流式细胞仪操作规程-SOP
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式日常操作SOP
流式日常操作SOP标本处理1（kappa/lambda ckappa/clambda cIgM）育：加入2mlPBS，37°孵育5min，离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
重复两次。
标本处理2（CD61 CD41a CD42b CD9 CD36）洗：加入2mlPBS，离心1050rpm （1300-1500）5min，弃上清，混匀细胞，重复两次。
细胞计数1 取2%冰醋酸190ul冰醋酸和10ul血在塑料管中混匀。
取10ul在计数板上。
2 计数时数上不数下，数左不数右。
3 加血量=1000*5/细胞计数（平时最大加160ul血）。
胞膜表面标记操作1 加样本2 加入3-5ul不同散射光谱荧光素标记的抗体，加PBS 0.5ml,充分混匀，置室温避光15min。
3 充分混匀细胞。
每管细胞中加入溶血素（1溶血素：9注射用水）2ml，（适量加，若加入后比较红则多加点，若液体比较清凉则少加点）置室温，避光10min。
4 离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
5 加入PBS 2ml ，离心1050rpm （1300-1500）5min ，弃上清，加0.5ml PBS后混匀，上机检测。
（如不太干净则过滤一下后再加3-5滴PBS以后上机）。
胞浆标记操作：BD破膜剂（AB液）（适用：KI-67 CyclinD1 TdT MPO c CD3 bcl-2 ZAP-70 c CD68 c IgM）1 按上述方法加膜标记抗体，孵育15min。
2 加100ul破膜剂A，室温避光孵育5min。
3充分混匀细胞，每管细胞中加入1*溶血素2ml，置室温，避光10min，离心1050（1300-1500）rpm，弃上清。
混匀细胞。
4 加入50ul破膜剂B，胞浆抗体，室温避光孵育15min。
5 充分混匀细胞，加2ml PBS 混匀，离心1050rpm（1300-1500）5min，弃上清，加0.5mlPBS 后混匀，待上机。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪SOP
一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
流式细胞仪使用规程
流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。
2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。
3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。
如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。
4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。
5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。
5.1.1.2 打开流式细胞仪。
5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
5.1.1.4 打开电脑。
5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。
5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。
5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。
5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。
5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。
5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。
5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。
5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。
流式细胞仪操作规程
流式仪操作规程
1. 首次操作时务必在负责人的指导下进行。
2. 操作前需检查所有瓶中的液体，鞘液桶补满超纯水（2L），废液桶倒空，清洗液和消毒液不是空的。
3. 清洗液和消毒液配置方法：清洗液为1% BD FACS Cleaning solution(原液为10%，即稀释十倍使用)，消毒液为BD detergent solution concentrate。
4. 开机前，确保样品支架上放置的EP管内至少装500uL ddH2O。
5. 仪器启动期间，软件界面上仪器当前状态会显示黄色的灯，该过程中仪器会用鞘液冲洗液流管路，持续大约13分钟，直到显示绿灯表示仪器和软件连接完成。
6. 根据实验设计选择软件选项，进行上样。
7. 上样完毕后，用SIP程序清洗进样针，根据提示先上2ml 1% FACS Clean，再上2ml ddH2O。
8. 保证清洗液和消毒液的量，在进样针上放2ml ddH2O，轻触（不能超过3秒）仪器上电源键，仪器自动运行13min cleaning the fluidics程序后自动关机。
9. 清理桌面，写好仪器使用记录。
10.将房间卫生整顿好，垃圾带出实验室，负责人检查后方可离开。
流式细胞仪操作流程
流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。
本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。
一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。
处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。
2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。
3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。
二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。
2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。
3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。
调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。
三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。
根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。
2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。
3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。
选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。
4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。
5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。
四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。
2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。
3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。
4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。
5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。
流式细胞仪操作规范
流式细胞仪的操作规范1.CXP Cytometer：仪器操控软件，可与机器连线，收取List Mode Data，也可进行简单的Data分析。
2.CXP Analysis：离线分析软体,可进行较繁复的Data 分析,包含等高线图(Contour Plot)”、密度图(Density Plot)、岛屿图(Surface Plot)、透试图(Tomogram)、叠图(Overlay Plot)的绘制,多档案分析与批次分析。
一、基本开机步骤与软体主画面说明。
1. 依常规模式进入Window20000 系统。
2. 双点桌面上，即可启动机器并进入操作软体。
此时您可见到下面的画面：3.选取您自己的资料夹（请在Password 处输入密码），并按下Next 继续。
接著您能看到下面的画面：4.此时您能在左边的视窗选取您即将使用的Protocol，然后按下Finish 进入软体，或不选取任何Protocol，直接按下Finish 进入软体，您即可见到软体的工作区（workspace），如下图：工作区分成三部份：a.工具列（CXP Toolbars）:b.档案总管(Resource Explorer):利用滑鼠在做切换，让您能够看到您专属资料夹中的Worklists、Panels、Protocols、LMD Data和HST Data等档案。
若要开启档案总管中的资料时，只需利用滑鼠将这些档案直拖曳至软体的桌面上，便可打开各式档案或分析Data。
c. 工作清单编写区（Acquisition Manager）：利用工作清单工具列您可以在此处编写您即将要收集的样本内容，包括设定本次实验的染剂名称参数名、List ModeData存档的模式等等。
二、开关机开机前之准备：补充PBS（约8~9分满）和Clenz solution（约8~9分满），并倒去废液瓶中之液体。
开机：依一般程序开启您的电脑，点选桌面上的图示，即可进入软体。
流式细胞仪操作规程-SOP
WORD格式流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测3：HLA-B27测定4：CD55／CD59测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定WORD格式淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双/三色/四色直接免疫荧光法。
荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count即可得出绝对计数。
淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4；+抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8；+NK细胞：CD3-CDl6+56+等。
根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count组会自动得出绝对计数。
标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
采集部位静脉采血抗凝剂EDTA或肝素抗凝血要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。
若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
流式细胞仪安全操作及保养规程
流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。
然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。
为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。
2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。
2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。
在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。
2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。
注意声音警报器和信号灯的功效。
2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。
按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。
2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。
2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。
按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。
2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）⼀、开机程序：1.检查鞘液桶和废液桶。
确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续⼯作3个⼩时左右）、盖紧⿊盖、管道畅通、废液桶有⾜够空间容纳本批标本排弃的废液。
如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中⽓压。
2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。
3.⽓压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中⽓泡。
⼆、运⾏FACSComp软件、检查仪器状况1.制备三⾊标准微球样本。
⼀般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加⼊1滴质控⼩微球，也可以根据实际情况调节浓度。
2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。
选择所需校正内容，如果使⽤的微球是新⼀批产品要输⼊微球的批号。
3.在软件界⾯左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。
4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。
功能键设置在“RUN”。
5.仪器⾃动检查，并做电压、补偿等设置。
6.FACSComp软件运⾏完毕，显⽰结果通过测试。
7.做Set up。
8.打印校正结果，退出FACSComp程序。
备注：在质控过程中，如果提⽰收集细胞速度慢可以提⾼细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，⼀定要⽤“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。
在使⽤仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。
三、样品分析软件：CellQuest Pro软件，选择“联机”。
1.（2）对实验样本进⾏命名；（3）对实验通道进⾏预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。
备注：如果界⾯被关闭，重新调出步骤：2.调出质控模板。
3.画图选择画图⼯具（⼀般选择散点图），Inspect界⾯会⾃动弹出，对⼏个常⽤选项进⾏设定：将散点图选中（⽤⿏标点击散点图边框才能够选中图形），将更改横纵坐备注：第⼀个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC。
流式细胞仪的日常操作规范
流式细胞仪的日常操作规范
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流式细胞仪的日常操作规范
一、仪器开/关机程序
1、开机程序
检查仪器鞘液桶和废液桶。
打开流式细胞仪。
气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
打开电脑。
等待机器预热5—10分钟后可开始实验。
2、关机程序
用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。
将样品换成蒸馏水重复1-2步。
放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
选择Standby模式10分钟。
关闭电脑，再关掉仪器。
二、维护保养
1、每日保养
用蒸馏水作样品，将样品支架支撑置于旁路，以外管吸入2ml
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml.
选择Standby模式10分钟。
关闭电脑，再关掉仪器。
2、每月保养
将10%漂白剂装入鞘液桶。
旁路鞘液过滤器,以防损害。
将盛有3ml10%漂白剂的试管置于样品支架上,以HI RUN 20-30分钟。
将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤。
BD FACSCalibur 流式细胞仪 操作规程
FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程1.开机程序开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源；开启计算机，桌面不显示跳动的提示，认为细胞仪和电脑连接成功；确认鞘液筒有2/3满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的（所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠）；将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起；PRIME排除液流过滤器中的气泡；HIGH RUN 鞘液或超纯水两分钟；开始分析样品。
2.上机操作确保流式细胞仪处于“Run，Hi”状态；上样前，确认样本细胞是否已过滤，去除检品中的细胞团块，以防止管路堵塞；将样本的试剂管在旋涡器上正立混匀5秒；支持架置于旁位，上样，支持架置于正位；点击软件右下方“Acquire”；分析完成后，换样，重复操作。
3.关机程序清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留；取3ml浓度为0.5%-1%的次氯酸钠（洗液）上样，将样品支持架置于旁位，以外管吸去约1ml，将样品支持架置于中位，再HIGH RUN 10分钟（内管吸去1-2ml）；取 3ml ddH2O 于上样针，将样品支持架置于旁位，用外管吸取1-2ml液体将样品支持架置于正位，按RUN HI，时间需长于5分钟，如8-10分钟；最后留约 1ml ddH2O 在试管中，置于上样位；按Standby以冷却激光，五分钟后关闭细胞仪（务必等五分钟后再FACSCalibur 电源，以延长激光光源寿命。
）；倒掉废液，将气压阀放在减压位置，将鞘流液筒充填至2/3满；确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据已储存备份，关程序，关闭苹果计算机；填写使用记录。
4.日常维护方法标本检测结束后都应清洗机器。
关闭仪器之前，必须清洁进样针，及进样针与套管间的区域。
做好月保养工作，进行系统管道清洗，每月至少一次。
每月至少一次质控，通过标准微球来监测仪器的工作状态定期对设备的各种功能进行检查。
将清洗以及检查、维护记录在案。
使用注意事项该仪器仅限仪器管理人员和通过仪器操作培训的人员操作；样品务必过滤后上机；使用完毕后及时清洗管路。
仪器操作规程-BD流式细胞仪基本上机操作流程操作注意事项及...
仪器操作规程-BD流式细胞仪基本上机操作流程操作注意事项及...仪器操作规程-BD 流式细胞仪（基本上机操作流程、操作注意事项及样品要求）一、标准操作规程开机程序：z开启细胞仪电源。
z开启计算机。
z确认鞘流液筒有八分满的FACS Flow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。
z将废液倒掉，并在废液筒中加入200 ml 家用漂白水(废液筒容量为4L)。
z将减压阀方向调在加压（Pressurize）位置。
z排除液流管路与过滤器中的气泡。
z取下样品管，执行 PRIME 功能两次。
z使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。
z可开始分析样品。
关机程序：z将样品支持架左移，样品管中加入3 ml 10%次氯酸钠，让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。
z将样品支持架回正，按 HI RUN，清洗管路5分钟。
z按 Standby，取下样品管，执行 PRIME功能两次。
z样品管中加入 3 ml 超纯水，重复上述步骤1-3。
z注意最后只留约1 ml 超纯水在试管中。
z倒掉废液，并在废液桶中加入200 ml漂白水。
z按 STANDBY 10分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪。
.z退出软件“File”?“Quit”(如有对话选项，选择“Don‘t save”)。
确认退出计算机中所有BD 应用软件，所有数据数据已储存备份。
z关闭计算机。
“Special”?“Shutdown”。
CELLQuest 软件的简要操作步骤Acquisition获取数据1.打开获取模板（ACQ文件）制作新模板：选择点图或直方图工具，在窗口拖出大小合适的方框，出现点图或直方图对话框，选择：Acquisition获取X Parameter横轴参数：如FSCY Parameter纵轴参数：如SSCGate设门：如G1=R1OK-出现相应的点图或直方图图形设置完毕，选择SA VE AS，保存为ACQ文件2.联机Acquire-Connect to cytometer，出现Acquisition Control窗口3.打开获取条件窗口，调出实验获取条件（Instrument Setting）Cytometer-Detectors/V oltage，Threshold，CompensationCytometer- Instrument Setting-Open打开实验获取条件-Set-Done实验获取条件的调整：Acquisition Control-5Setup-上样-Acquire-进行实验获取条件的调整1)F SC、SSC电压2)FSC阈值（Threshold）：减少碎片3)设门：FSC/SSC点图设门（R1）；荧光（FL）点图（如FL1/FL2）或直方图（如FL1）取门G1=R1（选中图形-Plot-Format Plot-Gate：G1=R1）4)阴性对照管，调整荧光电压（FL1、FL2、FL3、FL4 V oltage），阴性群体在左下角，确定十字位置5)多色实验的补偿管，调整荧光间补偿（Compensation）6)Cytometer- Instrument Setting-Save保存实验获取条件（InstrSet）-Done4.数据获取前的设定Acquire-Acquisition & Storage-设定获取细胞数（10000-All）-OKAcquire-Parameter Discription对话框选择：Folder设定存储数据文件的文件夹File设定数据文件的名字：文件前缀（Prefix）-自定义；文件后缀（Surfix）-管号5.顺序上样，获取数据文件：Acquisition Control- Setup-上样-Acquire-仪器获取足够细胞后，自动保存数据文件（data file）Analysis数据分析1.做FSC/SSC点图，圈细胞R1选择点图工具，在窗口拖出大小合适的方框，出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择第一管数据文件X Parameter横轴参数-FSCY Parameter纵轴参数-SSCGate设门-No GateOK-出现FSC/SSC点图-选择设门工具，圈细胞R12.做阴性对照管门内细胞的FL1/FL2点图，设十字，区分阴性和阳性界限选择点图，在窗口拖出大小合适的方框，出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择第一管数据文件（阴性对照管）X Parameter横轴参数-FL1Y Parameter纵轴参数-FL2Gate设门-G1=R1OK-出现FL1/FL2点图-选择十字工具-沿阴性群体设十字3.做各实验管门内细胞的FL1/FL2点图，拷贝阴性对照管的十字选择点图，在窗口拖出大小合适的方框，出现点图对话框，选择：Analysis分析Select File选择实验管数据文件X Parameter横轴参数-FL1Y Parameter纵轴参数-FL2Gate设门-G1=R1OK-出现FL1/FL2点图-点中阴性对照管FL1/FL2点图上的十字-Edit-Copy-点中实验管FL1/FL2点图-Edit-Paste4.做各实验管FL1/FL2点图的十字统计：点中实验管FL1/FL2点图-Stat-Quadrant Stat-出现统计结果-点中统计结果框-Stat-Edit Quadrant Stat-选择输出结果（如Percent of gated门内细胞阳性百分率）5.选择文字工具（A），在报告上添加文字说明，报告实验结果6.Save As保存分析结果（ANA文件），Print打印分析结果二、送样要求样品不能有肉眼可见的团块或絮状物，如果有团块需要经过200目纱网过滤方可上机。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。
排出过滤器内的气泡。
4、如果需要打印，打开打印机电源。
5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。
从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。
3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。
4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。
三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。
2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。
BD FACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1. 每日开机程序1.1 在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2. 检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。
3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。
3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。
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流式细胞仪操作规程目录
1:淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测
3：HLA—B27测定
4:CＤ55/CＤ59测定
5：干细胞检测与绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN－γ/IL—4测定８:细胞周期分析
９:活化血小板检测
10:血小板抗体测定
11:红细胞抗体测定
１2:粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
（流式细胞仪）
医院检验科
操作规程文件号:
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期: 年月日
复审人:
规程编写者:
审批者：
批准日期：年月日文件分发部门与／或个人
院档案室保管者:
检验科主任:
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Proｔocol）1、选参数
4色点击
点击
3色
点击
（命名，点击savｅ) 2、画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count得浓度
选中cell/ul即可
方法
流式细胞仪(ＢｅckmaｎCouｌter，贝克曼库尔特）
原理：
双／三色直接免疫荧光法.荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤（与固定）等步骤后,在流式细胞仪上进行分析，从而得到相应各亚群得百分数.活化淋巴细胞表面抗原为CD3+/C Ｄ25＋与CD3+/HLA—DR＋。
CD3+／CＤ45RO＋就是记忆型T细胞.CD3+/ＣD45R Ａ＋就是纯真型T细胞.
HLA—B２７测定
点击
点击
键入文件名，点击Saｖe 2、画图
结果
1、positive (＋)
X-Ｍean=１7、1
2、nｅgａtive(—）
Ｘ—Meaｎ=1、2X－Ｍeａn=5、８
CD55／CD59测定
方案（Pｒotocｏｌ)（同HLＡ-B2７)
结果
1、RBC：ｎｏrmaｌ
２、RBC：abnoｒmal
３、WＢC
干细胞检测与绝对计数
方案(Pｒoｔocｏl）同淋巴细胞亚群检测结果(Rｅsuｌt）
白血病免疫分型测定
正常参考值
Ｔhl（IFN－γ):17、3９±5、５２％ Th２（ＩL－4)：１、50±0、44％
ThO :0、51±０、26％
临床意义
淋巴细胞均分泌多种细胞因子:Thl细胞主要分泌IL－2,IL－１２,IFN—γ与TNF－b/a等，Tｈ2细胞主要分泌IＬ—4。
ＩL－5.IＬ-6，IFN-γ为Ｔhl最特异分泌得细胞因子，IL—４为Th２最特异分泌得细胞因子,所以可根据分泌得细胞因子来区分Ｔhl与Ｔh2。
Thl为IＦＮ-γ+，Th2为ＩＬ—４+.静息状态(人得正常生理状态、即未受到任何刺激下Ｔh0分化为Thl与Th2得能力非常弱，在外周血中仅含有极少量得Ｔｈｌ与Th２细胞,这时我们所能检测得胞内得I ＦN-γ与IL－4也微乎其微。
当Th细胞受到外界因素，如刺激素、病原体等刺激,其中Th0即会向Thl或Th2大量分化,此时我们检测到得IＦＮ-γ与IL-4也较多。
本实验得检测实际上就是检测Tｈ细胞对刺激素刺激得反应能力。
方案(Proｔocol）
细胞周期分析
方案(Proｔocｏｌ)
1、选参数
选择Cyｔometer Control点击Pａrａmetｅｒs后
2、画图
结果（Ｒesuｌt）
操作：
富集血小板法:
1）800r/min*１5ｍｉn，取上清,
２)加4－5ml鞘液,２000r/min＊3mｉｎ，弃上清,重复一次。
3) 分别向试管中加入准备好得10u1含血小板得PBＳ（血小板得量约为10６)
（血小板若在正常范围，稀释到原量直接取10ｕ1。
）。
4) 分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗(设对照)
５）混匀，避光，室温孵育2０-30分钟
6）洗或不洗，上机测样
全血法：
1）加4—5ｍl鞘液,150０ｒ/miｎ*1５miｎ，弃上清,后同上3）－６）
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV〈２％
参考值
ＩgA〈２、98% IgG<３、04%
IgＭ<３、0％ＩｇＤ<2、91％
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜（IＴP)诊断、治疗、预后估计得重要指标，在IT Ｐ、胶原性疾病时升高.
方案（Pｒotocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
操作：
１）分别向试管中加入混匀得1００u１抗凝血（1：200稀释后）。
２) 按照要求,分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗（设对照）3)混匀，避光,室温孵育20－30分钟
4）上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2%
参考值
IgA<2、７８％ IgG<2、98%
IgM<2、52％ IgD<2、8８％
临床意义
自身溶血性贫血得分型诊断
方案（Proｔocoｌ)
方法
流式细胞仪（ＢeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
操作:
1）溶血:a、 OpｔiＬyse C（按说明书步骤溶血)
b、使用CＯULTER Q—PREP制备系统
开机－-－显示RＥADY灯亮——-选择３5SEＣ灯亮—－—开门—
——放入试管关门－—－自动进行溶血-—-显示RＥADY灯亮—
--开门-——取出试管—－-再进行下一个样品测定。
（＊溶血前确认A/B／C管路充满并能打出液体）
2）分别向试管中加入经溶血处理得样本１０0ｕ1。
3）分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗(设对照)
4)混匀，避光，室温孵育20－30分钟,洗涤离心
5)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复ＣV<2％
参考值
ＩgA＜2、68% ＩgG<2、６６%
IｇＭ<2、４9％ＩｇD〈3、4%
临床意义
白细胞减少症得分型诊断，大多数白细胞减少症患者抗体为阳性
方案（Protｏcoｌ）。