大豆中脲酶活性的测定

快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕，在样品上 滴入少量指示剂并搅拌，将其平铺于培养皿中， 放置5min后观察结果。 无任何红点出现，再放置25min仍然无红点出 现，说明豆粕过熟； 有少量红点出现，说明脲酶活性较低，豆粕可 用； 样品表面有25％被红点覆盖，豆粕可用； 样品表面有50％被红点覆盖，应慎用； 样品表面有75％－100％被红点覆盖，脲酶活 性过高，豆粕过生，不可用；
脲酶的测定方法
比色法 滴定法 PH增值法 快速检测法
PH增值法
1.实验原理： 脲酶水解尿素产生氨，使溶液的PH值 升高，通过测定样品溶液的PH值和空白的 PH值之差来计算尿酶活性。脲酶活性定义 为：在30 摄氏度和PH为7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释放的氨 态氮的毫升数。
2.实验仪器与器皿 PH计，带玻璃的电极，甘汞电极，恒温 水浴，50ml试管 3.试剂 磷酸缓冲液：称取3.403克磷酸二氢钾， 溶于100ml的水中。再称取4.335克的磷 酸氢二钾，溶于100ml的水中，合并两者 并配制成1000ml，用酸或者碱调节PH=7。 尿素缓冲液：称取15克尿素，溶于500ml 磷酸缓冲液中，调节PH=7
滴定法
a.原理：将粉碎的大豆制品与中性的尿酸 缓冲液混合，在30℃保持30min，尿酸酶 催化尿素产生氨，用过量的盐酸中和氨， 再用氢氧化钠溶液回滴。酶的活性用1克 分析材料在30℃下1min 产生氨态氮的毫 克数表示。（mgN/g） b.仪器与器皿：样品筛，酸度计，恒温水 浴锅，试管，10ml移液管
4.操作步骤
准确称取0.4克样品2份，分别置于2支试
管中。一支试管加入20ml 的磷酸缓冲液，作为
空白试验（A管），另一支加入20ml尿素缓冲
液（B管）。盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准
确保持30min。在此期间，每隔5min摇匀一次。
取出立即在流水中冷却，5min内测定溶液的
PH值。
5.计算
溶液PH值与试剂空白PH值之差即为脲酶活 性，公式如下： UA=B-A B——B管的PH值 A——A管的PH值
e.结果计算
UA＝14×C(V0-V)/(30×m) C——氢氧化钾标准溶液浓度， mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钾的体 积， ml； V——测定试验消耗的氢氧化钾的 体 积，ml； m——试验质量，g。
比色法
原理：向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓 冲液的分析悬浮液中加入尿素溶液，在 30℃下保温5min，加入磷钨酸终止酶作 用并沉淀蛋白质。产生的氨在次溴酸钠和 麝香草酚作用下形成蓝色的靛麝香草酚， 借以比色。
在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失 活，从而降低或者失去其有害作用 ，因 此，在大豆加工生产饲用饼粕时，必须 对大豆粕进行充分而又适当的加热，这 样才能使其中的抗营养因子失活 。
评价大豆饼粕的指标
脲酶活性： 检测豆粕的加热程度是否足以 破坏其中的抗营养因子的指标。 蛋白质溶解度：反映豆粕是否加热过度的 一个指标。
快速测定方法1
酚红法

称取0.2克的样品于试管中，加入 0.2克的尿素，再加入2滴酚红指示剂及 20ml蒸馏水，摇动10分钟，观察溶液的 颜色。 1分钟内呈粉红色，脲酶活性很强； 1-5分钟呈粉红色，脲酶活性强； 5-15分钟呈粉红色，活性有点强； 15-30无色，没有活性。 通常10分钟以上不显粉红色的大豆 饼粕其脲酶活性丧失。
大豆饼粕中脲酶活性的测定
豆粕的蛋白质含量为45%左右，是一 种优质的蛋白质饲料，但是由于其中的抗 营养因子较多，极大的限制了豆粕在饲料 中的应用。
大豆中的抗营养因子
胰蛋白酶抑制剂 植物红细胞凝集素 皂甙 胃肠胀气因子 植酸 抗维生素 致甲状腺肿因子
这些抗营养因子大多是不耐热的，
c.试剂：尿素 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 Βιβλιοθήκη Baidu素缓冲液（PH6.9至7.0） 4.45克磷酸 氢二钠和3.40克的磷酸二氢钾溶于水并稀 释至1000ml，再将30克尿素溶于此缓冲 液中。 盐酸 氢氧化钠 0.1mol/L标准溶液
操作方法
称取0.2克已粉碎的样品，转入试管中， 加入10ml的尿素缓冲液，立即盖好试管并剧烈 振动，马上置于30℃的恒温水浴中，准确计时 保持30分钟。然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液， 迅速冷却到20℃，将试管内容物全部转入烧杯， 用5ml水冲洗试管2－3次，立即用标准氢氧化 钾标准液滴定至PH=4.70。 另取试管作为空白管，加入10ml的尿素缓 冲液，然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液。称取 与上述试样量相当的试样，迅速加入此试管中， 立即盖好试管并剧烈振动，马上置于30℃的恒 温水浴中，准确计时保持30分钟，冷却到20℃， 将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试 管2－3次，立即用标准氢氧化钾标准液滴定至 PH=4.70。