肝素钠效价检测方法

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肝素钠含量检测操作规程

肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。

2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。

3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。

5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。

特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。

5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。

5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。

5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。

5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。

加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。

64-0015 肝素钠抗FIIa效价检测EP方法与USP方法对比验证方案0000

G：美国标准品质量g；
365：美国标准品浓度USP U/ml。
6.4.1.3.用滴管加入质量为W的新鲜放冷的注射用水到50ml比色管中，盖紧瓶塞轻摇混合，待全部溶解混匀后，按1ml/支的装量，分装于2ml的洁净安瓿中，火焰封口；放入冰箱内2~8℃下保存3个月，使用时放至室温。
6.4.1.4.配制/分装记录填写附件3。
8.00
7.65
总体积（ml）
10.00
10.00
10.00
6.5.2.1.7.样品检测
取12支试管，标记为S1、S2、S3、S1、S2、S3、T1、T2、T3、T1、T2、T3每个浓度做2平行管。做将试管置于冰水浴中，用100-1000ul可调式微量移液器分别加入绵羊血浆1.0ml和相应浓度的标准品溶液、样品溶液1.0ml，混匀，避免产生气泡。将试管按S1、S2、S3、T1、T2、T3的顺序放入恒温水浴箱中，37℃下恒温水浴15分钟；向每支试管中加入1.0ml脑磷脂溶液，37℃下恒温水浴2分钟两分钟后，加入3.7g/L (w/v)氯化钙溶液1.0ml，混匀后以秒计时，记录绵羊血浆凝固所用时间。
质量控制部
刘家全
会审批准签名表
姓名
部门/职务
签名
日期
许万玲
质量控制部
生测Ⅰ组检验员
钱欣
质量保证部经理
李坦
质量总监
注：参加会审的人员：
1.海普瑞公司验证委员会的成员；
2.与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。
1.
1.1.对肝素钠抗FⅡa效价检测一般有两种方法：
1.1.1.按照《美国药典》（现行版）中“肝素钠专论”提供的方法，以USP的标准品为基准标准品，其检测结果的单位用USP U/mg表示；

64-0019 肝素钠粗品原料抗FIIa效价取样方法验证报告0000

文件使用类型该报告制定参与人：该报告存放到以下部门办公室：会审批准签名表注：参加会审的人员：1. 海普瑞公司验证委员会的成员；2. 与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。

目录1. 目的 (4)2. 范围 (4)3. 参考 (4)4. 验证内容 (4)5. 结论 (9)1. 目的1.1. 海普瑞公司质量控制部对各办事处交来的肝素钠粗品原料进行抗FIIa效价复测时，样品的取样方法有两种：一种是从办事处取过的样品袋中直接抽取。

一种是按照办事处的取样方法重新取样。

1.2. 为了确认两种取样方法得到的样品，其检测结果不存在显著性差异，我们用同一种检测方法对两种取样方法得到的样品进行检测，并对检测结果进行比较确认。

1.3. 本文件为两种取样方法结果的比较确认提供了可执行的程序。

2. 范围被验证的方法适用于肝素钠粗品原料抗FIIa效价复测样品的取样过程。

3. 参考《美国药典》（27版P905）SOP 20-1005《肝素钠粗品取样标准操作规程》SOP 20-1010《肝素钠粗品复检取样标准操作规程》SOP 51-0011《电热恒温水箱使用标准操作规程》SOP 51-1002《一般溶液配制标准操作规程》SOP 54-0010《肝素钠抗FIIa效价检测预实验标准操作规程》SOP 54-0011《肝素钠抗FIIa效价检测标准操作规程》SOP 60-0002《公司验证制度》4. 验证内容待验证的取样方法从六个办事处各取10批粗品原料，对每一批样品采用以下两种方法取样直接从每批原料的原包装袋中抽取原样：颗粒状颗粒状或块状粗品的取样方式：每批粗品的取样区域分为该包装袋的正反两面，根据粗品重量，每面从包装开口处至袋尾设2~3条取样平行线，每条平行线上取样点不少于2个，每批重量在1 kg以下的粗品，正反两面从包装开口处至袋尾各取两条平行线，每条平行线取两个点，共取八个取样点，用长柄取样勺分别从八个取样点取出粗品至粉碎机中，要做到每勺份量大致一样。

肝素钠的检测方法

肝素钠的检测方法德晟肝素钠检测方法如下：一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。

F=标品微升数*预估效价/样品微升数1.1试剂：1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）28IU/mg肝素钠标准品30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。

40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。

58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。

1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。

2.1待测品配制：M=20/样品预估效价（g）称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。

2.2测定：标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。

待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。

二．PH值精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。

肝素钠测定数据以及标准曲线

肝素钠的提取与检测摘要本实验主要是对肝素钠提取工艺的研究。

对国内外肝素钠的提取和纯化方法进行研究和分析，建立以牛内脏（肝、肺、心）为原料，采用盐解、离子交换的方式与乙醇沉淀相结合提取肝素钠。

利用天青A染色法检测肝素钠的效价，测定波长是505nm，与标准曲线对比可得到样品中肝素钠的效价。

利用浓硫酸氧化法，在波长为298nm处的吸光度来确定肝素钠的浓度。

利用双缩脲法，在波长为540nm处的吸光度来确定蛋白质的含量。

试验测得肝素钠的效价平均值为139.483U/mg，肝素钠的浓度平均值为200.8752mg/kg，去除蛋白质效果良好，均在99%以上。

关键词：肝素钠，盐解，树脂，天青A，纯化，蛋白质1.1研究背景和意义1.1.1研究背景肝素钠又称肝素，是重要的生物药品，作为天然的抗凝血物质而受到世界各国的重视。

我国是世界上肝素钠主要出口国之一，但是出口产品以低效价的粗品肝素为主。

肝素广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。

肝素在体内多以与蛋白质结合以糖蛋白复合物的形式存在[1]。

这种复合物没有抗凝血活性，但在去除蛋白质后，这种活性逐渐表现出来。

肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。

中国具有丰富的畜产品副产物资源，但我国生产的肝素产品效价低，提取率低的问题很突出，这种情况下，只有提出肝素提取纯化新工艺，才能提高畜产品加工副产物的附加值，拓宽利用领域，增加国民收入，提高中国在国际上的地位。

1.1.2研究意义肝素主要分布于哺乳动物的肺、肝、小肠粘膜细胞内。

目前，国内外制取肝素的原料多以猪小肠粘膜、牛肺、猪肺为主，在提取工艺中都必须经过肝素蛋白质复合物的提取、肝素蛋白质复合物的分解和粗品肝素的精制三个过程。

国内每年猪牛屠宰量极大，副产物产量极高，但是目前利用率却很低。

1 肝素钠及其制剂效价测定方法的改进

（ｉｇｕＩｓｔｅｏｒｇＣｎｒ，Ｎｎ１０８ｈｎ）Ｊｎｓｔｕｆｒｕｏｔｌａｇ２００，ＣｉａｎｉｔＤｏａ
Ａｂｓｒｃ：ｒｏｅｔａｔＰｕｐｓＴｏｄｖｌｐａｍｅｈｄｆｒｔｅｐｔｎｙｄｔｒｎｔｏｆｈｐｒｎｓｄｕｗｉｈｅｌｓｅｅｏｔｏｏｈｏｅｃｅｅｍｉａｉｎｏｅａｉｏｉｍｔｓｅｐｐａ — ｈ
３２羊血浆法和兔全血法测定结果的比较．肝素钠（号：５２９用羊血浆法和兔全血法批０１１）
多次测定效价，进行比较，果见表１结。经检验，Ｐ
＞０，明两种方法结果无显著性差异。０．５表
３１精密度试验．
取３批供试品溶液（号：５２９０１２，批０１１，５２００１２）各测定５次，果分别为１７６１３９１６９５２１，结７．，７．，７．ｕｍ，Ｓ分别为０６％，．４，．７，小于／ＬＲＤ．９０４％０２％均
对３个厂家的９肝素钠原料、批６批注射液用兔全血法与羊血浆法作比对试验，结果见表２和表３。
表２两种效价测定方法测定９肝素钠的结果比较批
因素多，此重现性较差。国内曾有采用绵羊血浆、因
原料（号：５２９０１２，５２１，批０１１，５２００１２）山东东营天东生物化学制药有限公司；素钠注射液（号：肝批

肝素钠软膏剂的制备与抗IIa因子效价测定

肝素钠软膏剂的制备与抗IIa因子效价测定摘要：目的：制备肝素钠软膏剂并建立制剂质量控制方法。

方法：根据基质处方，采用后加乳化剂并搅拌的方法制备软膏剂基质，将药液加入基质中搅拌均匀即可制得软膏剂。

用生色底物法分别测定原料药和制剂中肝素钠的抗IIa因子的效价。

结果：所制得的软膏剂外观与性状符合制剂要求，软膏剂中肝素钠含量为311.15IU/g，为标示量的97.23%。

结论：本文肝素钠软膏剂的制备方法可行，质量控制方法客观准确，适合实验室与医院药房少量制备肝素钠外用剂型。

关键词：肝素钠软膏剂生色底物法抗IIa因子效价肝素钠系从猪或牛的肠粘膜提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，具有延长凝血时间的作用。

研究表明，肝素钠除了具有抗凝活性之外，还具有抗炎、抗过敏和抗补体等药理活性[1]。

软膏剂是外用法给药的剂型之一，通过皮肤、孔窍、经络及病变局部等部位治疗疾病，避免了胃肠道的破坏与肝首过效应，减少血药浓度峰谷变化，已成为克服药物副作用的有效用药途径之一。

2005年版中国药典用兔血浆法，美国药典USP30版用羊血浆法测肝素钠效价的生物测定法。

中国药典2020版、美国药典USP37版收载了生色底物法测定肝素钠的效价。

血浆法由于不同批号的血浆所得实验结果有可能不同，因此肝素的效价测定也应采用抗IIa因子的发色底物的分光光度法。

本文拟制备肝素钠软膏剂，并用生色底物法测定原料药和制剂中的肝素钠抗IIa因子效价，以对制剂进行质量控制。

1 试剂与仪器UV2550/UV2700 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；肝素钠原料药系本实验室自制，抗IIa因子效价标示的肝素钠标准品购自惠兴生化试剂有限公司（9.5mg，2144IU）。

抗凝血酶ATⅢ(Chromogenix，10IU/瓶)，发色底物S-2238(Chromogenix, 25mg)，Ⅱa因子(中国食品药品检定研究院，840IU/瓶)，三羟甲基氨基甲烷与聚乙二醇6000 ( 国药集团化学试剂有限公司)。

肝素钠及其制剂效价测定方法的改进

5
6
7
8
9
10
x ±s
羊血浆法 176 178 177 179 177 178 177 177 178 178 177. 7 ±0. 7
兔全血法 175 178 177 177 177 180 178 176 177 176 177. 2 ±1. 4
对 3 个厂家的 9 批肝素钠原料、6 批注射液用兔
全血法与羊血浆法作比对试验 ,结果见表 2 和表 3。
表 2 两种效价测定方法测定 9 批肝素钠的结果比较 Tab 2 Results of potency determination for nine batches of heparin
sodium by different methods
批号
取冷冻贮藏的绵羊血浆 ,置于不超过 37 ℃的水浴融化 ,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用。取血浆 1 mL 置试管内 ,加入 0. 25 %氯化钙溶液 0. 8 mL ,混匀 ,在 (37 ±1) ℃水浴中保温 ,若在 5 min 内凝结 ,则血浆可用于实验。 2. 2 标准品溶液的制备
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中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2008 年第 29 卷第 5 期
凝结程度 ,按式 (1) 计算。
> 0. 05 ,表明两种方法结果无显著性差异。
表 1 同一批样品 10 次测定的结果比较
Tab 1 Results of potency determination for heparin sodium by different methods

肝素钠效价测定步骤

肝素钠效价测定步骤准确称取0.035-0.05g样品，放入小烧杯中，加入35-50ml0.9%Nacl 盐，配成0.1%的样品溶液；吸取0.5ml上述样品溶液至小瓶中；根据估计效价，加入适量0.9%Nacl,其量为估计效价除以标准品效价（即8），减去1，除以2，即：[（估计效价/8）-1]/2 摇匀；取5个试管，分别吸取上述3的溶液140ul、150ul、160ul、170ul、180ul；分别加入1ml血浆，再加入0.8ml0.25%Cacl2,盖上塞子，摇匀；放入37℃±1水浴箱中1小时，1小时后观察结果结果判定，实际效价=估计效价*标准品凝固点/样品凝固(1L(升)=1000ML（毫升）\1ML=1000UL（微升）)废液残留测定试验目的为了加强生产监控力度，在过程中进行检测吸附废液残留，从而根据废液残留量，在后道工序进行调整，最大程度的提高肝素钠效价和出率。

试验原理肝素钠是具有抗凝血活性的一类物质，在溶液中肝素钠含量越高，抗凝血作用越强，吸附废液中肝素残留量的高低，直接跟血浆的凝固程度有关，含量越高，凝固程度越大。

三、试验器材及试剂1、试验器材：-18度冰箱1个，吸耳球2个，10ml吸量管3个，1ml吸量管1个，试管架1个，恒温水浴箱1个，锥形漏斗1个，脱脂棉；2、试验所需试剂：血浆，标准品，0.9%的Nacl,0.25%的Cacl2；四、试验方法1、吸附结束后，关闭搅拌电机，静置2分钟，用瓶子取半瓶吸附废液，盖上瓶盖，放冷水中冷却备用；2、取1个试管架，装试管4排，第一排装5支，后面3排各装3支；3、在第1排试管中分别按顺序加入吸附废液1400ul、1600ul、1800ul、2000ul、2200ul,后3排分别按顺序加入标准品150ul、160ul、170ul；4、分别在上述4排试管里加入1ml血浆，然后再加入0.8ml0.25%的Cacl2，盖上试管塞，摇匀；5、放入37℃±1 的恒温水浴箱中1小时，1小时后观察每1管的凝固程度；五、试验结果1、观察每一排试管中血浆的凝固程度，以第1排血浆的凝固程度作为吸附废液的血浆凝固点，后3排中凝固程度相同的两排的凝固程度作为标准品的凝固点；凝固程度判断：1）、完全凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块不从管壁脱落；2）、3/4凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块有气泡产生，能从管壁脱落；3）、1/2凝固：倒转管子，大约有一班体积的溶液凝固；4）、1/4凝固：倒转管子，只有很少溶液凝固；5）、0凝固：倒转管子，溶液无凝固现象，并完全流动；2、废液残留量的计算方式：废液残留量=8*标准品凝固点/样品凝固点新树脂处理方案1、用60度的热水浸泡4小时，沥干。

肝素钠检测试剂盒(天青A微板法)

肝素钠检测试剂盒(天青A 微板法)简介：肝素钠是一种黏多糖，在多糖链上带有很多阴离子基团如磺酸基、羧基等，因此肝素具有强负电性，能与阳离子或带正电荷的分子结合，形成复合物。

天青A 是一种碱性燃料，其正电荷与肝素的阴离子结合，生成肝素-天青A 复合物。

肝素钠检测试剂盒(天青A 微板法)检测原理是肝素阴离子与天青A 阳离子结合，形成肝素-天青A 复合物，并能表现因光异色现象，即产生一种颜色反应，该反应程度与肝素的结合量具有一定比例关系，通过酶标仪检测吸光度，在碱性条件下，肝素浓度与吸光度值符合郎伯-比耳定律，通过检查标准曲线，获得肝素(钠)的效价。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、稀释标准品：取肝素标准(100U/ml)，按肝素标准(100U/ml)：蒸馏水混合，即得的肝素标准。

2、配制天青显色工作液：取适量的天青显色液，按天青显色液：蒸馏水混合，即为天青显色工作液。

4℃保存，1周有效。

显色工作液最好现配现用。

3、制作标准曲线：取干净离心管或试管，按下表进行操作，以0号管为空白对照，加入显色液后均应混匀，酶标仪检测吸光度。

可重复检测，测定结果求平均值，以效价为横坐标，吸光度为纵坐标作图得标准曲线。

12345编号名称TC1331 100T Storage试剂(A): 肝素标准(100U/ml) 1ml -20℃ 试剂(B): Heparin assay buffer 5ml 4℃ 避光试剂(C): 天青显色液 1ml4℃ 避光使用说明书1份肝素标准(1U/ml) 0 0.04 0.08 0.12 0.16 0.2 蒸馏水/μl 200 160 120 80 40 0 Heparin assay buffer/μl 50 50 50 50 50 50天青显色液/μl 50 50 50 50 50 504、还原糖测定：准确称取一定量的待测肝素钠样品，用蒸馏水溶解成溶液。

一种肝素类药物生物效价的测定方法

一种肝素类药物生物效价的测定方法
肝素类药物是一类广泛应用于医疗领域的抗凝药物。

为了确保肝素类药物的质量和效力，需要进行生物效价测定。

本文介绍了一种肝素类药物生物效价的测定方法。

该方法基于美国药典（USP）的要求，使用凝血时间法进行测定。

具体步骤如下：
1. 制备肝素类药物溶液。

将一定量的肝素类药物粉末溶解在适量的生理盐水中，制备出一定浓度的药物溶液。

2. 制备标准溶液。

使用已知浓度的标准肝素溶液，按一定比例配制出一系列浓度递减的标准溶液。

3. 准备凝血时间测定所需的试剂和设备，包括钙离子溶液、凝血酶、凝血时间测定仪等。

4. 分别取相同体积的标准溶液和待测药物溶液，加入钙离子溶液和适量的凝血酶，使其凝固。

5. 使用凝血时间测定仪，测定标准溶液和待测药物溶液的凝血时间。

6. 根据测定结果，绘制出标准曲线。

标准曲线的纵坐标是标准溶液的浓度，横坐标是凝血时间。

通过拟合标准曲线，可以计算出待测药物溶液的浓度。

7. 根据计算出的浓度，计算出生物效价。

生物效价是指单位体积内含有多少抗凝物质，通常使用国际单位（IU）表示。

通过这种方法，可以快速、准确地测定肝素类药物的生物效价，
确保药物质量和效力符合标准要求。

肝素钠_中国药典2015版公示标准

肝素钠GansunaHeparin Sodium■本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，是由不同分子量的糖链组成的混合物，由α-D-氨基葡萄糖（N-硫酸化，O-硫酸化，或N-乙酰化）和O-硫酸化糖醛酸（α-L-艾杜糖醛酸或β-D葡萄糖醛酸）交替连接形成聚合物，具有延长血凝时间的作用。

按干燥品计算，每1mg中抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为0.9～1.1。

■[修订]■核酸取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在260nm的波长处，吸光度不得大于0.10。

■[增订]■蛋白质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含30mg的溶液，作为供试品溶液；另取牛血清白蛋白对照品适量，分别加水制成每1ml中各含0、10μg、20μg、30μg、40μg与50μg的溶液，作为对照品溶液，照蛋白质含量测定法（附录ⅦM 第二法）测定。

按干燥品计，含蛋白质不得过0.5%。

■[增订]■有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，涡旋混合至完全溶解，取0.5ml，加入1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加入1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为供试品溶液；取肝素对照品250mg，加水2ml，涡旋混匀至完全溶解，作为对照品溶液（1）；取对照品溶液（1）1.2ml，加2%硫酸皮肤素对照品0.15ml与2%多硫酸软骨素对照品0.15ml，作为对照品溶液（2）；取对照品溶液（2）0.1ml，加水稀释至1ml，作为对照品溶液（3）；取对照品溶液（1）0.4ml，加水0.1ml，混匀，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（4）；取对照品溶液（2）0.5ml，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（5）。

肝素检验细则

肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。

精确加入蒸馏水。

分装封口备用。

2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。

吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。

2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。

充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。

结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。

偏振光旋转的度数称为旋光度。

旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。

偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。

比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。

物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。

旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。

肝素钠含量检测操作规程

肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。

2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。

3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。

特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。

5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。

加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。

肝素钠效价检测方法

肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。

4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。

估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。

检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。

取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。

并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。

1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。

凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。

②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。

③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。

④1∕4凝固：少量溶液凝固。

⑤0凝固：溶液悟凝固现象。

若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。

)待检样品效价计算公式：F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。

肝素钠效价方法

肝素钠效价方法2. 1 羊血浆的制备取冷冻贮藏的绵羊血浆,置于不超过37 ℃的水浴融化,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用。

取血浆1 mL 置试管内,加入0. 25 %氯化钙溶液0. 8mL ,混匀,在(37 ±1) ℃水浴中保温,若在5 min 内凝结,则血浆可用于实验。

2. 2 标准品溶液的制备取肝素钠标准品(204 u/ mL) 适量,用煮沸放冷的纯化水稀释至100 u/ mL ,置4 ℃冷藏备用。

临用前用生理盐水精确稀释至7 u/ mL 。

2. 3 供试品溶液的制备称取肝素钠原料或量取肝素钠注射液适量,按估计效价用生理盐水稀释至与标准溶液相当的效价浓度。

2. 4 血浆半凝固度剂量(V1/ 2) 的测定取具塞试管3 支,分别于各试管中加入梯度剂量(170 ,200 ,230μL) 的标准溶液,再按顺序准确加入血浆1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶液0. 8 mL ,立即加塞,倒置混合3 次,置(37 ±0. 5) ℃恒温水浴中保温,准确记录1 min ,判断每管凝结程度,结果判定V1/ 2在200μL 左右。

以此为中点,左右各以10μL 为一级,同法操作,测定V1/ 2为190μL 。

2. 5 肝素钠及其制剂的效价测定取具塞试管若干支,分别于各试管中加入梯度剂量的标准溶液和供试品溶液,以190μL 为中点,每隔10μL 为一级,同2. 3 项下方法操作,记录每管凝结程度,按式(1) 计算。

供试品的效价单位= V std ×C std ×VV sam ×W sam(1)式中:V std. 标准品1/ 2 凝固度的肝素加入体积(μL) ;C std. 标准品溶液的浓度(u/ mL) ; V sam. 供试品1/ 2 凝固度时的加入体积(μL) ;W sam. 供试品称取的重量(mg) ; V. 测定样品的总体积(mL)。

生色底物法测定肝素钠的效价

生色底物法测定肝素钠的效价
郝士婧;张黎;王琪
【期刊名称】《上海医药》
【年(卷),期】2022(43)19
【摘要】目的:基于生色底物法采用紫外可见光法和酶标仪法测定肝素钠的效价,以建立适当的检测方法。

方法:采用两种方法对3批肝素钠注射液和3批肝素钠原料药进行效价测定,对获得的数据进行分析。

结果:紫外可见光法有更优的重现性和准确性,其平均相对标准偏差和可信限率均小于酶标仪法;酶标仪法的检测用时明显少于紫外可见光法法,实验操作也更加便捷。

结论:两种测定方法均可获得符合生物统计学要求的可靠、有效的数据。

【总页数】4页(P70-73)
【作者】郝士婧;张黎;王琪
【作者单位】上海上药第一生化药业有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R973.2
【相关文献】
1.生色底物法测定低分子肝素钠注射液效价
2.微量生色底物法测定肝素钠抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性
3.微量生色底物法测定肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中抗Xa因子效价
4.采用生色底物测定尿激酶效价的方法探讨
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