食用菌母种制作实验一
食用菌实验
操作方法： ①将实验用的材料用品和仪器用具准备好、摆放整齐，并 按照超净工作台的使用方法使其处于工作状态。 ②在超净工作台的无菌区，按照无菌操作规程，进行常规 的手部消毒和器械的烧灼灭菌。随后用75%酒精棉球对 子实体进行表面消毒。 ③可以直接将子实体沿菌柄迅速纵向撕开，用灼烧灭菌后 的尖头镊子移取菌盖、菌柄交界处组织块（绿豆大小）。 移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上棉塞。 ④将分离的试管放在25℃恒温箱培养，培养期间每天都要 检查菌种的萌发与生长情况，对污染的试管及时挑选、 处理。经过7～10 d培养，菌丝体长满试管，即为纯菌 种。
三、方法步骤 1．种菇选择 选择生长健壮、无病虫害、菇形正、大小适中、颜色 正常、尚未散发孢子、七八分成熟的子实体作为分离材料， 最好在第一潮菇中采摘，保持菇体洁净备用。 2．母种分离方法 （1）组织分离法。此法是生产中最常用的方法，它操 作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种遗传性较稳定，在 培养基条件适宜的情况下，能保持原有菇种的优良性状和 特性。
5．培养
接种后，在恒温培养箱中闭光培养，及时淘汰杂菌污 染的试管，一般10 d左右菌丝可长满管。
实验二
食用菌菌种的分离技术
一、目的要求 了解食用菌菌种分离基本原理，通过操作熟悉掌握子 实体组织分离、担孢子采集关键技术。 二、实验材料 1．材料用品 平菇、香菇等新鲜子实体、试管斜面培 养基、三角瓶培养基、95%酒精、75%酒精棉球、记号笔等。 2．仪器用具 超净工作台、酒精灯、尖头镊子、接种 针、接种铲、刀片、金属丝、培养皿、废物罐等。
3. 母种培养基的灭菌 按照手提式高压蒸汽灭菌锅的操作规程对培养基进行 灭菌。一般121℃灭菌30min。灭菌结束后待温度、压力降 到“0”，打开锅盖，让锅内多余蒸气逸出，利用锅体余 热烘干棉塞后取出已灭菌物品；趁热将试管摆成斜面，培 养基以试管长度的1/2到2/3为宜，斜面试管上应覆盖洁净 的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。斜 面制成后，如不马上使用，可在5℃的冰箱中保存待用。
食用菌实验-母种原种扩大培养
实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
实验1食用菌母种(一级种)制作 食用菌学课件
其制种的技术。 三、培养基配方 马铃薯硫酸铵培养基: 马铃薯200 g，硫酸铵2g，蛋白胨1g， 葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁1g， 琼脂20g，pH6.5-7 ,水1000mL
四、方法与步骤 母种培养基制作流程：
马铃薯去皮、切粒→煮8-10分钟后 取汁使用→加药品溶化→琼脂溶化→ 混合定容→调节pH值→分装→灭菌→ 倒斜面→接种→培养→母种（一级 种）。
《食用菌学》实验
华南师范大学《食用菌学》课程教学网站网址：
/life/teacher/zhang范大学生命科学学院
使用教材：黄文芳,张 松.微生物
学实验指导.暨南大学出版社,2003 年出版
二、目的要求 通过母种（一级种）的制作，掌握
9食用菌实验
保持90%左右的湿度，调节好其他环境因子，待子实体成熟后 采收。
2.发酵料栽培
将培养料发酵6天后，可装袋栽培金顶侧耳、鸡腿菇。
接种、培养及出菇管理与观察与熟料栽培相同。
实验五 食用菌实验观察（2学时）
一、目的要求
1.比较不同食用菌的菌丝的形态和生长速度； 2.学会判断不同杂菌的污染情况； 3.了解不同食用菌的姑房管理方法。 二、时间安排
将原种接入瓶装或袋装的木屑、麦粒或粪草等培养基内所得 到的菌种称为栽培种。 由于食用菌的种类及代谢的多样性，因而培养食用菌栽培种 的培养基种类也很多，但棉籽壳培养基、木屑培养基和麦粒培养 基是最常用的培养基。
栽培种培养基的配置方法大致相同，包括拌料、装袋、灭 菌、接种、培养等环节。
三、实验材料
1. 菌种 灵芝、金顶侧耳、金针菇、鸡腿菇、黄伞等。 2. 药品 75%酒精、来苏耳、高锰酸钾、葡萄糖、碳酸钙、石膏等。 3. 材料
2 .接种
（1）菌种表面消毒； （2）将菌种斜面分成5等份； （3）将菌种接到瓶或袋装培养基的顶部中心处；
（4）1支试管种可接原种培养基5瓶左右。
3. 培养 避光，保持50%~70的湿度，25℃恒温培养。 4. 实验观察与管理 挑出污染菌种，比较不同食用菌的菌丝颜色、形态和密度。
实验四
一、实验目的
2 .接种
（1）菌种 表面消毒；
（2）将菌种切割成2×4×2mm的小块；
（3）将菌种接到斜面中心略偏试管底部处；
（4）1支试管种可接斜面30支左右。
3. 培养
避光，保持50%~70的湿度，25℃恒温培养。 4. 实验观察与管理 挑出污染菌种，比较不同食用菌的菌丝颜色、形态和密度。
实验三 食用菌原种制作技术（8学时）
食用菌一级菌种制作实验报告
食用菌一级菌种制作实验报告
实验目的：
食用菌栽培学是一门应用基础学科的学科，不仅要求掌握扎实的理论知识，还要结合生产实际来加深理解和体会，真正的实现学以致用，理论和实践相结合。
本次食用菌的实习旨在让我们更好的了解和学习食用菌栽培学的知识，熟悉湖北省食用菌产业发展情况，而且还提高了我们的动手能力，创新意识和创新能力，我们亲自加入生产食用菌的多个环节，培养我们吃苦耐劳、团队意识和沟通交流的品质。
通过此次的课程实习，进一步脱框我们的视野以及对食用菌产业的理解，增长对这产业美好前景的信心。
（二）实习任务
1、参加菌种制作的各项操作。
2、参加食用菌栽培的各项操作。
3、参加菇房和菇场栽培管理工作。
4、参观食用菌生产企业，参与食用菌市场行情调查。
二、实习时间
2012年10月28日至2012年11月4日。
三、实习单位及地点
华中农业大学食用菌菌种试验中心、武汉东西湖如意生鲜食品净菜配送公司（如意食用菌高科技公司）、湖北裕国菇业有限公司、长
久菌种厂、三里岗香菇基地、裕国菇业试验基地、裕国菇业生产线、三友食用菌研究开发有限公司、新洲许易产业园、天添食用菌科技产业。
四、试验内容
1华中农业大学黑木耳、香菇、平菇代料栽培生产实践
2、观看湖北菇菌产业发展三十年历史和香菇生产技术的视频
3、“中国香菇之乡”的随州三里岗以及新洲各工厂、公司参观学习
五、实习过程
具体工作时对集中食用菌的传统生产进行了解和实践；第二阶段是赶赴随州市以及新洲市的各大工厂公司进行参观学习；第三阶段是再次回到菌种试验中心进行平菇的最后装袋灭菌工作。
本次实习分为三个阶段，第一阶段主要是在菌种试验中心。
《食用菌生产技术》实训指导教材.doc
《食用菌生产技术》实训指导教材实训一食用菌形态结构观察一、目的要求观察食用菌菌丝体的生长状态，利用显微镜认识食用菌的营养体和繁殖体的微观结构，利用徒手切片观察食用菌子实体的微观结构，通过对食用菌子实体形态特征的观察，让学生们了解和熟悉各种食用菌子实体的类型和特征，并能根据子实体的外形进行分类。
二、实训准备1、材料平菇、香菇、双孢蘑菇、草菇、金针菇、木耳、银耳、猴头菇、灵芝、密环菌、羊肚菌、虫草、茯苓等食用菌子实体或菌核浸浸标本或干标本、鲜标本及部分食用菌的菌丝体，担孢子等。
2、仪器工具光学显微镜（100～600倍）、接种针、无菌水滴瓶、染色剂（石炭酸复红或美蓝等）、酒精灯、75%酒精瓶、火柴、载玻片、盖玻片、刀片、培养皿、绘图纸、铅笔等。
三、内容和方法步骤（一）菌丝体形态特征观察1、菌丝体宏观形态观察。
①观察平菇、草菇、金针菇、木耳、银耳及香灰菌、蘑菇、猴头、灵芝等食用菌的试管斜面菌种或PDA平板上生长的菌落，比较其气生菌丝的生长状态，并观察菌落表面是否产生无性孢子。
②观察菌丝体的特殊分化组织：蘑菇菌柄基部的菌丝束；密环菌的菌索；茯苓的菌核；虫草等子囊菌的子座。
2、菌丝体微观形态观察。
①菌丝水浸片的制作：取一载玻片，滴一滴无菌水于载片中央，用接种针挑取少量平菇菌丝于水滴中，用两根接种针将菌丝拔散。
盖上盖玻片，避免气泡产生。
②显微观察：将水浸片置于显微镜的载物台上，先用10倍的物镜观察菌丝的分支状态，然后转到40倍物镜下仔细观察菌丝的细胞结构等特征，并辩认有无菌丝锁状联合的痕迹。
（二）子实体形态特征观察1、子实体宏观形态观察。
仔细观察各种类型的食用菌子实体的外部形态特征，并比较各种子实体的主要区别，特别注意菌盖、菌柄、菌褶（或菌孔、菌刺）、菌环、菌托的特征，并对之进行比较、分类。
2、子实体微观形态观察。
①菌褶切片观察：取一片平菇菌褶置于左手，右手持刀片，横切菌褶若干薄片漂浮于培养皿的水中，用接种针先取最薄的一片制作水浸片，显微观察平菇担子及担孢子的形态特征。
食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。
母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。
要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。
母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。
制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。
食用菌的栽培实验
食用菌（平菇）的栽培实验1实验名称：食用菌（平菇）的培养2实验目的2.1了解食用菌的培养过程；2.2在实验过程中掌握培养基的配制方法；2.3学习从平菇子实体中分离平菇菌种。
3实验步骤3.1平菇母种培养基的制作（马铃薯综合培养基）称去皮的马铃薯200g，切成小块，放入大烧杯中，加1000ml蒸馏水，加热煮沸，煮马铃薯至熟而不烂（煮沸20min左右），后用四层纱布过滤，加水至1000ml，称取20g琼脂加入，加热至融化，称取磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，葡萄糖20g加入，搅拌均匀。
分装入30支试管，6个锥形瓶中。
试管10支一扎，棉塞处用报纸包好扎紧，每个锥形瓶都用报纸包好扎紧，放入灭菌器中灭菌（121℃，30min）。
灭菌完成后，取出试管和锥形瓶稍凉一下，未凝固前铺斜面。
待斜面凝固，将试管收起，放在无菌操作台中备用。
3.2母种的扩大培养将酒精灯、酒精棉球、镊子、打火机、接种针、活化后的菌种等接种所用的材料和器材放入无菌操作台内，紫外灭菌30min，关紫外灯后吹风10min后接种。
先用酒精棉球擦拭双手，点燃酒精灯，左手拿母种和铺好的斜面试管，右手拿接种针（先在灯上烧红，后晾凉）进行接种。
用接种针在母种试管中取培养基与菌丝接触面一小块，迅速放入铺好斜面的试管的斜面上，塞上棉塞，放在试管架上，再继续接完其他的斜面试管。
待所有的试管都接种完成后，取出试管放入25℃恒温培养箱中培养。
24小时后可看见所接的菌种向斜面周围生长，再过三四天，菌种可长满斜面。
取出几支长的好的菌种，用报纸包好，注明名称及时间，放入冰箱冷藏，以备下次接种。
3.3平菇原种培养料的制作（麦粒培养基）取200g小麦浸泡10-12小时，煮熟晾干后加辅料（CaCO3（石灰石）2g，CaO（生石灰）2g，糖2g），搅拌均匀，装入菌种瓶（1／２体积），用耐高温膜包好。
在高温121℃下灭菌90-120min。
石膏粉（Ca[SO4].2H2O）3.4原种的培养取出培养箱中长的旺盛的平菇斜面，与小麦菌种瓶放入接种台内，进行接种，将母种斜面划成4-5块，迅速将母种块移入菌种瓶中，使母种块上的培养基与瓶内斜面接触，包好菌种瓶，放入25℃恒温培养箱培养。
组织分离法制备母种
1.菌丝未萌发
• ①组织块太小； • ②烫伤严重； • ③培养条件，如温度不适宜。
2.有杂菌污染
① 培养基灭菌不彻底； ② 培养基成分适宜杂菌生长； ③ 环境、用具消毒不严格； ④ 菇体耳体消毒不严格； ⑤ 接种操作控制不当，要无菌操作。
常见的杂菌观察
• 常见的杂菌主要有细菌、放线菌；
青霉、黑曲霉
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
白灵菇：Pleurotus eryngii
白灵菇：Pleurotus eryngii
红菇：Russula lepida
子囊菌纲食用菌
羊肚菌
羊肚菌
Morchella esculenta
子囊菌纲食用菌
冬虫夏草
冬虫夏草
冬虫夏草的蛹、成虫、虫卵 冬虫夏草的蛹
冬虫夏草的虫卵
三、PDA培养基制作及灭菌
PDA培养基配方：
马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 水 pH 30 g 3 g 2.7-3 g 150 ml 自然
每组150ml。每人分装1支试管。 包扎。灭菌
灰树花
担子菌纲食用菌
长根菇
牛肝菌
担子菌纲食用菌
茶新菇
茶树菇
茶树菇 Agrocybe aegerita
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
食用菌组织分离法实验报告
食用菌组织分离法实验报告食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。
2. 培养基：PDA培养基斜面。
3. 仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。
三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2. 要等刀片冷却后再切取组织块。
六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的PDA培养杂菌没有菌落产生基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。
第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌无杂菌，也无目的菌落实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。
接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。
实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。
食用菌实验-培养基制作
食用菌实验-培养基制作第一篇：食用菌实验-培养基制作实验二母种培养基制作一、实验目的掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程，为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。
二、常用培养基配方1．马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。
2.PDA综合培养基去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3.0克，硫酸镁1.5克，维生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。
三、实验材料和用具天平、电炉，18×180毫米试管，止水夹。
纱布，棉塞，牛皮纸，皮筋，手套、菜板、刀、恒温箱，三角漏斗、支架（每组一套）。
手提式高压灭菌锅。
马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。
四、实验步骤与方法 1．PDA培养基的配制 2．装管、捆把 3．灭菌锅内加适量水→ 灭菌物品放内锅→加热→ 压力表0.05Pa 时放气→压力表1.15Pa(121-126℃)时计时30分钟。
4.摆斜面。
灭菌后将试管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板条上，使试管内斜面的长度为试管长度的3／5。
放置凝固后备用。
五、作业思考题1．制作PDA培养基过程中，为什么要用牛皮纸将整捆的棉塞部分封盖灭菌? 2．灭菌时，加热水沸后，在锅内压力升至0.5Pa 时，为什么要打开放气阀? 3．写出试管培养基制作的工艺流程。
4．消毒与灭菌是同一概念吗?为什么?实验三原种培养基制作原种即二级种，就是将试管中的母种，接入菌种瓶内，等菌丝长满后形成的菌种。
一、实验目的通过实验初步掌握原种培养基的配料、装瓶(袋)、灭菌、消毒、接种、培养等生产工艺流程。
并了解原种培养基的不同配方及不同的制作方法。
二、实验材料和用具天平，立式或卧式高压灭菌锅，菌种瓶或菌种袋(菌种瓶口径3厘米，容积750毫升)，塑料套环，塑料绳，擦布，锥形捣木。
称，大盆麦粒，麦麸，棉籽壳，不锈钢锅，石膏，碳酸钙，白糖，牛皮纸，皮筋，三、培养基配方1．木屑米糠培养基(适用于香菇、木耳、猴头菇、杨树菇等木腐生类食用菌)：木屑(锯木屑)78千克，米糠或麦麸20千克，石膏1千克，蔗糖(俗称白糖)1千克。
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
食用菌母种的制作培养
食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。
装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
食用菌母种的制作方法
食用菌母种的制作方法一、食用菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。
方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。
当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离主要采用组织分离法。
通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。
对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。
食用菌栽培实验
《食用菌栽培学》实验一斜面制作
一、实验材料：马铃薯300g，琼脂20g，
二、实验药品：葡萄糖20g，
三、实验工具：水果刀、试管40支、漏斗5、铁架台5、止水夹5、纱布三层、
报纸若干、胶皮管5、玻璃棒1、锅、电炉、天平、1000ML量筒、PH试纸、棉花塞（皮棉非脱脂棉）、皮筋或长绳若干、高压锅（手提式）、干净毛巾、培养皿2个
《食用菌栽培学》实验二母种接种
一、实验材料：实验一制作出的无污染的试管斜面、食用菌专业母种（平菇）、
二、实验药品：75%酒精棉球
三、实验工具：镊子5、棉花若干、接种针（接种锄）、酒精灯、火柴或火机、
超净工作台、恒温培养箱、冰箱
注：恒温培养一周左右待菌丝体长满斜面转入冰箱冷藏室内储存
《食用菌栽培学》实验三食用菌菌丝体观察
一、实验材料：由实验二转管的母种
二、实验工具：显微镜12台、酒精灯、接种针、蒸馏水、载玻片15、盖玻片
20
《食用菌栽培学》实验四食用菌栽培实验（出菇实验）一
一、实验材料：玉米芯6.8KG、棉籽壳1KG、麸皮2KG、石膏粉0.1KG、碳酸钙
0.1KG
二、实验工具：水桶、胶皮手套12、聚丙烯袋（15CM*15CM）、绳子若干、高
压锅、
《食用菌栽培学》实验四食用菌栽培实验（出菇实验）二
一、实验材料：由出菇实验一所得高压消毒的料袋、实验二制作的母种、
二、实验工具：无菌室、酒精灯、75%酒精棉球、透气的盖子（食用菌专用若
干），干净的房子用作培养。
定期进行观察，消过毒葡萄酒实验室的框子4个
《食用菌栽培学》实验四食用菌栽培实验（出菇实验）三
待料袋菌丝长满后一周左右打开袋口进行浇水、观察处菇情况。
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实验一食用菌母种制作、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管(18x180mm、手术刀、镊子、75%酉精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA 培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1) 熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200 克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1 000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000 毫升。
(2) 分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5 左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
(3、捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
( 4 、灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
(5 、摆斜面，培养基长度约为试管长度的1 /2 。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8 天，检查菌丝生长情况。
四、实验结果每人制作平菇母种一支。
记录母种菌丝的生长情况。
五、作业1. 食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？2. 组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作失败？实验二食用及药用菌原种制作技术目的要求：1、了解原种培养基的配制原理及过程；2、掌握玉米粒原种的制作方法。
重点与难点:重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种. 难点: 食用菌组织分离法制作菌种.教学方法与手段: 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。
实验内容:1、按比例计算、称取各组分；2、添加、混合均匀各组分；3、培养料水分、pH 调节、装袋；4、原种培养基灭菌；5、转接、培养原种。
6、原种质量检查主要仪器设备药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。
实验步骤一．原种培养基的制备1. 选定配方。
玉米97%，碳酸钙2%，石膏粉1%，PH6.5-7.0 。
2. 培养基配制。
选择无病虫害的的玉米粒，用清水冲洗干净，浸泡40 小时左右。
加水超过玉米粒表面，煮开锅后，小火再煮5-30 分钟，使玉米粒充分煮透（胀而不破，切开后无白心）。
用清水冲洗冷却，淋去谷粒表面水份。
加入碳酸钙和石膏粉，充分搅拌均匀备用。
3. 装瓶封口。
将配制好的培养基装入原种瓶中。
将玉米粒培养基装至低于瓶肩处。
做到培养基均匀一致，松紧适度，料面平整，擦净瓶口内外壁。
塞上棉塞，外面用一层牛皮纸包好。
4. 灭菌。
分装好的原种瓶在当天灭菌，避免培养基发霉变质。
采用高压蒸汽灭菌。
灭菌压力1.4-1.5Kg/cm 2。
灭菌时间为1.5-2 小时。
冷却至30 °C以下待用。
二．接种1. 超净工作台消毒灭菌。
将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具（酒精灯，接种铲等）放入接种场所，进行消毒灭菌。
2. 接种。
将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。
点燃酒精灯，用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒，特别是管口处，去下棉塞后，试管口在火焰上烤一下，然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲将母种斜面分成4-6 份，将其固定在接种架上，注意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内（管口离火焰1-2 厘米）。
然后左手持原种瓶，右手取下棉塞，瓶口在火焰上烤一下，用接种铲取一份母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处，棉塞过火后塞好，包上包头纸。
如此反复，每支母种可扩接原种4-6 瓶。
. r 、、、# .三．培养。
将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养，培养温度为25C。
定期检查杂菌发生情况，从培养3-5 天开始每天检查一次，当菌丝封住料面并向下深入1-2 厘米时，可改为每周检查一次，发现污染的瓶立即淘汰，并隔离污染源。
四．原种质量检查无论麦粒原种还是棉籽壳原种，接种后在25C左右培养20-40天，菌种即可长满瓶。
品质优良的原种，菌丝洁白、纯净、有食用菌特有的香味。
若出现黄、绿、黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道。
不能使用，应将其灭菌后远离培养场地处深埋。
作业1. 食用菌原种培养基主要有哪些？2. 制作原种过程中应该注意哪些问题？实验三食用及药用菌栽培种制作技术目的要求：1、了解栽培种培养基的配制原理及过程；2、理解好的栽培种培养基对生产的重要性；3、掌握水在配料中的作用；4、掌握栽培种制作技术。
重点与难点:重点: 栽培种培养基的配制原理及过程; 栽培种制作技术. 难点: 水份含量的掌握.教学方法与手段:本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教实验内容:1、按比例计算、称取各组分；2、添加、混合均匀各组分；3、培养料水分、pH 调节、装袋；4、栽培种培养基灭菌；5、转接、培养原种;6、栽培种质量检查.主要仪器设备药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、盆、聚丙烯塑料袋、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。
实验内容与方法一．培养基的制作1. 配方。
棉籽壳78%，麦麸20%，石膏1%。
糖1%（料：水=1：（1.2-1.3 ））。
2. 拌料。
根据制种需要，按各种营养成分的配比称量各种原料。
然后将棉籽壳和麦麸先混合一起。
石膏和蔗糖混溶在拌料的水中，搅拌均匀后，泼洒到棉籽壳上再搅拌均匀。
3. 测培养料含水量。
培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量合适，为60%-62%，若含水量不足，可再加少量的谁，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。
4. 装袋。
将拌好的培养料装入聚丙烯塑料袋中，边装边压实，一直装到塑料袋容积的3／5 左右。
5. 打孔。
装好培炎养料后，从袋中央用锥形木棒打一孔，孔深距袋底部2-3 厘米。
6. 封袋口。
将塑料颈圈或无棉塞盖体的环套在塑料袋口上，然后将袋口外翻，塞上棉塞或盖上无棉盖体的盖子。
棉塞的外面还要包一层牛皮纸，用线绳扎好。
擦净塑料袋外面所粘附的培养料。
二．灭菌由于栽培种数量大，小型灭菌锅不合适，应使用大型立式或高压蒸汽灭菌锅。
栽培种由于装量较多且较实，一般要求1.4-1.5Kg/cm 2灭菌1.5-2 小时。
灭菌结束后，培养料冷却至30°C以下待用。
三．接种和培养1. 接种。
将接种袋放入通过甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒的接种室或紫外灯灭菌的无菌操作台。
两人合作接种时，一人以无菌操作方法用接种铲或大镊子取一小块原种菌丝，另一人在酒精灯火焰旁打开栽培种袋口（袋口应倾斜在火焰旁，切勿直立），迅速将原种接到袋中，塞上棉塞或无棉盖体的盖子即可。
2. 培养。
接种完毕，将栽培袋搬到培养室培养，培养室的温度应该比这种食用菌菌丝的最适温度低2-3C。
四．栽培种质量检测栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时处理掉，不得与好的菌种袋放在一起。
经30-40 天的培养，菌丝长满菌袋后即可使用。
若菌袋内长出原基，说明菌种已老化，若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已污染，不可使用。
作业1. 菌种制作的关键技术是什么？2. 综述母种、原种、栽培种在生产上的作用。
实验四平菇栽培技术目的要求：1、了解平菇栽培的人工环境条件；2、了解生料栽培的基本方法；掌握平菇栽培过程及各生长期的管理要点。
3、重点与难点:重点: 生料栽培的基本方法; 平菇栽培过程及各生长期的管理难点: 平菇栽培过程及各生长期的管理.教学方法与手段:本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。
实验内容:1、培养料备料、装袋、灭菌；2、转接生产种；3、发菌管理；4、出菇管理；5、采收。
主要仪器设备药品材料：鸡腿菇栽培种、栽培料、接种铲、喷壶、灭菌锅、酒精灯、接种铲、盆、铁锨、聚丙烯塑料袋、塑料环、细棉绳、橡皮筋、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、脱脂棉。
内容与方法1. 配料。
棉籽壳99%，石膏1%，多菌灵0.1-0.2% ，培养料混合均匀后的含水量为60%-62%。
2. 拌料。
拌料时先称好棉籽壳，倒在已消毒好的水泥地面或桌面上，再把称好的多菌灵用水溶解，搅拌均匀，然后倒入棉籽壳中，边拌料边加水，直到均匀为止。
3. 测含水量。
培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量合适，为60%-62%，若含水量不足，可再加少量的谁，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。
4. 装袋接种。
采用宽25-30 厘米，长40-50 的聚乙烯塑料薄膜袋。
一端用透气塞封口，先装入一层已掰成蚕豆粒大小的栽培种，再装入一层厚约5 厘米的栽培料（边装边压实），再加一薄层栽培种，如此重复，直到快装满塑料袋时，最后在袋口放一层，加入一透气塞后将袋口扎紧，也可仅在塑料袋两端和中间部位放菌种。
袋口直接扎紧后打孔透气。
栽培种的用量一般为培养料的15%-20%。
5. 培养。
将接完种的菌袋运到培养室中平放在培养架上培养。
需要码放时，不要堆的太高。
培养室要求室内卫生，清洁，通风良好。
在较低的室温（15C 左右）条件下培养，能显著降低污染率。
袋筒培养一段时间，应进行翻袋。
目的在于让菌袋各部分发菌一致，并在发菌的同时挑出污染袋。
经30-40 天菌丝可长满全袋。
6. 出菇管理。
当菇筒内菌丝生长好后应立即搬到出菇室进行出菇。
出菇室要求清洁卫生，通风透光，保温保湿性能好。
出菇室的地面以水泥地面或砖面为好。
（1）原基形成期：光线和变温刺激有助于原基分化，此时菇房应该有散射光照射，菇房温度以10-15 C为宜。
菌袋在这样的条件下继续培养3-7天, 菌丝开始扭结形成原基（菌袋两端开始出现米粒状的纠结物）。
此时应该将菌袋两端透气塞拔掉，使袋筒通风换气，响室内空间喷雾状水，保持室内相对湿度80%-85%；（2）菇蕾形成期：原基得到空气和水份后生长很快，形成黄豆粒大小的菇蕾，这时应将应将袋筒两端多余的袋边卷起，使菇蕾两边的栽培料露出袋筒。