微生物实验指导书(1)范文
车间微生物检验作业指导书
车间微生物检验作业指导书标题：车间微生物检验作业指导书引言概述：车间微生物检验是生产过程中非常重要的环节，能够确保产品质量和生产安全。
本文将详细介绍车间微生物检验的作业指导书，匡助工作人员正确进行微生物检验，保障生产质量。
一、样品采集1.1 确定采集点：根据生产流程和检验要求，确定样品采集点，确保代表性和准确性。
1.2 采集工具准备：准备好消毒的采集容器、取样器具等工具，避免污染样品。
1.3 采集方法：按照标准操作规程进行采集，避免外界污染和误差。
二、样品处理2.1 样品保存：将采集的样品尽快送至实验室进行检验，避免样品变质。
2.2 样品处理：根据检验要求，进行样品的处理和预处理，确保检验结果准确。
2.3 样品分装：根据检验项目的不同，对样品进行分装处理，避免相互干扰。
三、实验室操作3.1 检验设备准备：检查实验室设备是否正常运转，准备好所需的试剂和培养基。
3.2 检验条件控制：控制实验室环境温度、湿度等条件，确保检验结果准确可靠。
3.3 检验操作规范：按照标准操作规程进行微生物检验，避免操作失误和污染。
四、结果分析4.1 结果记录：记录检验结果和相关数据，确保数据的完整性和可追溯性。
4.2 结果解读：根据检验结果进行分析和判断，确定产品是否符合要求。
4.3 异常处理：对于异常结果，及时进行处理和调查，找出问题原因并采取相应措施。
五、质量控制5.1 质量管理：建立健全的质量管理体系，确保微生物检验的准确性和可靠性。
5.2 员工培训：对检验人员进行培训和考核，提高其操作技能和质量意识。
5.3 持续改进：定期评估检验流程和结果，不断改进和优化微生物检验作业指导书，提高检验效率和准确性。
总结：车间微生物检验作业指导书是保障产品质量和生产安全的重要工具，正确操作和严格执行作业指导书能够有效提高微生物检验的准确性和可靠性。
希翼本文的介绍能够匡助工作人员更好地进行微生物检验，确保产品质量和消费者安全。
微生物学实验指导书(1-5)
微生物学实验指导书目录实验一实验室环境和人体表面微生物的检查 (2)实验二普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (5)实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色 (12)实验四放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 (16)实验五酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法 (20)生命科学学院微生物学教研室编写实验一实验室环境和人体表面微生物的检查微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。
在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。
只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。
由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。
一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。
不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。
不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。
本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落的形态和数量。
一、实验器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。
2.溶液和试剂无菌水。
3.仪器和其他用品灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。
二、目的要求1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。
2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。
微生物学实验技术指导书
实验须知普通微生物学实验课的目的是，训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基础知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。
同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严谨认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的作风。
为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。
3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。
4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。
5.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。
如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。
必要时用灭火器。
6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。
对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。
7.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石碳酸液覆盖0.5小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。
凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前需浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。
8.每次实验需进行培养的材料，应标明姓名、组别及处理方法，放于教师指定的仪器内培养。
实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。
9.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。
10.实验结束后，整理桌面，物归原处，留人打扫室内卫生。
11.离实验室前，将手洗净，注意关闭火、煤气、灯、水管等。
微生物学实验室常用器皿微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌后用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。
微生物实验指导
二零零六年十月目录实验一显微镜油浸系物镜的使用 ------------------------------------ 3实验二细菌形态的观察 ---------------------------------------------------- 4实验三细菌简单染色法及口腔微生物的观察 -------------------- 5实验四细菌的革兰氏染色------------------------------------------------- 7实验五细菌的芽胞染色 ---------------------------------------------------- 8实验六酵母菌的形态观察实验----------------------------------------- 10实验七霉菌的形态观察 --------------------------------------------------- 12实验八细菌大小的测定 --------------------------------------------------- 14实验九细菌数量的测定（血球板计数） -------------------------- 16实验十培养基的配制------------------------------------------------------- 19实验十一消毒与灭菌------------------------------------------------------- 21实验十二稀释平板计数及微生物菌落形态的观察 ------------ 27实验十三紫外线对微生物生长的影响 ------------------------------ 30实验十四抗生素对微生物的作用 ------------------------------------- 30实验十五比浊法测定大肠杆菌的生长曲线 --------------------- 31实验十六土壤中好气性细菌的分离与计数(附划线分离法)33实验十七土壤中放线菌的分离与计数 ---------------------------- 35实验十八土壤中真菌的分离与计数-------------------------------- 36实验十九纤维素分解试验 --------------------------------------------------- 37实验一显微镜油浸系物镜的使用一、实验目的和实验内容目的：复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法内容：1、学习油浸系物镜的使用方法2、用油镜观察细菌三型和放线菌染色装片二、实验材料和用具细菌三型、放线菌的染色装片，香柏油、二甲苯，显微镜、擦镜纸。
微生物作业指导书
食品中菌落总数、大肠菌群能力比对计划作业指导书测试样品说明为了保证此次能力验证计划的顺利实施，请在测试前仔细阅读以下说明。
1、样品的分发与保存样品为液体样品，在发送前，已经过均匀性和稳定性试验，保证分发到各参试单位的样品是稳定、可靠的，当样品分发给各单位后，请妥善保管并尽量避免在运输过程中受污染，到达单位后请将试验样品置于4℃的冰箱中保存，并尽快对样品进行测试，最迟2日内必须对样品进行测试。
2、检测项目参加本次比对检验的每个单位领取三份样品，每个样品中都有一个唯一的编号（请注意不要弄丢或弄错样品编号），每个样品的检测项目为：菌落总数和大肠菌群；3、检测方法本次比对检验目的在于对参加单位微生物的检测能力的验证，为保证各参加单位给出的结果具有可比性，因而本次比对检验规定分别采用以下检测方法：《GB/T4789.2-2008食品卫生微生物学检验菌落总数测定》第一法平板菌落计数法，结果报告方式为：CFU/mL;《GB/T4789.3-2008 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》第一法大肠菌群MPN计数结果报告方式为：MPN/100 mL;4、试验方法样品在100mL玻璃瓶中，为液体状，开启时要小心；从开启样品到测试结束均应按照无菌操作进行；样品开启后，应先做菌落总数，首先分别取1mL 原液接种于2个无菌培养皿中；然后再取原液做10-1、10-2、10-3、10-4稀释（注：稀释用水可采用无菌生理盐水，也可采用无菌水），每个稀释度分别取1mL稀释样液于2个无菌培养皿中，同时分别取1mL稀释用水于2个无菌培养皿中做空白对照，然后及时将15-20mL冷却至约45摄氏度的平板计数琼脂培养基（PCA）倾注培养皿，冷却凝固后翻转，37摄氏度培养48小时后观察结果。
菌落总数接完种后，取10mL原液接种到双料LST肉汤管中，共接种3管，同时取1mL原液接种到单料LST肉汤管中，共接种3管，然后再取原液做10-1、10-2、10-3、10-4稀释（注：稀释用水可采用无菌生理盐水，也可采用无菌水），每个稀释度都接种3管单料LST肉汤，每管接种1mL，共组成18管LST肉汤，置于37摄氏度培养箱中培养48小时后观察结果，如有阳性者，转种于BGLB肉汤中做证实试验。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物学实验指导书
实验一微生物的分离和纯化本实验以微生物的分离和纯化为主线，综合包括了培养基的配制、消毒灭菌、微生物的分离等内容，在给定的时间内由学生自主完成。
包括以下知识内容。
学生书写实验报告的时候，不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述实验过程，在别人看完你的实验报告后，能够知道你是怎样做的，能够重复你的实验过程。
一、目的要求1．了解培养基的配制原理，掌握常用培养基的配制方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
3 学习、掌握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术。
4 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
5 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培养条件。
二、原理培养基是将微生物生长繁殖所需要各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。
此外，微生物还必须在最合适的酸碱度范围的培养基上生长繁殖，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的PH值范围。
根据研究目的不同，可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。
固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2%的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5～0.8%的琼脂。
有时为了特殊目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。
由于微生物营养类型不同，应提供不同种类的培养基。
在分离、培养异样微生物时，对一般细菌常用肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏合成1号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培养基，有时也常用马丁培养基分离霉菌。
马丁培养基除含有霉菌所含需的各种营养物外，还有孟加拉红染料，能抑制放线菌和细菌，链霉素可杀死或抑制细菌，但对霉菌均无害，所以这种培养基具有选择作用。
灭菌的方法很多，最常用的是加压蒸汽灭菌法。
此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。
在每平方厘米为一个大气压（即15磅/时2）的压力下，温度可达121℃，一般只要持续15～20分钟后，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
微生物学实验指导书
实验一土壤中微生物的分离一、实验目的：1、使学生熟悉土壤中微生物种类。
2、学会用稀释平板技术确定土壤样本中的细菌和真菌的数目。
二、实验原理：土壤中含有大量的微生物，包括、真菌、原生动物、藻类和病毒。
尽管有如此多样性，细菌，包括霉菌样防线菌和真菌乃是最占优势的。
必须记住，土壤环境随地点不同而不相同；同一地点，不同时期的土壤环境也不一样。
这样，像湿度、PH值、温度、氧气含量、土壤中有机和无机组成在确定特定样本的特定微生物中将是决定性的。
就像土壤不同一样，用于分析土壤的微生物学方法也不同。
一个单一的技术是不能用来对所给的土壤样本中不同类型的微生物进行分离计数的。
本实验中确定的仅仅是细菌、防线菌、和真菌的相对数目。
所用的方法是系列稀释平板法。
为培养这三类微生物的生长，采用了不同的培养基：甘油醇母琼脂培养基用于防线菌分离；Saboruaud 琼脂培养基用于真菌的分离；为了抑制细菌的生长，两种培养基都补以每毫升培养基10微克的金霉素。
营养琼脂培养基用于细菌的分离。
三、实验材料：土壤：1克充分碾碎的肥沃的花园土样本，放入装有99毫升无菌水的烧瓶中，标记为瓶1:1:100稀释度（10¯²）。
培养基：每个实验组：1瓶75毫升保持在45℃熔化的营养琼脂培养基；1瓶75毫升45℃甘油醇母琼脂培养基；1瓶75毫升45℃Sabouraud琼脂培养基。
2瓶99毫升无菌水。
器材：酒精灯，计数器，无菌1毫升吸管，无菌培养皿，记号笔。
四、实验步骤：1．按下法标记每组的四个培养基营养琼脂培养基：104-，105-，106-，107-（用于细菌计数）。
甘油醇母琼脂培养基：103-，104-，105-，106-（用于放线菌计数）。
Sabouraud琼脂培养基：102-，103-，104-，105-（用于真菌计数）。
2.用笔标记二瓶99毫升无菌水为瓶2和瓶3。
3.用力摇动1：100（102-）稀释度的土壤样本大约30分钟。
食品微生物实验技术指导书
实验一普通显微镜的使用和细菌形态观察1 目的(1)学习并掌握油镜的工作原理和使用方法。
(2)复习光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
2 原理微生物的最显著特点是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。
熟悉显微镜和掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。
实验将介绍目前微生物学研究中最常用的普通光学显微镜的结构和样品制作。
的在于使同学们通过实验，对光学显微镜有比较全面的了解，并重点掌握明视野通光学显微镜中油镜的使用。
3 材料3.1 菌种金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)染色玻片标本。
链霉菌(Streptomyces sp .)及青霉菌(Penicillium sp.)的水封片。
3.2 溶液或试剂香柏油、二甲苯。
3.3 仪器及其他用品显微镜、擦镜纸等。
4 流程安置一＞调光源一＞调目镜一＞调聚光器一＞镜检(低倍镜一＞高倍镜一＞油镜)一＞擦镜一＞复原5 步骤5.1 观察前的准备5.1.1 显微镜的安置置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约l0cm。
镜检时姿势要端正。
5.1.2 光源调节安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，若使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。
5.1.3 双筒显微镜的目镜调节根据使用者的个入情况，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有屈光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。
5.1.4 聚光器数值孔径值的调节正确使用聚光镜才能提高镜检的效果。
聚光镜的主要参数是数值孔径，它有一定的可变范围，一般聚光镜边框上的数字是代表它的最大数值孔径，通过调节聚光镜下面可变光阑的开放程度，可以得到各种不同的数值孔径，以适应不同物镜的需要。
5.2 显微观察在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。
微生物计数实验指导书
一、引言微生物计数是实验工作中不可或缺的一环，其准确性直接影响到实验的可靠性和重复性。
为确保微生物计数的结果准确可靠，本实验指导书详细规定了从样品采集与处理到结果分析与报告的整个实验流程。
通过遵循这些步骤，我们将能够优化微生物计数的操作，提高实验的精确性和可重复性。
二、样品采集与处理●(1) 采集样品为了获取具有代表性的微生物样品，我们需要采取科学的方法进行采样。
在采样过程中，我们必须特别注意避免污染和交叉污染，因为这将会对后续的实验结果产生严重的影响。
为了实现这一目标，我们建议使用无菌技术进行操作，并详细记录样品的来源、采集日期和时间等信息。
●(2) 样品处理在样品采集后，我们需要对其进行适当的处理，以便进行后续的微生物计数。
处理过程包括样品稀释、均质化和过滤或离心等步骤。
样品稀释的目的是使微生物分布均匀，便于计数；样品均质化的目的是确保微生物在样品中的分布是随机的；而样品过滤或离心的目的是去除杂质，提高计数的准确性。
三、计数方法选择●(1) 直接计数法显微镜计数、菌落计数和流式细胞仪计数是直接计数法的三种主要方法。
显微镜计数是通过显微镜直接观察并计数微生物；菌落计数是通过培养微生物并在培养基上形成菌落来计数；流式细胞仪计数则是利用流式细胞仪对微生物进行快速、准确的计数。
●(2) 间接计数法间接计数法包括ATP生物发光法、酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR等。
ATP生物发光法是通过测量微生物体内ATP的含量来间接计数；酶联免疫吸附法是利用特异性抗体与微生物抗原结合来计数；实时荧光定量PCR则是通过PCR扩增特定基因片段来计数微生物。
四、培养基选择与制备●(1) 培养基选择为了确保目标微生物能够在培养基上良好地生长和繁殖，我们需要根据微生物的种类和生长需求选择合适的培养基。
在选择培养基时，我们还需要考虑培养基的营养成分和pH值，以确保培养基能够满足目标微生物的生长需求。
此外，我们还应选择具有选择性和抑制性的培养基，以减少非目标微生物的干扰。
微生物实验指导
实验一微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件：(1)适当组分和比例的营养物质；(2)适宜的pH值；(3)合适的渗透压；(4)保持无菌状态。
所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。
培养基的配制是微生物工作者的主要技术操作之一。
一、实验目的与耍求：1．了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2．了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3．熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验原理与材料：(一) 培养基的种类根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。
从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂。
固体培养基：在液体培养基中加2％左右的凝固剂。
半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％一0.5％凝固剂。
微生物最常用的凝固剂为琼脂(其次为明胶)，又叫洋菜、冻粉。
它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。
琼脂是从海藻中(主要是石花菜)提取而制成的。
是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96℃以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
表3-1 琼脂与明胶特性比较（二）实验材料1．药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；马铃薯，蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KN03，MgS04·7H20、FeSO4·7H20、等。
2．高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌。
3．其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
微生物检验实际操作作业指导书(定稿)
微生物检验作业指导书目录一、菌落总数测定作业指导书 (3)（一）菌落总数测定过程概述 (3)（二）菌落总数测定过程及注意事项 (3)1培养基的制备 (3)2样品的采集、处理和稀释 (4)3倾注平板 (5)4培养 (6)5菌落计数 (7)6菌落总数结果与报告 (7)7检验记录表格样本 (8)8其他注意事项 (9)二、大肠菌群测定作业指导书 (9)（一）大肠菌群测定过程概述 (9)（二）大肠菌群测定过程及注意事项 (9)1培养基的制备 (9)2样品的采集、处理和稀释 (10)3初发酵试验 (11)4复发酵试验 (11)5大肠菌群检验记录表格样本（表3或表4） (11)6大肠菌群最可能数（MPN）的报告 (11)7大肠菌群测定过程中注意事项 (11)三、微生物检验常见问题答疑 (13)四、食品微生物检验实验室要求 (15)（一）无菌操作要求 (15)（二）无菌室使用要求 (15)（三）消毒灭菌要求 (16)（四）培养基制备要求 (17)（五）样品采集及处理要求 (18)（六）样品检验、记录和报告的要求 (18)一、菌落总数测定作业指导书（一）菌落总数测定过程概述食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每g（mL）原始样品中所含微生物菌落总数。
菌落总数测定的基本操作包括：培养基的制备→灭菌→样品的稀释→倾注平皿→培养48小时→计数报告。
（二）菌落总数测定过程及注意事项1培养基的制备1.1.培养基的称量及溶解（1）培养基可以选择成品，也可自行制备。
（2）选择成品：称取平板计数琼脂培养基（杭州天和）23.5g放入1000mL 烧杯中，加1000mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌，电炉上煮沸溶解，调节pH7.0±0.2，分装于锥形瓶中。
《环境工程微生物》实验指导书
《环境工程微生物》实验指导书《环境工程微生物》实验指导书一、实验目的本实验指导书旨在让学生了解和掌握环境工程微生物实验的基本原理、实验方法、实验步骤和实验技巧，培养学生对环境工程微生物的观察、分析和解决问题的能力，提高学生的实践能力和综合素质。
二、实验原理环境工程微生物实验是环境工程学科中重要的实验课程之一，主要涉及微生物的生长、代谢、分离、鉴定等实验技术。
本实验指导书将涵盖以下内容：1.微生物的生长和繁殖：通过观察微生物的生长过程，掌握微生物的生长条件和繁殖规律。
2.微生物的分离与纯化：学习使用各种方法从环境中分离微生物，并进行纯化培养。
3.微生物的鉴定：学习使用形态学、生理学等方法对微生物进行鉴定。
4.微生物的代谢：通过测定微生物的代谢产物，了解微生物的代谢过程和代谢途径。
5.微生物的生长曲线：通过绘制生长曲线，掌握微生物的生长规律和生长动力学。
三、实验步骤与操作方法1.实验准备：进行实验前，需要准备好各种实验器材、试剂和培养基等。
2.样品采集：选择具有代表性的环境样品，如水样、土壤样、垃圾样等，进行采集。
3.样品处理：将采集的样品进行处理，以备后续实验使用。
4.微生物分离：采用适当的分离方法，将微生物从样品中分离出来。
5.微生物培养：将分离得到的微生物进行培养，观察其生长情况。
6.微生物鉴定：根据微生物的形态学和生理学特征，对分离得到的微生物进行鉴定。
7.数据分析：整理实验数据，进行统计分析，得出实验结论。
8.实验总结：对实验结果进行总结，分析实验中存在的问题和不足之处，提出改进措施。
四、注意事项1.实验过程中要保持实验室的清洁卫生，避免污染和交叉感染。
2.使用试剂和培养基时要严格按照规定进行配制和使用，确保实验结果的准确性和可靠性。
3.在进行实验操作时要注意安全问题，避免发生意外事故。
例如，在处理危险性化学品时要佩戴个人防护用品；在使用高压灭菌锅时要遵守操作规程，避免发生爆炸等事故。
4.实验结束后要及时清理实验场地和器材，保证实验室的整洁和卫生。
微生物实验指导书
微生物实验指导书实验一普通光学显微镜的使用维护一、实验目的：1、掌握显微镜的构造原理及性能。
2、纯熟掌握显微镜的操作方法3、初步了解血球计数板的使用方法。
二、实验原理：1、显微镜的实验原理：普通光学显微镜运用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这重要有如下二方面的因素：①增长照明亮度②增长显微镜的分辨率。
2、血球计数板的构造原理：血球计数板是一块特制的厚的载玻片，其上由四条竖槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短的横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格为计数室。
计数室的刻度有两种规格即16×25或25×16的。
现在常用25×16的，即计数室（一个大方格）提成25个中方格，每个中方格由分为16个小方格。
1、仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、血球计数板2、材料：擦镜纸、元葱四、实验环节：（一）显微镜练习：1、制片：用牙签挑少许元葱表皮放在载玻片上，然后加盖盖玻片。
2、观测：低倍镜高倍镜（二）血球计数板的练习：先用低倍镜查找中方格，再用高倍镜查找小方格，按照左上、左下、右上、右下、中心格练习。
实验二革兰氏染色法一、目的规定了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理革兰氏染色反映是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创建的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观测到细菌的形态并且还可将所有细菌区分为两大类：染色反映呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表达；染色反映呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表达。
微生物实验指导书（1）范文
微⽣物实验指导书（1）范⽂《微⽣物学实验》实验⼀显微镜的使⽤、细菌⾰兰⽒染⾊法及细菌特殊结构的观察（⼀）实验⽬的1.了解普通光学显微镜的基本构造和⼯作原理2.学习并掌握油镜的原理和使⽤⽅法。
3. 在油镜下观察细菌⼏种基本形态4．掌握细菌⾰兰⽒染⾊法（⼆）实验原理1．显微镜的基本结构及油镜的⼯作原理现代普通光学显微镜利⽤⽬镜和物镜两组透镜系统来放⼤成像，故⼜常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两⼤部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
⽽在普通光学显微镜通常配置的⼏种物镜中，油镜的放⼤倍数最⼤，对微⽣物学研究最为重要。
与其他物镜相⽐，油镜的使⽤⽐较特殊，需在载玻⽚与镜头之间加滴镜油，这主要有如下⼆⽅⾯的原因：1. 增加照明亮度油镜的放⼤倍数可达100 Χ，放⼤倍数这样⼤的镜头，焦距很短，直径很⼩，但所需要的光照强度却最⼤。
从承载标本的玻⽚透过来的光线，因介质密度不同（从玻⽚进⼊空⽓，再进⼊镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进⼊镜头，致使在使⽤油镜时会因射⼊的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使⽤油镜时须在油镜与玻⽚之间加⼊与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常⽤⾹柏油，其折射率n=1.5 2）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨⼒(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最⼩距离的能⼒。
从物理学⾓度看，光学显微镜的分辨率受光的⼲涉现象及所⽤物镜性能的限制，分辨⼒D可表⽰为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7 µ m ），⽽数值孔径值则取决于物镜的镜⼝⾓和玻⽚与镜头间介质的折射率，可表⽰为：NA=n × sin α式中α为光线最⼤⼊射⾓的半数。
它取决于物镜的直径和焦距，⼀般来说在实际应⽤中最⼤只能达到120 O ，⽽n 为介质折射率。
微生物实验指导
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基, 这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质, 可供作繁殖之用, 制作固体培养基时须加2%琼脂, 培养细菌时, 应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方:牛肉膏0.5%, 蛋白胨1%, NaCl0.5%, pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏, 蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管, 三角烧瓶, 烧杯, 量筒, 漏斗, 乳胶管, 弹簧夹, 纱布, 棉花, 牛皮纸, 线绳, pH试纸, 电炉, 台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分, 牛肉膏常用玻棒挑取, 放在小烧杯或表面皿中称量, 用热水溶化后倒入烧杯, 蛋白胨易吸湿, 称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量, 加热, ZHU一加入各成分, 使其溶解, 琼脂在溶液煮沸后加入, 融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力, 勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后, 补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤, 以利于某些实验结果的观察, 如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求, 可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内, 分装装置如实验图8所示；分装时注意, 勿使培养基沾染在容器口上, 以免沾染棉塞引起污染。
1. 液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜, 分装三角瓶的量则根据需要而定, 一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2. 固体分装分装试管, 其装量不超过管高的1/5, 灭菌后制成斜面, 斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶, 以不超过容积的1/2为宜。
3. 半固体分装装置以试管高度的1/3为宜, 灭菌后垂直待凝。
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《微生物学实验》实验一显微镜的使用、细菌革兰氏染色法及细菌特殊结构的观察（一）实验目的1.了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。
3. 在油镜下观察细菌几种基本形态4．掌握细菌革兰氏染色法（二）实验原理1．显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达100 Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常用香柏油，其折射率n=1.5 2）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，分辨力D可表示为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7 μ m ），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为：NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实际应用中最大只能达到120 O ，而n 为介质折射率。
由于香柏油的折射率（1.52 ）比空气及水的折射率（分别为1.0 和1.33 ）要高，因此以香柏油作为镜头于玻片之间介质的油镜所能达到的数值孔径值（NA 一般在1.2-1.4）要高于低倍镜、高倍镜等干镜（NA 都低于1.0）。
若以可见光的平均波长0.55 μm来计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨出距离不小于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2 μ m 左右。
2．革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。
碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
（二）实验器材1．菌种枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物2．溶液或试剂香柏油，二甲苯，结晶紫染色液、卢哥氏碘液、95%乙醇、番红染色液，蒸馏水3．仪器及相关用品显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、酒精灯、镊子（三）实验方法1．显微观察显微观察时应遵守从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序。
油镜观察高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。
在待观察的样品区域加滴香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。
将聚光器升至最高位置并开足光圈，若所用聚光器的数值孔径值超过 1.0 ，还应在聚光镜与载玻片之间也加滴香柏油，保证其达到最大的效能。
调节照明使视野亮度合适，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。
2．革兰氏染色（1）涂片常规涂片法取一洁净的载玻片，用特种笔在载玻片的左右两侧标上菌号，并在两端各滴一小滴蒸馏水，以无菌接种环分别挑取少量菌体涂片，干燥、固定。
玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
（2）初染滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于两个玻片的涂面上，染色1～2min ，倾去染色液，细水冲洗至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
（3）媒染用卢戈氏碘液媒染约1 min ，水洗。
（4）脱色用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，终止脱色，将载玻片上水甩净。
革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。
脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
脱色时间一般约20～30s。
（5）复染在涂片上滴加番红液复染约2～3min ，水洗，然后用吸水纸吸干。
在染色的过程中，不可使染液干涸。
（6）镜检干燥后，用油镜观察。
判断两种菌体染色反应性。
菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌（G +），被染成红色的为革兰氏阴性菌（G-）。
4．用毕后的处理（1）上升镜筒，取下载玻片。
（2）用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
（3）用擦镜纸清洁其他物镜及目镜；用绸布清洁显微镜的金属部件。
（4）分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八”字形，再向下旋。
同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。
染色玻片用洗衣粉水煮沸、清洗，凉干后备用。
（四）实验结果1．绘出你在油镜下观察到的三种菌的形态2．列表简述两株细菌的染色结果(菌的形状、颜色和革兰氏染色反应)。
（五）思考题1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？2、影响显微镜分辨率的因素有哪些？3、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?4、你认为制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节?实验二沉降法检测空气中微生物数量（一）实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材1．试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 5.0g, 蛋白胨10.0g，NaCl 5g, 水1000ml，pH 7.2~7.4马铃薯培养基配方：马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方：淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等 （四）实验方法1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。
临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。
2．暴露取样在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。
细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。
计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4.计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
X ：每m 空气中的细菌数N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数 r ：平皿底半径（㎝） （五）实验结果1．列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？2．用沉降法计算1m 空气环境中所含菌数。
（六）思考题1．对沉降测定法的结果，进行分析。
实验三 多管发酵法检测水中的大肠菌群（一） 实验目的1. 了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义 2．学习检测水中大肠菌群的方法 （二）实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
1．初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
2．平板分离初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基，Endo′s medium）或伊红美蓝琼脂（eosin methylene blue agar,EMB agar）平板上划线分离菌落。
3．复发酵试验以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
（二）实验器材1.水样自来水2．试剂乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝或复红亚硫酸钠琼脂平板，革兰氏染液。
3．仪器及其它用品载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管，革兰氏染液，显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，灭菌三角瓶等。