乙肝病毒感染的检测手段和诊断指标
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+引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒，
也称丹氏颗粒。 +我国的乙肝病毒感染率约60%-70%； 乙肝表面抗原携带率约占总人口的 7.18%。
▪ 免疫学方法
a) 酶免疫法（ELISA） b) 时间分辨荧光分析技术（TRFIA）
c) 胶体金法
▪ 分子生物学方法
a) HBV-DNA法（PCR）
b) bDNA法
•
•
Leabharlann Baidu
优点：检测速度相对较快，在取得血清的情况下，一般 情况下在十分钟之内就可以对结果进行判读。 缺点：只能对乙肝病毒实施定性检测，准确率与酶联免 疫吸附试验比较相对低，且对于弱阳性的表现度相对较 差，造成弱阳性标本的漏读和误读的可能性相对较大， 性价比跟准确度方面都要略逊于ELISA。
HVB-DNA法（PCR）
+意义：目标物不被扩增,但检测信号被放大,从而提高了灵敏
度。
【1】胡晓丹,目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究[J].国际病 毒学杂志,2015,Vol.22,supplement.142-143. 【2】王健,闵福援,乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义[J]. 中华检验医学杂志，2005，Vol.28, No.1.113-115. 【3】张宝华,黄婷,乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析[J].现代检验 医学杂志 ,2010, Vol.7, No.4.69-71. 【4】王家杰,何庆明,刘佳文,李宝玲,李金红,乙型肝炎病毒标志物定 量检测方法的评价[J].国际检验医学杂志 ,2015, Vol.3, No.1.123124. 【5】魏来,乙型肝炎与丙型肝炎病毒感染临床检测的进展[J]. 2015, Vol.28, No.6.657-659.
•目的：对乙肝血清标志物进行定性的分析 •优点：简单、快速、稳定 •缺点：敏感度相对较低；出现钩状效应（前带/后 带）和受到交叉污染的可能性较大；不能够对乙肝 病毒标志物实施动态观察；对低水平HBV感染标志 物的漏检率相对较高。
•示踪剂：镧系元素 •流程： 1. 具有双功能基团的镧系元素对抗原或抗体进行标记 2. 通过时间延迟将非特异性的荧光去除 3. 发生特异性结合时，抗原抗体复合物在可以增强液中发 生解离，在特定的激发光的激发作用下发出一种特定波 长的荧光，在固定的时间对特异性荧光进行检测即可 •意义：适用于急诊或手术前对HBV病毒进行定性检查，其主 要优点在于检测速度较快、操作简单方便，对操作技术和检 测环境的要求相对较低。
---Thanks---
+传统PCR
+PCR-ELISA
+实时定量PCR
bDNA法（branched DNA）
+原理：探针杂交 +方法：bDNA是人工合成的侧链DNA片段，每个侧链上都可以
带标记物。在用于检测的微孔板上包被有一套人工合成的 HBV-DNA特异性核苷酸捕获探针，当HBV-DNA从细胞中释放 出来时，被板上的捕获探针所捕获。另一套靶向延伸探针既 能与捕获的HBV-DNA杂交，又能与预放大探针杂交。随后， 放大探针与预放大探针杂交，形成bDNA复合物。标记有多个 碱性磷酸酶的探针固定到该复合物上，与发光底物共同孵育， 记录发光强度，并根据标准曲线求得HBV-DNA浓度。
•胶体金：由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、 枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并 由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水 胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态。 •原理：胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的 正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所 以不影响蛋白质的生物特性。 •类型：免疫胶体金光镜染色法 免疫胶体金电镜染色法 胶体金免疫层析法 等
也称丹氏颗粒。 +我国的乙肝病毒感染率约60%-70%； 乙肝表面抗原携带率约占总人口的 7.18%。
▪ 免疫学方法
a) 酶免疫法（ELISA） b) 时间分辨荧光分析技术（TRFIA）
c) 胶体金法
▪ 分子生物学方法
a) HBV-DNA法（PCR）
b) bDNA法
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Leabharlann Baidu
优点：检测速度相对较快，在取得血清的情况下，一般 情况下在十分钟之内就可以对结果进行判读。 缺点：只能对乙肝病毒实施定性检测，准确率与酶联免 疫吸附试验比较相对低，且对于弱阳性的表现度相对较 差，造成弱阳性标本的漏读和误读的可能性相对较大， 性价比跟准确度方面都要略逊于ELISA。
HVB-DNA法（PCR）
+意义：目标物不被扩增,但检测信号被放大,从而提高了灵敏
度。
【1】胡晓丹,目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究[J].国际病 毒学杂志,2015,Vol.22,supplement.142-143. 【2】王健,闵福援,乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义[J]. 中华检验医学杂志，2005，Vol.28, No.1.113-115. 【3】张宝华,黄婷,乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析[J].现代检验 医学杂志 ,2010, Vol.7, No.4.69-71. 【4】王家杰,何庆明,刘佳文,李宝玲,李金红,乙型肝炎病毒标志物定 量检测方法的评价[J].国际检验医学杂志 ,2015, Vol.3, No.1.123124. 【5】魏来,乙型肝炎与丙型肝炎病毒感染临床检测的进展[J]. 2015, Vol.28, No.6.657-659.
•目的：对乙肝血清标志物进行定性的分析 •优点：简单、快速、稳定 •缺点：敏感度相对较低；出现钩状效应（前带/后 带）和受到交叉污染的可能性较大；不能够对乙肝 病毒标志物实施动态观察；对低水平HBV感染标志 物的漏检率相对较高。
•示踪剂：镧系元素 •流程： 1. 具有双功能基团的镧系元素对抗原或抗体进行标记 2. 通过时间延迟将非特异性的荧光去除 3. 发生特异性结合时，抗原抗体复合物在可以增强液中发 生解离，在特定的激发光的激发作用下发出一种特定波 长的荧光，在固定的时间对特异性荧光进行检测即可 •意义：适用于急诊或手术前对HBV病毒进行定性检查，其主 要优点在于检测速度较快、操作简单方便，对操作技术和检 测环境的要求相对较低。
---Thanks---
+传统PCR
+PCR-ELISA
+实时定量PCR
bDNA法（branched DNA）
+原理：探针杂交 +方法：bDNA是人工合成的侧链DNA片段，每个侧链上都可以
带标记物。在用于检测的微孔板上包被有一套人工合成的 HBV-DNA特异性核苷酸捕获探针，当HBV-DNA从细胞中释放 出来时，被板上的捕获探针所捕获。另一套靶向延伸探针既 能与捕获的HBV-DNA杂交，又能与预放大探针杂交。随后， 放大探针与预放大探针杂交，形成bDNA复合物。标记有多个 碱性磷酸酶的探针固定到该复合物上，与发光底物共同孵育， 记录发光强度，并根据标准曲线求得HBV-DNA浓度。
•胶体金：由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、 枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并 由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水 胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态。 •原理：胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的 正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所 以不影响蛋白质的生物特性。 •类型：免疫胶体金光镜染色法 免疫胶体金电镜染色法 胶体金免疫层析法 等