4多聚甲醛固定微生物样品的原理

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4%多聚甲醛固定微生物样品的原理

标本中大多数神经激素、肽类物质,以及蛋白质为水溶性，在用于研究之前，常需固定, 即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能与蛋白质的氨基反应，使蛋白质凝固，因此在医药上可做为检验时的组织固定剂、以及防腐剂等。在固定剂中，最常用的是多聚甲醛。

常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）

醇类（常用乙醇）

其它（丙酮）

(1) 醛类

甲醛(福尔马林)应用最广

原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。

优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。

缺点：

甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；

醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍；

分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。

注意事项：

缩短固定时间，降低固定温度(4°C)，为此组织块不宜过厚。

改用中性缓冲福尔马林，以pH值7.2～7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10％甲醛固定液，减少固定液pH的变化。

固定后充分水洗以减少分子间交联。

切片在作免疫组化染色前，先经预处理使抗原再现(抗原修复)。

戊二醛：

穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。

多聚甲醛(常用4%)：

可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。

主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。

(2) 醇类

最常用的醇类固定剂是乙醇。

其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。

优点：穿透性强、抗原性保存好。

缺点：

脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度

3) 其它固定剂

丙酮：

对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。