2020-2021学年生物选修一配套导学案：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 导学案
高中生物选修一学案14：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
重点与难点对土样的选取和选择培养基的配制、对分解尿素的细菌的计数学习过程一、筛选菌株1．尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。
2．科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来原理是。
[思考1]本课题使用的培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的是，琼脂的作用是。
[思考2]本课题使用的培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是。
二、统计菌落数目1．在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。
除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。
2．采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于。
通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
[思考3]从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是。
[思考4]利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是。
3．统计的菌落数比活菌的实际数目。
这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是菌落。
因此，统计结果一般用来表示。
三、设置对照设置对照的主要目的是。
[思考5]请设计本实验的对照实验组：。
四、实验设计1．实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。
2．根据图示2－7填写以下实验流程：3．土壤微生物主要分布在距地表cm的近中性土壤中，约为细菌。
4．分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。
细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。
5．培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般在℃培养5～7d，霉菌一般在℃的温度下培养3～4d。
6．在菌落计数时，每隔h统计一次菌落数目。
选取时的记录作为结果，以防止因而导致遗漏菌落的数目。
高中生物选修一学案11：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数4．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计1．实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。
2．根据图示2－7填写以下实验流程：3．土壤微生物主要分布在距地表cm的近中性土壤中，约为细菌。
4．分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。
细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。
5．培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般在℃培养5～7d，霉菌一般在℃的温度下培养3～4d。
6．在菌落计数时，每隔h统计一次菌落数目。
选取时的记录作为结果，以防止因而导致遗漏菌落的数目。
点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。
7．菌落的特征包括等方面。
[思考8]土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。
8．实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤g。
将称好的土样倒入盛有mL无菌水的中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。
注明等。
5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当。
[思考9]在研究未知微生物时务必规范操作，以防被感染，实验后一定要洗——★参考答案★——[当堂检测]1. Ｂ2．Ｄ3．Ａ4．Ｃ５．Ｂ６．Ｂ７．Ａ８．Ｂ９．Ｃ10．Ｂ。
2020_2021学年高中生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件新人教版选修1
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g
1.0 g 15.0 g
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到 1 000 mL
探究点一 探究点二 当堂检测 本课必记
(1)在该培养基的配方中,为微生物提供碳源的是葡萄糖,提供氮源的 是尿素。
(2)绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是,只有能合成脲酶的微生物 才能利用尿素。
探究点一 探究点二 当堂检测 本课必记
(2)请设计记录和计数的表格,以便进行结果统计。 答案:
探究点一 探究点二 当堂检测 本课必记
(3)该实验是用活菌计数法进行计数的。 ①该方法在同一稀释度下,至少涂布3个平板作为重复组。分析 结果时,需考虑重复组的结果是否一致,如果结果差异太大,则意味 着操作有误,需要重新实验。 ②为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。 (4)除上述方法外,细菌的计数还可用显微镜直接计数法等。
探究点一 探究点二 当堂检测 本课必记
取样涂布:取9个上述选择培养基分成三组,并做好标记,然后用三 支1 mL无菌吸管分别从104,105,106倍的三种土壤稀释液中吸取0.1 mL对号放入已做好标记的平板中,用无菌涂布器在培养基表面轻 轻地涂布均匀
↓ 培养观察:将培养基平板倒置于30~37 ℃温室中培养1~2天,每隔 24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果
成分
甲培养基 乙培养基
KH2PO4
0.2 0.2
M gSO4· 7H2O
0.2
0.2
NaCl
0.2 0.2
CaSO4· 2H2O
0.1
0.1
CaCO3
5 5
52 ——
探究点一 探究点二 当堂检测 本课必记
人教版高中生物选修1 生物技术实践《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【课标要求】1、进行微生物的分离和培养2、测定某种微生物的数量3、研究培养基对微生物的选择作用4、探讨微生物的利用【考纲要求】1、微生物的分离和培养2、培养基对微生物的选择作用【学习目标】1、明确选择培养基的功能和作用原理，能够根据微生物筛选原理确定取样地点和方法2、知道统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法，会测定微生物的数量3、尝试设计微生物学实验并写出实验方案，能关注无菌操作和对照原则【导学流程】【预习案】一、筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
【边学边练】（1）土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种（）A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶 D ．肽酶【边学边练】（2）教程第22页的培养基为什么能选择出分解尿素的微生物？二、统计菌落数目测定微生物数量的常用方法有和。
1.稀释涂布平板法----活体计数法（1）原理：当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
（2）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数。
（3）统计原则①、选30∼300 个菌落的平板统计。
②、每个稀释度取3 个平板取其平均值。
（4）统计结果：每克样品中的菌株数= 。
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。
2．显微镜直接计数利用特定细菌计数或血细胞计数板在显微镜下计算一定容积内微生物数量。
优点：准确统计微生物实际数目缺点：3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
【边学边练】（3）某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数平均值为165，那么每克样品中菌落数是（稀释液体积为0.1ml）（）A、1.65×108B、1.65×109C、165 D 、16.5【边学边练】（4）用来判断培养基是否起到对照作用要设置的对照是（）A、未接种的选择培养基B、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养）C、接种了的选择培养基D、接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养）三、实验设计、实验操作一、流程：土壤取样、样品稀释、制备培养基、涂布平板、微生物的培养与观察、菌落计数二、实验操作：（一）土壤取样1、土壤是天然培养基---- 其微生物数量、种类。
人教版高中生物选修1-2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离和计数》导学案
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数【学习目标】1．通过学习选择培养基的应用原理，能够根据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基；2．通过进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程，能够列举其中涉及的相关技术并会用这些技术解决生产生活中的相关问题。
3．通过实际实验操作，能够运用无菌技术完成微生物的分离、培养和技术各个环节。
【重点难点】课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点：对分解尿素的细菌的计数【知识链接】1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。
2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、；按照化学性质分为和；按照用途分为和。
3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。
4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：（1）；（2）。
5.PCR（）是一种在体外将。
此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的【导学过程】（一）筛选菌株1.原理：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
2.方法：选择培养基定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
配制的依据：①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。
加入高浓度的食盐可得到。
这里的加入是在培养基的培养成分的基础上加入的。
②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。
如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。
③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。
④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。
讨论1：怎样找到耐高温的酶呢？讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？（二）统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
是
分离 只生长 尿素 尿素细
养基
细菌 菌
对照组
牛肉膏蛋 白胨培养
基
判断该培 生长多
是
养基有无 种微生 选择性 物
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。
优点： 设备简单、能观察微生物的形态特征
缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制 的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。
or ?
水生栖热菌Taq
Taq酶
因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有
Taq细菌被筛选出来。
1.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境要求，到相应的 环境中去寻找。
每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等。
三、操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 [三]规划时间
石油分解菌
纤维素分解菌 尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，
同时抑制或阻止其他微生物生长。
3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微 生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培 养基。
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学案-2020-2021学年人教版高中生物选修1
3.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)( )
A．2.34×108B．2.34×109C．234 D．23.4
4.关于土壤取样的叙述错误的是( )
（5）菌落计数：在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏一些菌落。当菌落数目_____时，选取菌落数在_______的平板进行计数。在________下，至少对____个平板进行重复计数，然后求出______，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。结果登记表格设计：
稀释度
103
104
105……
培养皿编号
1
2
3
平均值
1
2
3
平均值
1
2
3
平均值
菌落数/平板
菌数/克土壤
8、结果分析与评价
内容
现象
结论
有无杂菌污染
的判断
空白对照的培养皿中无菌落生长
菌落形态多样，菌落数偏高
选择培养基的筛选作用
牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目
样品的稀释操作
得到2个或2个以上菌落数目在30～300的平板
操作比较成功
重复组的结果
若选取同一种土样，统计结果应接近
思考：在稀释倍数为105所得到的三个平板菌落数分别为186、213、204个，求每克样品中的菌株数是多少？
【课堂练习】
1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找( )
高中生物选修一学案12：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数[学习重难点]重点：对土样的选取和选择培养基的配制。
难点：对分解尿素的细菌的计数。
[课前预习]1.实验室中微生物筛选的原理是人为提供①目的菌株生长的条件(包括②等)，同时③其他微生物生长。
根据该原理所设计的培养基，称作④培养基。
2.测定微生物数量的常用方法有①和显微镜直接计数法。
当样品的②足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个③。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在④的平板进行计数。
每克样品中的菌株数= ⑤。
一般情况下统计的菌落数比活菌的实际数目⑥。
3.在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的①。
设置对照的主要目的是排除实验组中②对实验结果的影响，提高实验结果的③。
4.绝大多数的细菌分布在距地表约3～8cm的土壤中，因此取样时一般要①。
对土壤样品液需要进行稀释，测定土壤中细菌、放线菌和真菌的数量，分别选用②、③和④倍的稀释液进行平板培养。
要将1mL样品稀释10倍的做法是⑤。
5.不同种类的微生物，往往需要不同的培养①和培养培养时间。
在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致②。
要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法，即在以③为唯一氮源的培养基中加入④，在培养某细菌后指示剂变⑤，可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。
[课堂探究]一、研究思路1.以下是分离土壤中分解尿素的细菌的培养基成分表，据表分析：（1）表中的KH2PO4、NaHPO4和MgSO4为细菌提供①，葡萄糖为细菌提供②，尿素为微生物提供③。
从物理性质上看该培养基属于④培养基。
（2）如果将利用蛋白质和多肽为唯一氮源的微生物培养在该培养基上，能否长出相应的菌落？①。
能够在该培养基上生长繁殖的微生物只能是②。
所以从功能上看该培养基属于③培养基。
高中生物选修一精品学案：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
第6课时土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标 1.通过分析具体培养基的配方，归纳选择培养基的选择作用，理解筛选微生物的原理。
2.结合实验设计，分析微生物数量测定实验中产生偏差的原因及解决措施，学会微生物的计数方法，并对培养结果进行分析和评价。
一、研究培养基对微生物的选择作用1．筛选菌株(1)自然界中目的菌株的筛选①原理：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：能产生耐高温的Taq DNA聚合酶的Taq细菌就是从热泉中筛选出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。
③方法：利用选择培养基进行微生物的筛选。
2．选择培养基(1)概念：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
(2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基是以尿素为唯一氮源，按物理性质归类为固体培养基。
特别提醒原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步验证。
1．分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？提示该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
2．如何设计对照实验验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的细菌？提示增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板操作，如果牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到了筛选能分解尿素的细菌的作用。
1．下表是微生物培养基的成分。
下列有关说法错误的是()编号①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量/g 0.4 4.0 0.5 0.5 100 mLA.此培养基可用来培养自养型微生物B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源C．若除去①，此培养基可培养圆褐固氮菌D．培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源和生长因子[答案] C[解析]分析题表可知，该培养基成分中含有水、无机盐、氮源，但不含含碳有机物，可用来培养自养型微生物，A、B项正确；圆褐固氮菌同化类型为异养型，培养基中必须存在含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌，C项错误。
2020-2021高二生物1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析
2020-2021学年高二生物人教版选修1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点一菌株的筛选与选择培养基1．筛选菌株(1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）实例：从热泉中筛选出Taq细菌。
热泉70～80 ℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。
（3）方法:利用选择培养基分离。
归纳总结：选择培养微生物的方法通常有两种：(1)可利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好"的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基；（2)可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质,经培养后，其他微生物生长受抑制,而分离对象却可乘机大大繁殖，在数量上占优势.2．选择培养基(1)概念：选择培养基指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（2）选择培养基的制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某一化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(3)选择培养基的制备方法：在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长，抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。
（4)选择培养基的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌，提高该菌的筛选率。
（5)实例:在培养基中以尿素为唯一的氮源可得到能利用尿素的微生物；在培养基中加入青霉素可分离得到酵母菌和霉菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方培养基组成提供的营养或作用KH2PO4 1.4 g、Na2HPO4 2。
1无机盐g、MgSO4·7H2O 0。
2 g葡萄糖10.0 g碳源尿素1.0 g氮源、碳源琼脂15.0 g凝固剂用蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素尿素，以尿素为氮源,缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，会因缺乏氮源而不能生长繁殖，所以，用该培养基能够筛选出可分解尿素的微生物。
2020-2021学年高中生物人教版选修1配套学案：专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
姓名，年级：时间：课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标课程标准1．研究培养基对微生物的选择作用。
2．利用选择培养基从土壤中分离分解尿素的细菌。
(重点）3．利用稀释涂布平板法进行细菌数目的测定.(难点)1．用土壤浸出液进行细菌培养.2．以尿素为氮源，测定能生长细菌的数量。
自主学习·预习热身一、筛选菌株1．自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对__生存环境__的要求，到相应的环境中去寻找.2．实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于__目的菌株__生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时__抑制__或__阻止__其他微生物生长.3．筛选分解尿素的细菌：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一__氮源__，原则上只有能够利用__尿素__的微生物才能够生长。
二、统计菌落数目的方法1．常用方法：__间接计数(活菌计数)__法。
2．统计依据：当样品的__稀释度__足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个__活菌__。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
3．操作:(1)设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
(2)为保证结果准确，一般选择菌落数在__30～300__的平板进行计数。
4．计算公式：每克样品中的菌株数＝（C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的__平均菌落数__，V代表涂布平板时所用的__稀释液的体积__，M代表__稀释倍数__。
三、设置对照1．对照实验:是指除了__被测试条件__以外,其他条件都相同的实验.2．主要目的：排除实验组中__非测试因素__对实验结果的影响，提高实验结果的可信度.例如，为了确认培养基是否被杂菌污染，需以不进行接种的培养基培养作为空白对照.四、实验设计1．土壤取样：（1）取样原因:土壤有“微生物的__天然培养基__"之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量__最大__，种类__最多__。
高中生物选修一学案2：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数考点要求1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
双基过关一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。
2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102…… 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
2020-2021学年人教版生物选修1课件：2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是( A ) A．在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落 B．在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒 C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌 D．在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后， 可以用于制取土壤稀释液
解析：要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，①正确、 ②错误；分离土壤中分解尿素的细菌用固体培养基需加入琼脂， ③正确，④错误；培养基中需要加碳源即葡萄糖，⑤正确，⑥错 误；不需要氮源，故不加硝酸盐，⑦错误，⑧正确，因此 B 正确。
2．下列关于微生物计数的实验分析中，说法错误的是( C ) A．取样不同，会导致实验结果不同 B．微生物不同，需要稀释的倍数一般不同 C．实验过程中需要对样品、培养基进行灭菌 D．实验需要空白对照，以确保培养基和操作过程未被污染
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课
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固测课基堂础Fra bibliotek训练固一、选择题(每小题 4 分，共 20 分) 1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( B ) ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦ B．①③⑤⑧ C．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
(4)在实验中，当菌落数目稳定时，应选取平板计数方法计数；在 实验中，研究者每隔 24 小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定 时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏细菌数目。
4．在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在 培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入 10%酚 可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体 中分离出( C )
高中生物选修1学案6：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、学习目标1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
二、重点、难点：重点：对土样的选取和选择培养基的配制。
难点：对分解尿素的细菌的计数。
三、知识梳理（一）、温故而知新：（1）培养基的成分有哪些？按功能分，可以分成哪些类型的培养基？（2）要进行微生物的计数，应该选择哪种纯化方法？计算公式？（二）、预习案：一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。
2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
【人教版】选修一生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案
专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。
2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：⑴；⑵。
3．PCR（）是一种在体外将。
此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。
思考：怎样找耐高温的酶呢？4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
5．选择培养基是指。
6．常用来统计样品中活菌数目的方法是。
即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
另外，也是测定微生物数量的常用方法。
7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。
这是因为。
因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。
9．设置对照实验的主要目的是，提高实验结果的可信度。
10．对照实验是。
11．实验设计包括的内容有：、、和，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
12．不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。
在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以。
13．无菌操作应注意什么问题？⑴⑵⑶14．在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是。
思考：应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？15．对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助的方法。
思考：有哪些方法可以对菌种进行鉴定？【疑难点拨】1．选择培养基选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。
目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
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§2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案班级：高二（）班姓名：【学习目标】1.简述细菌分解尿素的原理及鉴定分解尿素的细菌的方法。
2.研究培养基对微生物的选择作用,根据各类微生物的代谢特征,配制选择培养基。
3.学会分离、纯化特定微生物的研究思路和方法,掌握从土壤中分离出分解尿素的细菌并计数的操作过程。
【自主预习】一、筛选菌株1.自然界中目的菌株筛选的依据:根据它对_________的要求,到相应的环境中去寻找。
2.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于__________生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时_____或_____其他微生物生长。
3.筛选分解尿素的细菌:在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一_____,原则上只有能够利用_____的微生物才能够生长。
二、统计菌落数目1.常用方法:_________法。
2.统计依据:当样品的_______足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个_____。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
3.操作:(1)设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
(2)为保证结果准确,一般选择菌株数在________的平板进行计数。
4.计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的___________,V代表涂布平板时所用的_____________,M代表_________。
三、设置对照1.对照实验:是指除了___________以外,其他条件都相同的实验。
2.主要目的:排除实验组中___________对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
例如,为了确认培养基是否被杂菌污染,需以不进行接种的培养基培养作为空白对照。
四、实验设计1.土壤取样:(1)取样原因:土壤有“微生物的___________”之称,同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量_____,种类_____。
(2)土壤要求:富含_______,pH接近_____且潮湿。
(3)取样部位:距地表约________的土壤层。
2.样品的稀释:(1)稀释原因:样品的_________直接影响平板上生长的_________。
(2)稀释标准:选用一定稀释范围的样品液进行培养,保证获得菌落数在________,便于计数。
3.微生物的培养与观察:(1)培养:根据不同微生物的需要,控制适宜的培养_____和培养时间。
(2)观察。
①观察方法:每隔24 h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
②菌落的特征:包括菌落的_____、_____、隆起程度和_____等。
五、操作提示1.无菌操作:(1)取土样的用具在使用前都需要_____。
(2)实验操作均应在_______进行。
2.做好标记:本实验使用的平板和试管比较多,为避免混淆,使用前应标明培养基的_____、_________以及平板上培养样品的_______等。
3.制定计划:对于耗时较长的生物实验,要事先制定计划,以便提高_________。
4.菌种鉴定:细菌合成的_____将尿素分解成氨,使培养基的_____增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____指示剂,培养某种细菌后,若指示剂变___,可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
主题1研究培养基对微生物的选择作用【互动探究】1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基：教材P22左上方侧栏是本课题使用的培养基配方，请分析：(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源是_________，氮源是_________。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？该选择培养基的配方中，_______是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？分解尿素的微生物能合成_______，而_______可将尿素分解成_____，从而为微生物提供氮源。
2.设计对照实验：(1)如何验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的细菌？提示：增设__________________基础培养基并进行涂布平板操作，如果__________________培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到了筛选能分解尿素的细菌的作用。
(2)如何验证所用的选择培养基没有受到污染？提示：设置一个__________________能筛选分解尿素的细菌的选择培养基。
【探究总结】1.培养基中有无杂菌污染的判断方法：(1)若对照的培养皿中无菌落生长，说明未被杂菌污染。
(2)若培养基中菌落数偏高，说明被杂菌污染。
(3)若菌落形态多样，菌落数偏高，说明培养基中混入其他杂菌。
2.选择培养基的筛选作用：若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目，说明选择培养基具有筛选作用。
主题2进行微生物数量的测定【互动探究】1.统计菌落数目：甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。
在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？提示：_________。
为增加实验的说服力与准确性，应设置_________，在同一稀释度下涂布_________个平板，统计结果后计算_________。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。
该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？提示：_________。
微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果不一致的情况，应分析实验过程中可能的_________，找出差异的原因，需_________，而不能简单地舍弃后进行计数。
(3)某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据，试计算1 g样品的活菌数。
(4)统计的菌落数比活菌的实际数目低，原因是：当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是_____个菌落。
2.对照实验设计的分析：分析“设置对照”中的实例，探讨下列问题：(1)在A同学确定自己操作无误的情况下，A同学得出的菌落数多于其他同学的原因可能有哪些？提示：可能是他选择的__________不同于其他同学；可能是__________受到了污染。
(2)如何设计对照实验帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素：提示：①A同学与其他同学取一样的土壤进行实验，如果统计结果一致，则可以确定是_________不同于其他同学；②将A同学配制的培养基在_________的情况下培养作为空白对照，以判断培养基是否受到污染。
3.微生物数量测定的实验设计：(1)分离不同的微生物要采用不同的稀释度，原因是：土壤中各种微生物的________是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离(2)怎样根据结果判断样品稀释操作是否成功？提示：若得到了2个或2个以上菌落数目在________的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
(3)本实验中应如何统计培养基上生长的菌落数？提示：每隔______h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
【探究总结】稀释涂布平板法的三个易错提醒(1)稀释涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一般以3个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右的最好。
(2)在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组。
(3)在分析结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，如果差别过大，则意味着操作有误，需要重新实验。
【基础达标】1.下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B.以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂2.(2017·郑州高二检测)关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中,下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的一组是( )①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A.①②③④⑤B.②③④⑤C.③④⑤D.②③④3.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是( )①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A.①③⑤⑦B.②④⑥⑧C.①③⑤⑧D.①④⑥⑦4.(2017·连云港高二检测)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌,下列实验操作中不正确的是( )A.将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B.统计的菌落数往往比活菌的实际数目低C.可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D.用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌5.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法,下列描述正确的是( )A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D.都会在培养基表面形成单个的菌落6.不同的微生物对营养物质的需要各不相同。
下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中,不正确的是( )A.氮源为该微生物提供必要的氮素B.碳源也是该微生物的能源物质C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D.水是该微生物的营养要素之一7.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤,正确的顺序是( )①土壤取样②称取10 g土壤,加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1 mL进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A.①→②→③→④B.①→③→②→④C.①→②→④→③D.①→④→②→③。