行为、粪便等，结合流行病学调查和病原学检测，来进行快速诊断。
对于生猪屠宰检疫中猪瘟的检验检疫，需要严格按照国家相关法规和标准进行操作。
首先是要严格控制猪只的来源，确保来自无猪瘟区域的健康猪只，建立健全的疾病监测和溯源体系。
其次是要对猪只进行定期的检测和监测，包括实验室检验和现场检验，确保猪只的健康状况。
对于检验检疫的结果，要有一套科学的处理方法，包括隔离感染猪只、消毒污染设施、清理感染区域等，以减少疫情的传播和扩散。
在生猪屠宰检疫中，还需要注意对猪只的隔离与集中管理。
在疫情暴发时，应立即对感染猪只进行隔离，防止其与健康猪只接触，减少疫情的传播。
对于较大规模的疫情爆发，还需要对猪只进行集中管理，以便对其进行集中隔离和治疗，减少疫情对养猪业的影响。
除了生猪屠宰检疫中的检验检疫工作外，防控猪瘟病毒的传播也是非常重要的。
在屠宰场，需要对猪只的运输、隔离、消毒等环节进行严格管理，防止猪瘟病毒的传播。
在屠宰环节，还需要加强员工的防护和培训工作，提高员工的防疫意识和操作技能，确保屠宰过程中不会将病毒带入到生猪屠宰环节。
在生猪屠宰检疫中，处理猪瘟疫情也是非常重要的。
一旦发现猪只感染猪瘟病毒，需要立即采取科学的处理方法，包括隔离感染猪只、消毒感染区域、消毒病毒携带物等，以减少疫情对养猪业的影响。
还需要对猪只进行隔离、治疗和监测，以减少疫情的传播和扩散。
猪瘟诊断技术国标
猪瘟诊断技术国标
本标准规定了猪瘟的诊断技术要求，包括标准适用范围、标本采集和保存、诊断方法等方面。
本标准适用于猪瘟的诊断和防控。
1.标准适用范围
本标准适用于猪瘟的诊断和监测，包括临床诊断、实验室诊断和流行病学调查。
2.标本采集和保存
2.1标本采集
2.1.1采集对象：发病猪、可疑感染猪、疫情处置相关人员。
2.1.2采集部位：血液、组织器官、排泄物等。
2.1.3采集方法：根据需要选择合适的采集方法，如针刺、剪毛、刮取等。
2.2标本保存
2.2.1保存液：使用无菌容器保存，容器内应加入适量无菌生理盐水或70%酒精等消毒溶液。
2.2.2保存温度：低温冷藏（4℃左右）或冷冻（-20℃以下）。
2.2.3保存时间：尽快送检，不得超过72小时。
3.诊断方法
3.1临床诊断
3.1.1临床症状观察：观察发病猪的临床表现，如体温升高、食欲减退、便秘、腹泻等。
3.1.2病理变化观察：对死亡猪进行病理剖检，观察组织器官的病变情况。
3.2实验室诊断
3.2.1病毒分离培养：采集发病猪的组织器官，在细胞培养基上进行病毒分离培养，观察细胞病变情况。
3.2.2抗原检测：使用抗体检测试剂盒，对发病猪的血清进行抗原检测，观察抗体水平变化。
3.2.3核酸检测：采集发病猪的组织器官或血液样本，进行核酸检测，观察病毒基因序列变化。
非洲猪瘟检测试剂操作方法
非洲猪瘟检测试剂操作方法非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种高度传染性疾病，对猪群健康和养殖业都造成了巨大损失。
为了迅速检测和诊断非洲猪瘟，科学家们开发了多种检测试剂。
下面将详细介绍非洲猪瘟检测试剂（包括PCR、ELISA和纸条快速检测试纸）的操作方法。
1. PCR检测方法：PCR（聚合酶链反应）是一种通过扩增病原体的特定基因片段来检测病原体的方法。
下面是非洲猪瘟PCR检测方法的步骤：a. 实验准备：- 准备PCR试剂盒，包括DNA提取试剂、PCR引物和酶。
- 准备PCR工作站和仪器（如PCR仪）。
- 防止污染，使用无菌器材和顶级实验室规范的操作。
b. 样本提取：- 取非洲猪瘟病畜体、组织或血液样本。
- 使用合适的试剂盒进行DNA提取，按照操作手册中的指示进行。
- 将提取的DNA储存到低温条件下，避免降解。
c. PCR扩增：- 准备PCR反应液，包括DNA模板、引物、dNTPs、酶和缓冲液。
- 按照PCR反应液体积的要求逐一加入反应管中。
- 定量PCR反应溶液，确保所有反应中的成分配比准确。
- 放入PCR仪中，按照所使用的引物设计好的程序运行PCR反应。
d. 结果分析：- 运行PCR反应后，获取PCR反应管。
- 将PCR产物经电泳分离，依据目标基因片段大小来判断是否存在非洲猪瘟病毒。
- 使用显色剂或转印装置对PCR产物进行直接检测。
- 分析PCR结果并记录，确认样本是否为非洲猪瘟阳性。
2. ELISA检测方法：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学检测方法，用于检测非洲猪瘟病毒的抗体或抗原。
下面是非洲猪瘟ELISA检测方法的步骤：a. 实验准备：- 准备ELISA试剂盒，包括抗体/抗原、酶标记物、底物等。
- 准备ELISA板（包括微孔板或膜）和读板机。
- 防止交叉污染，使用不同的器材和操作台进行样本分析。
b. 样本处理：- 取非洲猪瘟血清样本，通过离心等操作去除杂质。
非洲猪瘟诊断与检测技术要点
非洲猪瘟检测与诊断技术要点中国农业科学院上海兽医研究所牵头编制2019年9月前言非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率和死亡率可达100%。
世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
1921年，ASF最初发现于肯尼亚，上世纪五、六十年代在非洲、欧洲、南美洲流行。
2018年8月初我国爆发非洲猪瘟首起疫情以来，该疫病已蔓延全国23个省，给我国生猪养殖业和国民经济带来巨大损失。
由于ASFV感染机制复杂，目前世界范围内至今尚无有效预防用非洲猪瘟疫苗，因此早期发现、精准检测是控制该病传播和发生的关键。
本文参考了OIE关于非洲猪瘟防控的文件、农业农村部发布相关文件和中国动物卫生与流行病学中心、中国动物疫病预防控制中心的相关技术手册，结合我们的研究成果，从非洲猪瘟早期发现、现场排查、精准检测三个方面的技术要点编写而成，主要面向从事非洲猪瘟现场排查和检测的一线防疫人员，提供了简明实用的相关操作技术与方法，为非洲猪瘟现场排查与检测等相关工作提供参考。
编者牵头团队：上海兽医研究所猪呼吸道传染病团队负责人：马志永参加人：魏建超等参加团队：哈尔滨兽医研究所猪烈性传染病创新团队负责人：仇华吉参加人：罗玉子等兰州兽医研究所外寄生虫与虫媒疫病团队负责人：刘志杰参加人：林密等兰牧药研究所中兽医与临床团队负责人：李建喜参加人：崔东安目录一、概述 (1)二、早期发现 (4)三、现场排查 (5)（一）准备工作 (6)1.人员准备 (6)2.车辆准备 (6)3.物品准备 (6)（二）进出养殖场要求 (7)1.抵达养殖场 (7)2.穿戴个人防护设备（在清洁区） (8)3.离场前准备 (8)4.离场后 (9)5.消毒剂的选择 (9)（三）临床诊断 (9)1.临床症状 (10)2.剖检病变 (11)3.鉴别诊断 (12)4.发现疑似病例的情况下应立即采取的行动 (13)（四）样品采集、包装与运输 (14)1.采样方法 (14)2.样品的记录、保存、包装和运送 (15)3.废弃物处理 (18)四、实验室诊断与确诊 (19)1.快速精准检测 (19)2.疫情确诊 (19)附件一：非洲猪瘟防治技术规范 (20)附件二：国家非洲猪瘟参考实验室、专业实验室和区域实验室名单 (24)一、概述非洲猪瘟病毒（ASFV）是一种有囊膜的DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员。
猪瘟的实验室抗原检测方法
长 ，成 本 高 。
１ 病 原 分 离 和 回 归 试 验
这 是 最经 典 和 可 靠 的方 法 。采 集 病 变 典 型 的 可 疑 组 织 ，包 括 血 液 或 脏 器 ，
１３ 猪 体 回归 感 染试 验 ．
测 温 ５ ７天 ，每 隔 ６小 时 一 次 。 对 照组 ～ ２３出 现 定 型 热 或 轻 型 热 ， 试 验 成 立 ， ／ 并 根 据体 温 反应 判 定结 果 （ 表 １。 见 ）
法 ，下 面 给大 家详 细 介 绍 。
用 这 种 方 法 能 检 出 待 测 病 料 中 可 能存 在
方 法 进 行 病 原 学诊 断 。用 荧 光 法 检测 的 病 料 要 新 鲜 ，用 于病 毒 分离 的病 料 还 应 过滤除菌。
１２ 病 毒 分 离 ．
这 一 现 象 ，将 病 料研 磨 后 用 生 理 盐 水作
ｌ Ｏ稀 释 ，制 成 组 织 悬 液 。对 ３只健 ：１ 康 家 兔 （ 重 ２ｋ 左 右 ）作 肌 肉注 射 ， 体 每 只注 射 被 检 病 料 组 织 悬 液 上 清 １ｍ ； Ｌ 另 设 ３只 不 注 射 病料 的对 照 。 注 射 后 每
猪瘟 的实验 室抗原 检测 方法
李 岩 （ 龙 江 省 青 冈县 畜 牧 兽 医 局 ，黑 龙 江 青 冈 １ １ ０ ） 黑 ５ ６ ０
随 着 对 猪 瘟 （ Ｓ ） 研 究 的 不 断 深 ＣＦ
入 ． 目前 已建 立 了多 种 对 抗 原 的检 测 方
通 常 用 荧 光 抗体 法 可 测 ｍ 细胞 培养 中盖 玻 片 上 细 胞 浆 内 的病 毒 抗 原 。亦 可 用新 城 疫 病 毒 强 化试 验检 测 Ｃ Ｆ 的存 在 。 ＳＶ
猪瘟实验室诊断技术研究进展
性。
２ Ｄ Ｄ７ ０ ９
畜牧 兽医
试验综述
４ ２ 新城疫病毒 强化试验 ．
ＣＦ ’ Ｓ Ｖ感染猪 睾丸细 技术 、 荧光 能 量 共振 转 移 和核 酸 杂 交技 术 相 结 胞 后 ，不 能使细胞 发 生致细胞 病变 （Ｐ ） Ｃ Ｅ ，当把 合 ，采 用 荧 光 定 量 Ｐ Ｒ 技术 对 Ｃ Ｆ 进 行 快 速 定 Ｃ ＳＶ
一
１ ＣＦ ＳＶ的 分 离鉴 定
量 高 的组 织 ，研 磨 后 制 成 ２ １％的 混 合 匀 桨 ， ％～ ０ 肾原 代 细胞 系和 睾 丸细 胞 系 （Ｋ １、Ｐ － ａ Ｔ ， Ｐ 一５ Ｋ ２ 、Ｓ ）
温 １ ，连 续 测 温 ５ｄ后 ，对 所 有 家兔 用 兔 化 次 ９ ，若对 照组 中 ２只 以上家兔 出现定型热或 轻 ６ｈ
热 反 应 ， 则 说 明 病 料 中不 含 Ｃ Ｆ野 毒 ，反 之 试 验 Ｓ
采疑似病猪 的扁桃 体 、脾脏、淋 巴结等含毒 Ｃ Ｆ弱 毒 静 脉 注 射 ， 同样 每 ６ｈ测 温 １次 ，连 续 Ｓ
用 ０４ ｍ 滤 膜 过 滤 后 ，接 种 于 敏 感 性 最 强 的 猪 型热反应 ，则试验成立 。若试 验组家兔 出现定型 ．５ 然 后 利 用 Ｃ Ｆ荧光 抗 体 试 验 或 免疫 酶 染 色试 验 检 组家 兔 不 发 生 定 型热 反应 ， 说 明病 料 中含 Ｃ Ｆ野 Ｓ Ｓ
“ ” … ” “ ” … ‘一 ‘ “ ‘ ‘
文献标识码
。 “ 。 “ “
Ｂ
“ ”
文章本文介绍了几种猪瘟的实验室诊断方法， 括病毒分 离和动物接种 摘 包 血清学及
９
非洲猪瘟的实验室检测与诊断技术
非洲猪瘟的实验室检测与诊断技术非洲猪瘟是一种高度传染性的猪传染病，对全球猪肉产业造成了严重的威胁。
为了及时发现并控制非洲猪瘟的传播，实验室检测与诊断技术起着重要的作用。
本文将介绍非洲猪瘟的实验室检测方法和诊断技术，并对其应用和发展进行探讨。
一、非洲猪瘟的实验室检测方法非洲猪瘟的实验室检测通常包括两种方法：病毒检测和抗体检测。
病毒检测主要通过PCR技术进行，PCR技术是一种基于核酸的检测方法，可以快速、准确地检测出非洲猪瘟病毒的存在。
通过提取猪体组织或血液样本中的核酸，再通过PCR扩增和检测，可以得到非洲猪瘟病毒的阳性结果。
PCR技术具有灵敏度高、特异性好、快速等优点，是目前非洲猪瘟的首选实验室检测方法之一。
另一种实验室检测方法是抗体检测，主要通过ELISA或ND抗体试验进行。
ELISA是一种基于酶标记的免疫学检测方法，通过检测猪体内的非洲猪瘟抗体来确定是否感染病毒。
ND抗体试验是一种血清学检测方法，通过检测血清样本中的中和抗体来判断是否感染非洲猪瘟。
这些抗体检测方法具有操作简便、经济实惠等优点，广泛应用于实际生产实验室。
二、非洲猪瘟的诊断技术在实验室检测的基础上，非洲猪瘟的诊断技术主要包括病理学检查、临床症状观察和病原学鉴定。
病理学检查是通过对病死猪体进行解剖和组织学检查，来确定非洲猪瘟的病变特征。
病理学检查可以提供病变部位和类型的信息，对于非洲猪瘟的早期诊断和病情判断起到重要的作用。
临床症状观察是通过观察感染猪的表现和症状来判断是否患有非洲猪瘟。
非洲猪瘟的临床症状包括发热、食欲减退、呼吸困难等，对于非洲猪瘟的诊断和控制具有重要意义。
病原学鉴定是通过实验室检测方法来鉴定病原体是否为非洲猪瘟病毒。
除了前面提到的病毒和抗体检测方法外，还可以通过核酸测序、电镜观察等方式来进一步确认非洲猪瘟的病原体。
病原学鉴定可以提供非洲猪瘟的病毒学信息，为病情评估和控制措施的制定提供依据。
三、实验室检测与诊断技术的应用与发展实验室检测与诊断技术在非洲猪瘟的防控和管理中起着重要的作用。
猪瘟病毒常用实验室诊断方法概述
养猪 Ｓ ＷＩ Ｎ Ｅ Ｐ Ｒ Ｏ Ｄ Ｕ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ
பைடு நூலகம்
猪 瘟 病 毒 常 用 实 验 室 诊 断 方 法 概 述
李 娇 ， 谢 金 文 ． 一 ， 唐 娜 ． 一 ， 王金 良１ ， ２ ， 苗 立 中 ． 一 ， 沈志 强 ，
２ ５ ６ ６ ０ ０ ： ２ ． 山东省滨州畜牧兽 医研 究院， 山东 滨州
别诊断 。 ２ ． １ 常规 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ
谢金文等根据 Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 上 已发表 的 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ核酸 序 列设计并合成 了 １ 对 能特异性扩增 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ基 因片 段 的引物 ， 扩增 片 段长 ５ ０ ８ ｂ Ｄ ， 该 方法具 有 良好 的 特异 性、 敏 感性、 重复性和 稳定性， 简便 、 快速 、 高效 ， 为Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ的快速准确诊 断及进 一步的 Ｃ Ｓ Ｆ流行病学 研究提供 了重要的技术手段［ ５ １ 。郭抗 抗等根据 Ｇ 。 ｎ — 收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ 一 ｏ ４ — ２ ５ 基 金项 目： 山东省自． 主 创新成果｝ 重大专项计划（ ２ ０ ０ ８ Ｚ Ｈ Ｚ Ｘ１ Ａ１ １ ０ ３ ） ： Ｂ ａ ｎ ｋ中 ３ ６ 株Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ强毒株 和弱毒疫 苗株 的基因序 山东省 自然科 学基金 （ Ｚ Ｒ ２ Ｏ １ Ｏ Ｃ ｏ ０ ｌ ２ ） 列 ，分别设 计 了针 对 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ强毒株和弱 毒疫 苗株 的 作者 简介 ： 李 娇（ １ ９ ８ １ 一 ） ， 女， 满族， 辽宁铁岭人 ， 助理研 究员， 硕士 ． 特 异性 引物 ，建立 了一种能区分 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ强毒株 和弱 主要从事动物传染病综合诊断 技术研究． Ｅ － ｍ ａ ｉ Ｈ ｉ ｊ ｉ ａ ｏ ｚ ｏ ｎ ｅ ＠１ ６ ３ ｃ ｏ ｍ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ快速 鉴别 检测方法 ， 可从 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ 通讯 作者 ： 沈 志强 ， 研 究员， 博士 ， 研 究方向为预 防兽 医学与生物 毒疫苗株 的 Ｒ 制品 学． Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｂ ｚ ｓ ｈ ｅ ｎ ｚ ａ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｎ ｒ 强毒株 和 弱毒 疫苗 株 中分 别扩增 出大小 为 １ ８ ７和
非洲猪瘟病原学检测方法
《非洲猪瘟病原学检测方法》非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是一种严重危害全球养猪业的烈性传染病，给世界各国的生猪养殖业带来了巨大的经济损失和社会影响。
及时、准确地检测非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）对于疫情的防控、诊断和扑灭至关重要。
本文将对目前常用的非洲猪瘟病原学检测方法进行详细的介绍和分析，以期为相关领域的研究和实践提供参考。
一、病毒分离培养病毒分离培养是非洲猪瘟病原学检测的经典方法，也是确诊 ASFV 的金标准。
该方法通过将疑似感染组织样本接种到适宜的细胞培养体系中，在特定的培养条件下培养，观察细胞病变效应（Cytopathic Effect，CPE）以及进行病毒的鉴定和分离。
病毒分离培养的优点是具有高度的特异性和敏感性，能够直接检测到病毒的存在和增殖。
然而，该方法也存在一些局限性。
病毒分离培养需要较长的时间周期，通常需要数天到数周甚至更长时间才能观察到结果，不利于疫情的快速诊断和及时防控。
病毒分离培养对实验条件和技术要求较高，需要专业的实验室设备和熟练的技术人员，操作较为复杂且成本较高。
一些弱毒株或变异毒株可能在细胞培养中难以分离和鉴定，从而影响检测的准确性。
二、实时荧光定量 PCR 技术实时荧光定量 PCR（Real-time Fluorescence Quantitative PCR）技术是目前非洲猪瘟病原学检测中应用最为广泛、最具发展潜力的方法之一。
该技术基于 PCR 原理，通过特异性引物和荧光探针，在 PCR 反应体系中实时监测荧光信号的变化，从而定量检测 ASFV 的核酸。
实时荧光定量 PCR 技术具有以下显著优点。
检测速度快，一般几个小时内即可获得结果，大大缩短了检测周期，能够满足疫情快速响应和处置的需求。
灵敏度高，可以检测到极低浓度的病毒核酸，提高了检测的准确性和可靠性。
特异性强，能够特异性地识别 ASFV 核酸，避免与其他病毒的交叉干扰。
猪瘟的流行特点、临床症状、实验室诊断及防控方法 - 养猪技术
猪瘟的流行特点、临床症状、实验室诊断及防控方法-养猪技术猪瘟是一种高度接触性传染病，临床上可分成急性型、慢性型、温和型。
近几年，该病的发病率不断升高，同时具有新的流行特点，如混合感染、隐性感染等，在一定程度上增大防控难度，并给养猪场带来一定的经济损失。
下面一起来了解一下：猪瘟的流行特点猪瘟的临床症状、实验室诊断及防治措施。
1、流行特点绵延性。
猪瘟从经常发生的大流行转变成地区性散发性流行，且呈现绵延性、波浪性、周期性的特点。
1个周期一般为3～4周，疫点明显变少，往往呈散发性流行。
广泛性。
我国各个省市均能够发生或者流行该病，且都能够分离到强毒株。
据报道，我国猪群中感染猪瘟病毒的阳性率平均达到15. 3%，最高时能够达到54%左右。
非典型性。
成年猪基本不会发生典型性猪瘟，尤其是母猪感染猪瘟病毒后能够超过752天带毒，且不会表现出任何明显的临床症状。
带毒母猪配种妊娠后，能够通过胎盘将病毒垂直传染给胎儿，并导致自身发生繁殖障碍。
所产后代仔猪接种猪瘟疫苗无法产生免疫应答，反而引起免疫耐受。
同时，能够持续向外排毒导致健康猪群发生感染，促使猪群中长时间存在病毒。
2、临床症状最急性型。
通常在发病和流行初期容易发生，病猪具有明显的发病症状，大部分突然死亡。
急性型。
大多数猪场都比较容易发生该类型，一般具有24～72 h的潜伏期。
病猪典型症状是精神沉郁，发热，体温升高达到40～42℃，怕冷、寒颤，嗜睡，往往卧地，增加饮水。
有些发生呕吐，结膜发炎，眼睑被脓性分泌物黏住。
感染早期，通常会发生便秘，排出附着有大量白色肠黏液的粪便。
随着症状的加剧，后期发生水样腹泻，排出混杂黏液或者血丝的粪便，且散发腥臭味。
另外，病猪耳后根、鼻端、四肢内侧以及肛门等部位的皮肤存在针眼大小的出血点，用手指按压不会发生褪色，腹股沟淋巴处发生肿大。
仔猪感染该病后，还会表现出典型的神经症状，如磨牙、侧卧、转圈、后退、四肢游泳状划动，严重时甚至陷入昏迷，且容易继发感染细菌，往往会呈现坏死性肠炎、肺炎等症状。
猪瘟的诊断实验报告
猪瘟的诊断实验报告引言猪瘟是一种由猪瘟病毒引起的传染病，其传播速度快、致死率高，给猪业生产带来了巨大的经济损失。
因此，及早、准确地诊断猪瘟具有重要意义。
本实验旨在利用一种常用的病理学方法，通过病理剖检和组织病理学观察，进行猪瘟的诊断。
材料与方法病例选择本次实验选取了一例猪瘟疑似病例，该猪年龄为6个月，体重约150kg，死亡时间为12小时。
标本采集将死亡猪的尸体置于无菌条件下，对全身进行彻底清洗。
随后，取得病猪的肺、心脏、肝脏、脾脏、肾上腺等组织标本，并分别置于10%中性缓冲福尔马林液中，进行固定。
组织病理学观察将固定的组织标本进行包埋、切片，并使用常规染色方法（如血液中性染色、组织苏木精-伊红染色）对切片进行染色。
接着，通过显微镜观察组织切片的病变情况，包括病变范围、细胞核变性、细胞浸润等。
实验室检测为了further confirm 猪瘟的诊断结果，使用补体结合试验（complement fixation test，CFT）来检测猪血清中的猪瘟病毒抗原。
结果与讨论组织病理学观察结果通过组织病理学观察，发现猪瘟病猪的肺、心脏、肝脏等多个器官组织出现了明显的病变。
其中，肺组织呈现出严重的充血、肺泡壁坏死、炎症细胞浸润等病理改变。
心脏组织出现心肌坏死、心肌间质纤维化等病变。
肝脏组织则显示明显的肝细胞坏死、坏死细胞碎片沉积等病理表现。
综合组织病理学观察结果，可以初步判断该猪为猪瘟。
实验室检测结果补体结合试验结果显示，猪血清中存在猪瘟病毒的特异性抗原，这进一步确认了猪瘟的诊断。
结论综上所述，通过病理剖检和组织病理学观察，以及补体结合试验的实验室检测，我们确认了本次实验所选取的猪瘟疑似病例的确为猪瘟病毒感染所致。
猪瘟的迅速传播与致死率高给猪业带来了巨大的经济损失，因此及早、准确地诊断猪瘟的重要性不言而喻。
为了防止猪瘟病毒传播，我们建议加强养殖场的卫生措施，注意猪场内的病毒防控，加强对猪群的观察，及时报告疑似病例，并进行疫情初步处理，同时进行对猪瘟疫苗的研发与推广，以期减少猪瘟疫情对猪业产生的不良影响。
某猪场隐性猪瘟的实验室诊断及净化方法
１ ． 血样处 理 ．２ ２ 备用。
１ ． 检 测方 法 ＿３ ２
将 已析 出的猪血清分离放人 相
类烈性传染病。目 ， 前 猪瘟的表现形式有急性 、 亚
应 的灭 菌离 心 管 内 ， 并按 分 组置 一５ ｌ ℃的冰 箱存 放 ，
免 疫 酶联 吸 附 试验 （ ＬＳ ， Ｅ ＩＡ）按
１ ． 采样 方 法 ．１ ２
做 好 猪 的保 定 后 ，在 耳 静 脉 采
血 ， 头 猪 采 血 ２ ， 分 别 对 猪 及 血 清 进 行 编 号 每 ｍＬ 并 标 记 和采样 记 录 。
养猪业最重要的传染病 。世界动物卫生组织 （ Ｉ ） Ｏ Ｅ
将 猪瘟 列 为 Ａ类 １ ６种法 定 传染 病 之一 ，我 国定 为
差极大 ， 部分生猪腹泻与便秘交潜出现 。但未 出现 死亡猪只。用过多种抗菌药物和防治措施收效微 。 初步诊断为隐性感染猪瘟。 ２ 实验 室检 测 为 了确 诊本 病 ， 步采 集 猪血 样 ． ２ 初 品进 行实 验 室诊 断 。采集 的 ３ ０份血 样 中 ， 用 猪瘟 应
病 毒 抗 原 血 清 试 剂 盒 进 行 免 疫 酶 联 吸 附 试 验 （ ＬＳ 检 测 到 阳性 样 品 ｌ ， Ｅ ＩＡ） ８份 阴性样 品 １ 。阳 ２份
１． 可见猪瘟免疫抗体水平高 ， ９ ％。 ５ 可有效 防止疫情
扩散 。 ３３ 从 最后 复 检 的结 果看 ， 可 能带 毒和 排毒 的是 ． 最 僵 猪 （ 淘 汰 ， 被 复检 到 ）后 期 感 染 的猪 可 通 过 被 没 ，
养 猪
某猪场隐性 猪瘟 的实验室诊 断 及 净化 方法
陈盛絮 ， 肖梅仙 ， 潘秋 明
（ 东省 茂 名市 动物 疫病 预 防控 制 中心 ，茂名 ５ ５ ０ ） 广 ２０ ０
猪瘟的症状及实验室诊断
猪瘟的症状及实验室诊断猪瘟至今仍然是猪发病最多、危害最大、流行最广的传染病。
据统计资料，近年我国猪病死亡占猪饲养总数的8%~12%，其中1/3是由猪瘟引起的死亡，更为严重的是近二三十年出现了非典型的温和性猪瘟，在病原特征、流行病学、临床表现形式等方面发生了很大变化，这给猪瘟的诊断和防治工作带来了新的难题。
csf是受世界各国关注的传染病之一，国际兽疫局(oie)将其列入a类传染病。
猪瘟的剖检(1)最急型：浆膜、黏膜有少量出血，淋巴结轻度肿胀。
(2)急性型：全身皮肤、浆膜、黏膜和内脏器官有不同程度的出血。
全身淋巴结肿胀、多汁、充血、出血，外表呈现紫黑色，切面如大理石状。
肾脏色淡，皮质有针尖至粟状出血点。
脾脏有梗塞，以边缘多见，呈黑色小紫块。
喉头黏膜及扁桃体出血。
膀胱黏膜有散在的出血点。
胃、肠黏膜呈卡他性炎症。
大肠的回盲瓣处形成纽扣状溃疡。
(3)慢性型：主要表现为坏死性肠炎，回盲瓣部有扣状溃疡，全身性出血变化不明显，由于钙磷代谢的扰乱，断奶病猪可见肋骨末端和软骨组织交界处形成结节，因骨化障碍而形成黄色骨化线。
(4)温和型：扁桃体坏死、溃疡，脾梗死一二处，肾脏苍白有出血点、膀胱有出血点，胆囊黏膜少量出血、溃疡，少数淋巴结大理石样变化，另有骨化线、关节炎。
(5)繁殖障碍型：怀孕早期所产胎儿变干、变黑，呈木乃伊化，死胎全身皮下水肿、出血，腹水、胸水，畸形，小脑发育不全；怀孕小于70天所产仔猪膀胱、胃、心、扁桃腺、肾、回盲肠口、皮肤等有出血点，皮肤内脏常有出血点。
母猪怀孕70-90天所产仔猪表现为淋巴结肿大，胸腺萎缩。
猪瘟的实验室诊断(1)实验室诊断通常取发病猪扁桃体、肾脏、脾脏或淋巴结等病理组织样品，制成2%组织悬液接种于猪瘟病毒敏感的细胞系（如pk-15细胞等），分离纯化病毒。
(2)采用免疫荧光抗体检查、免疫酶标记试验、新城疫病毒的强化试验、兔接种试验（兔体交互免疫试验）、琼脂扩散试验、血清中和试验以及pcr等方法可确诊。
猪瘟诊断技术国标
猪瘟诊断技术国标
【原创实用版】
目录
1.猪瘟诊断技术国标的背景和意义
2.猪瘟诊断技术的主要内容
3.猪瘟诊断技术的起草单位和主要起草人
4.猪瘟诊断技术国标的实施和影响
正文
猪瘟诊断技术国标是为了规范猪瘟的诊断方法和技术，保障猪瘟的预防和控制工作，由全国动物卫生标准化技术委员会（tc181）归口上报及执行，主管部门为农业农村部。
该国标名为《猪瘟诊断技术
(gb/t,16551-2020)》，主要起草单位为中国兽医药品监察所，主要起草人包括王在时、王琴、丘惠深、赵耘等。
猪瘟诊断技术国标主要内容包括猪瘟的临床症状、病理变化、实验室诊断方法和样品采集与处理等方面的技术要求和操作规范。
该国标对于猪瘟的诊断具有重要的指导意义，能够有效地提高猪瘟的诊断准确率，为猪瘟的预防和控制提供科学依据。
猪瘟诊断技术国标的实施对于我国的猪瘟防控工作具有重要的影响。
一方面，该国标能够规范猪瘟诊断技术，提高猪瘟诊断的准确性和可重复性，为猪瘟的防控提供可靠的技术支持。
另一方面，该国标也有助于加强猪瘟诊断技术的研究和创新，推动猪瘟诊断技术的不断发展和完善。
在实际应用中，猪瘟诊断技术国标应该得到广泛推广和应用，为猪瘟的预防和控制提供有力的技术保障。
第1页共1页。
非洲猪瘟实验室诊断
分子生物学检测方法
O20u17r/a5,1/C5. A., L. Edwards, and C. A. Batten. 2013. Virological diagnosis of African swine fever--comparative study of available tests. Virus research 173:150-158.
• 抗凝血 • 淋巴结 • 脾脏 • 肾脏 • 骨髓
实验室诊断的安全原则
• 保障人员的安全
– 穿戴：眼罩、手套、实验服、口罩和鞋套等 – 行为：洗手、禁止聊天，实验室内禁止食用食
物和饮料等 – 了解化学试剂的特性和潜在的危险
• 保障样品的安全
– 防止样品交叉污染 – 一次性手套
2017/5/15
良好的工作区域
图9：肾淤斑及出血点（急性） 图10：肾盂及肾乳头部的出 血斑（急性）
图11：肾盂处散在的出血点（急性ASF ） 图12：肿大、出血的肝胃淋巴结，可出见有血凝块。（急性）
图13：肝胃淋巴结切面，肿大并呈暗红色。（急性ASF） 图14：心包积液及心包肌层有散在的出血点。（急性ASF）
图15：胆囊水肿（急性ASF） 图16：肺部可见肉芽肿病变， 形成一结节（慢性ASF）
• 加入200 µl样本。每个提取程序都加入E+ 和 E(200 µl水)对照。
• 立即混匀并在72±2ºC 温度下孵育10分钟。 • 将1.5 ml微离心管简单离心操作，除去管盖内部的
水珠。 • 将100 µl异丙醇加入样本试管，混匀。 • 将过滤管放入收集管中，并将样本移入过滤管。
提取病毒DNA （2）
• 软蜱是自然界中的贮主并且可以作为传播 媒介
猪瘟诊断技术国标
猪瘟诊断技术国标猪瘟，又称非洲猪瘟，是一种由非洲猪瘟病毒引起的严重传染病，也是目前全球范围内猪类养殖业面临的重大危机之一。
针对猪瘟的诊断技术的国际标准对猪瘟的诊断技术在疫情的控制和防治中起着重要的作用。
为了规范猪瘟的诊断技术，保障猪类养殖业的健康发展，各国在不同国际组织下积极开展了猪瘟诊断技术的标准制定工作。
下面将对猪瘟诊断技术的国际标准进行详细介绍。
1. 诊断样本的采集和处理猪瘟病毒主要存在于病猪的血液、组织和分泌物中，因此对于猪瘟的诊断需要采集患病猪的相关样本。
国际标准中通常规定了猪瘟诊断样本的采集、保存和运输方法，以确保样本的完整性和可靠性。
还包括了对于患病猪的处理要求，防止交叉污染。
2. 实验室诊断技术实验室诊断技术是猪瘟诊断的核心部分，国际标准对于猪瘟的实验室诊断技术进行了详细的规定。
其中包括了对于猪瘟病毒的检测方法、鉴定方法和鉴别方法，以及对于实验室设备和试剂的要求。
国际标准还规定了猪瘟诊断的结果判定准则和结果报告格式，确保诊断结果的准确性和可比性。
3. 质量管理体系为了确保猪瘟诊断技术的可靠性和准确性，国际标准通常还包括了对于实验室质量管理体系的要求。
这些要求包括了实验室设施和设备的管理、人员素质和能力的要求、实验室操作规范等，以确保诊断结果的可信度和稳定性。
4. 样品的保护国家对诊断结果的保护是非常重要的，因为这关系到疫情的控制和防治。
因此在国际标准中对样品的保护也进行了详细的规定，主要包括了样品的运输、保存、处理等要求，以确保样品的完整性和可靠性。
国际标准对猪瘟诊断技术的规范化给猪瘟的诊断技术提供了规范和保障，有助于提高猪瘟的诊断水平，促进猪类养殖业的健康发展。
通过国际标准的制定和执行，能够加强各国之间在猪瘟疫情防控和技术交流的合作，有利于共同应对猪瘟疫情带来的挑战，保障全球猪类养殖业的可持续发展。
猪瘟诊断技术国标
猪瘟诊断技术国标猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的疾病，目前在全球范围内造成了严重的猪群损失。
针对猪瘟的诊断技术具有重要的意义，能够及时准确地诊断病例，有助于控制疫情的蔓延，保障猪群健康。
为了规范猪瘟诊断技术的应用，中国制定了关于猪瘟诊断技术的国家标准。
本文将针对这一国家标准进行详细阐述，全文约2000字。
一、标准编号及名称国家标准的编号为“GB/T XXXXX-XXXX 猪瘟诊断技术”，其中XXXXX-XXXX为具体的标准编号，该标准的名称为“猪瘟诊断技术”。
该标准是由中国国家质量监督检验检疫总局和中国国家标准化管理委员会共同制定的。
二、标准的范围该标准规定了猪瘟诊断技术的要求和方法，适用于猪瘟的诊断工作。
该标准所涉及的猪瘟诊断技术包括但不限于病毒学检测、免疫学检测、分子生物学检测、临床诊断等方面的技术。
三、标准的主要内容1. 术语和定义该部分对猪瘟及相关术语的定义进行了详细说明，包括病毒名称、猪瘟的传播途径、病原学特性等内容。
2. 猪瘟病毒的检测方法本部分规定了猪瘟病毒的检测方法，包括传统的病毒学检测方法和现代的分子生物学检测方法。
传统的病毒学检测方法主要包括病毒分离、细胞病原学检测和血清学检测等技术；而分子生物学检测方法主要包括PCR法、实时荧光PCR法等。
3. 猪瘟病毒抗体的检测方法本部分规定了猪瘟病毒抗体的检测方法，包括血清学检测和免疫学检测等技术。
血清学检测主要包括血凝抑制试验、中和试验等；免疫学检测主要包括ELISA法、免疫胶体金法等。
4. 猪瘟诊断标本的采集、保存和运输本部分规定了猪瘟诊断标本（包括血清、组织、粪便等）的采集、保存和运输要求，保证标本的质量和完整性，以便进行后续的诊断工作。
5. 猪瘟诊断技术的质量控制本部分要求进行猪瘟诊断技术的质量控制，包括实验室环境的控制、仪器设备的校准、质控品的使用等，以确保诊断结果的准确性和可靠性。
6. 猪瘟诊断报告的要求本部分规定了猪瘟诊断报告的内容和格式，包括诊断结果、标本信息、诊断依据、诊断人员信息等，确保诊断结果的可追溯性和可比性。
非洲猪瘟的检测技术
非洲猪瘟的检测技术非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的急性、高度接触性疾病，对猪类的危害极大，病死率高达100%，给猪产业造成了巨大的经济损失。
随着全球化的发展和人类社会的进步，非洲猪瘟病毒的传播范围也越来越广泛，对人们的生活和经济安全带来了严重威胁，因此非洲猪瘟的检测技术成为了猪农、兽医等相关行业关注的重点。
非洲猪瘟的检测技术主要包括病毒检测、抗体检测和临床症状检测等多种方法。
病毒检测是判断猪只是否感染非洲猪瘟病毒的关键手段，目前主要采用的方法有PCR检测、病毒分离和鉴定等。
抗体检测则是判断猪只是否已经患病或者曾经感染过非洲猪瘟病毒的重要手段，目前主要采用的方法有ELISA检测等。
临床症状检测则是通过观察猪只的临床表现来判断是否感染了非洲猪瘟病毒，这是一种传统的检测方法，但准确性比较低，容易出现漏诊和误诊。
随着科技的不断发展和进步，非洲猪瘟的检测技术也在不断创新和完善。
下面我们将分别介绍几种常用的非洲猪瘟检测技术及其特点。
1. PCR检测PCR技术在非洲猪瘟的检测中具有很高的灵敏度和特异性，能够快速准确地判断猪只是否感染了非洲猪瘟病毒。
PCR技术还可以通过多重PCR方法同时检测多种病毒，提高了检测的效率和准确性。
PCR技术也存在一定的局限性，比如需要专业的实验室设备和技术人员、易受试剂质量和操作规范等因素的影响等。
2. ELISA检测ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种通过酶标记抗体或抗原，采用酶底物显色反应进行定量或半定量分析的技术。
在非洲猪瘟的检测中，ELISA技术主要用于检测猪只体内的非洲猪瘟病毒抗体，从而判断猪只是否已经患病或者曾经感染过非洲猪瘟病毒。
ELISA技术的原理是，将待检血清与已知的非洲猪瘟病毒抗原进行特异性结合，然后用酶底物显色反应进行检测分析。
3. 病毒分离和鉴定病毒分离和鉴定是一种通过分离和培养病毒来判断猪只体内是否存在非洲猪瘟病毒的技术。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
收 稿 日 期 ：2010－02－21 作者 简 介 ：黄 猷 军 （1977—），男 ，助 理 畜 牧 兽 医 师 ，主 要 从 事 动
物疫病防控工作。
2009 年 8 月 ， 某 养 殖 户 从 外 地 购 入 肉 雏 鸡 1 500 羽 ， 进场后，按规定的免疫程序，在 7 日龄用新支二联苗滴鼻。 10 日 龄 时 ，鸡 群出 现 甩 鼻 和 拉 稀 现 象 ，随 后 鸡 只 开 始 出 现 死亡。 因连续几天阴雨，鸡舍内潮湿，又无干燥垫料可换， 该养殖户认为是由于气候因素和接种疫苗的影响， 便自 行饲喂泰乐菌素、氧氟沙星等药物后，病情仍不见好转， 后经兽医人员对病例进行剖检，初步确诊为曲霉菌感染。 通过在饲料中投放制霉菌素，饮水中添加电解质、林可霉 素后，病情得到了有效控制 。 共死亡雏鸡 365 羽，死亡率达 24.3%。 2 临床症状
收 稿 日 期 ：2010－02－26 作 者 简 介 ：郑 允 志 （1971—），男 ，助 理 兽 医 师 ，主 要 从 事 兽 医 临
床诊断和动物防疫工作。
表 1 被检样品中有或无猪瘟病毒的判定
注射被检样品 注射猪瘟兔化疫苗 后的发热反应 毒后的发热反应
判定被检样品 中含有的病毒
无
猪瘟病毒
无
有
步 鉴 定 ［J］.安 徽 农 业 科 学 ，2007 ，35（25）：7841. ［9］ 李升 和.猪 瘟 的 诊 断 及 其 科 学 防 制 ［J］.畜 牧 与 饲 料 科 学 ，
2009，30（7/8）：48-53. ［10］ 杨克礼，徐涤平，梁望旺，等.猪瘟病毒检测技术研究进展
［J］.安 徽 农 业 科 学 ，2007 ，35（16）：4853-4854 ，4856.
根据流行病学特点、 临床症状和剖检变化可作出初步 诊 断 ，特 别 是 肺 部 和 气囊 的 特 征 性 病 变 具 有 诊 断 意 义 ，最 终 确诊需要进行微生物学检查，或者接种于沙氏培养基，进行 分离培养和鉴定。 经上述检查后，确诊该病为鸡曲霉菌病。 6 防治措施 6.1 预防
①严禁使用霉变的木糠、稻草等作为垫料。 木糠必须先 在太阳下暴晒晾干后才能使用 ，30 日 龄 前 最 好 选 用谷 壳 代 替木糠。 使用垫料前可先用福尔马林熏蒸消毒。
组织。 严重败血型病鸡， 气囊可见有同心圆状的黄色坏死 灶，甚至扩展到肝、心、肾和脾脏等器官。 除肺部和气囊外， 在气管、支气管或肠浆膜、肝脏、肾脏等处也发现有霉菌病 灶。 有神经症状的鸡，脑部可见有脑膜炎。 4 实验室诊断
取肝、脾组织抹片，革兰氏染色，镜检，未检出细菌。 取 气囊结节病灶从绿色病变区采取病理组织 （即结节中心的 绿 色 区 ）少 许 或 菌 丝团 ，置 于 载 玻 片 上 ，加 10%氢 氧 化 钾 溶 液 1 滴，压碎拌匀，盖上盖玻片，置于显微镜下检查，可见特 征性的菌丝体和孢子。 将病料浸入灭菌生理盐水中，捣碎， 接种于沙氏培养基，经培养 24~48 h 后，挑取菌落镜检，可见 有繁殖菌丝的分生孢子柄顶端膨大成顶囊，呈烧瓶状，顶囊 上部的小梗产生分生孢子，分生孢子呈球形。 5 诊断
建立在猪瘟特异性单克隆抗体基础上的酶标方法可用 于检查病料冷冻切片中的猪瘟病毒抗原， 也可用于区分猪 瘟流行野毒或疫苗病毒。 6 分子生物学诊断
分子生物学为猪瘟的诊断提供了基因分析的多种方法， 在有条件的诊断实验室可用逆转录和聚合酶链式反应，以及 限制性内切酶谱等对病毒特定基因节段及其相对应的蛋白 质进行分析，即可快速确定被检病毒在猪瘟病毒属中的位置 。 参考文献：
②注意防止使用发霉饲料，购进或配制的饲料应该在一 定的时间内让鸡群吃完（一般 7 d 内），饲料储存要用木板架 起放置，以防止饲料吸潮。 同时，要经常清理垫料，及时把垫 料中的饲料清除干净。
③严格做好消毒卫生工作， 可用 0.4％的过氧乙酸带鸡 消毒。 全面清理霉变的垫料，用 0.2％~0.1％的硫酸铜溶液全 面喷洒鸡舍，并更换新鲜干净的谷壳作垫料。 饮水器、料桶 等鸡接触过的用具要全面清洗 ， 并用 0.2％~0.1％的硫 酸 铜
［14］ 汤相银. 一例疑似猪瘟病毒与猪链球菌混合感染症 的 初
步 诊 断 和 应 急 措 施 ［J］.畜 牧 与 饲 料 科学，2009，30（4）：70-
71.
□
畜牧与饲料科学
Animal Husbandry and Feed Science
2010 ，31 （3 ）:187
肉鸡曲霉菌病的诊治
黄猷军 （广西宁明县峙浪乡渔牧兽医站，广西 宁明 532508）
摘要：禽曲霉菌病是多种禽类常见的霉菌病，主要发生于 2 周龄前的幼禽，病禽以呼吸困难为主要临床特征。 介绍了肉
［11］ 沈素芳，汤赛冬，成建忠.猪瘟诊断方法研究进展探析 ［J］.
现 代 农 业 科 技 ，2009 （5）：215 ，217.
［12］ 孙冬青. 非典型猪瘟的发生及防治 ［J］. 现代农业科技 ，
2008（23）：281.
［13］ 贾伟星，刘哲迁，付名山 ，等.一起猪瘟继发链球菌病的诊
断 试 验 ［J］.畜 牧 与 饲 料 科 学 ，2007 ，28（6）：57-58.
□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□
［J］.畜 禽 业 ，2007 （3）：21-23. ［7］ 邱慧玲，陈甫.山东部分地区猪瘟与蓝耳病的流行病学调
查 ［J］.安 徽 农 业 科 学 ，2009 （18）：8491-8492 ，8550. ［8］ 杨文超，谢金文，余为一.猪瘟病毒 E2 基因的克隆及其初
无
无
猪瘟兔化疫苗毒
有
有
可能含有猪瘟或猪瘟兔
化疫苗毒以外的致热原
的冷冻切片。 经丙酮固定后，滴加猪瘟荧光抗体 （商品），置 湿盒内 37 ℃ 45 min 后取出， 用磷酸盐缓冲液漂洗 5 次，晾 干，用缓冲甘油 （pH 值 9.5）封片，荧光显微镜检查 。 细胞浆 中呈现黄绿色荧光，指示有猪瘟病毒抗原存在，如反差不明 显，可用 1％伊文思蓝复染（复染后脱色不要过度）。 5.2 中和试验 在被检病料制剂接种细胞培养前， 分别与 猪瘟、牛病毒性腹泻和羊边界病阳性血清等量混合，置 37 ℃ 30 min（试验设对照组），然后按荧光抗体法检查细胞培养瓶 中和盖玻片中的病毒抗原， 从而推断被检物与 3 种病毒之 间的关系。 5.3 酶标抗体法 酶标抗体有商品出售， 按生产厂家使用 说明书操作即可。 建立在猪瘟病毒糖蛋白（E2）特异性单克 隆抗体基础上的酶联免疫吸附试验早已被许多国家用于猪 瘟的血清学和流行病学调查。
雏鸡开始精神不振，两翅下垂，羽毛松乱，缩颈呆立，闭 目嗜睡，食欲减退，饮水增加。 后期伴有顽固下痢 ，粪便呈灰 褐色或黄绿色，摇头甩鼻，伴有浆液性鼻漏，仰头张口，呼吸 困 难 ，呈 腹 式 呼 吸 。 部分 病 例 在 眼 角 膜 下 形 成 黄色 的 干 酪 样 小球状物 。 有的病鸡出现神经症状 ，有的出现一侧或两侧眼 睑肿胀，瞬膜下形成干酪样的小球状分泌物。 3 病理变化
［4］ 李倩，姚淑霞.非洲猪瘟病毒 VP73 蛋白的 B 细胞表位预测 ［J］.安 徽 农 业 科 学 ，2008，36（18）：7680-7682.
［5］ 吕 剑 钊. 一 起 猪 瘟 的 防 制 报 告 ［J］. 现 代 农 业 科 技 ，2008 （22）：230-231.
［6］ 胡 晓 苗 ，张 丹 俊 ，汪 丽 ，等.猪 瘟 病 毒 实 验 室 诊 断 研 究 进 展
鸡曲霉菌病的发病情况、临床症状、病理变化、实验室诊断、预防及治疗，以期为防治该病提供参考。
关键词：肉鸡曲霉菌病；预防；治疗
中 图 分 类 号 ：S858.315
文 献 标 识 码 ：B
文 章 顺 序 编 号 ：1672-5190 （2010 ）03-0187-01
肉鸡曲霉菌病，又称霉菌性肺炎，烟曲霉菌是该病主要 的 病 原 霉 菌 ，是 最 为 常见 和 致 病 力 最 强 的 霉 菌 。 烟曲 霉 菌 菌 落最初为白色致密绒毛状，菌落形成大量孢子后，其中心呈 浅蓝绿色，表面呈深绿色、灰绿色甚至为黑色丝绒状。 曲霉 菌病是平养肉鸡常见的一种真菌性疾病， 特别是南方阴雨 潮湿的春季最为常见。 1 发病情况
用猪肾和睾丸的原代、次代或传代细胞均可。 病料经研磨、离心、除菌滤过后接种细胞培养，如果细 胞不出现病变， 通常用荧光抗体法可测出细胞培养中盖玻 片上细胞浆内的病毒抗原。 亦可用鸡新城疫病毒强化试验 检测猪瘟病毒的存在，方法是将被检材料先接种细胞培养， 于 37 ℃培养 4 d 再接种新城疫病毒并继续培养 3 d，如细胞 出现病变，则指示被检材料含猪瘟病毒。 3 猪体回归感染试验 用易感幼猪 ，试验分 3 组 ，每 组 3～5 头 ，其 中 一 组 接 种 猪 瘟 疫苗 ，另 一 组 注 射 猪 瘟 抗 血清 （1 mL/kg 体 重 ），第 3 组 为未免疫组。 1 周后 3 组同时接种被检材料（血毒或病料乳 剂 1 mL/头），继续饲养 2～3 周，疫苗和抗血清免疫组试验猪 不发病，未免疫组表现临床症状和病理变化，即可确诊。 该 试验最为敏感和最有诊断价值，但需要严格的隔离条件，并 且耗资费时。 4 家兔交叉免疫试验 选用体重 2 kg 左右的健康家兔 5～10 只， 每只耳静 脉 注射被检病料制剂 1 mL，注射后每天测家兔体温 3～4 次。 1 周后每只兔可静脉接种 100 个兔体半数热反应剂量， 继续 测温 5～7 d。 据资料统计， 家兔接种猪瘟兔化弱毒后 48，72 和 96 h 呈 现 热 反 应 的 百 分 率 依 次 为 77％、16％和 7％； 体 温 超 过 41 ℃ （稽留 24 h 以上为典型热反应）的占 65％，40.5～41 ℃占 28.5％，不敏感者占 6.5％。 具体判定见表 1。 5 血清学诊断 5.1 荧光 抗 体 法 用 于 检 测 细 胞 培 养 或 病 料 中 的 病 毒 抗 原。 前者在接种后 6～8 h 的盖玻片上进行 ，后者用 5～7 μm