ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定实验原理与方法步骤
ABO血型鉴定实验原理与方法步骤【实验目的】1．理解间接鉴定血型的原理。
2．掌握人体ABO血型鉴定的方法。
【实验原理】血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型，通常红细胞血型即为血型。
将血型不相容的两个人的血液滴于玻片上红细胞将聚集成簇，这种现象称为凝集。
红细胞凝集的机制是抗原－抗体反应，即位于红细胞膜上的抗原与相应血清中的抗体（凝集素）发生免疫反应。
在ABO 血型系统中，血型鉴定就是将检测血液分别加入已知含有A或B凝集素的标准血液中，观察凝集现象是否发生，用以判断待检血液红细胞上含何种凝集原，由此确定待检血液的血型。
【实验对象】人。
【实验器材与药品】采血针，玻片，玻棒，棉球，消毒注射器，小试管，记号笔；标准A、B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。
【实验方法和步骤】1. 玻片法：用记号笔在玻片两端分别标上A、B，并各滴加一滴相应的已知标准血清。
用75％酒精棉球消毒耳垂或指端，以消毒针刺破皮肤，玻棒采血后分别滴于玻片A、B标准血清中。
2～5分钟后观察有无凝集现象，20～30分钟后再根据有无凝集现象判定血型（图9-1）。
2. 试管法：先用上述方法采血，滴加1～2滴血液于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液（浓度约5％）。
然后取小试管两支，分别标明A、B字样。
各加入标准血清与受检红细胞悬液各1～2滴，混匀后低速离心1min（1000rpm），取出试管后轻弹管底，使沉淀物被弹起，在良好的光线下观察结果。
若有沉淀物成团飘起，表示发生凝集现象；若沉淀之物呈烟雾状逐渐上升，最后试管内液体恢复红细胞悬液状态，则表示无凝集现象。
【注意事项】1. 试管法较玻片法结果准确。
2. 若结果判断困难时，可借助显微镜。
3. 用玻璃棒蘸血时，都是只蘸一次，避免交叉污染。
4. 红细胞悬液及血清必须新鲜，加用标准血清的试管不能交叉使用，否则可能出现假阳性结果。
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
ABO血型的鉴定
实验ABO血型的鉴定[实验目的] 学会用玻片法鉴定ABO血型，加深理解血型分型的依据。
[实验原理]血型是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原确定的，这种抗原由遗传基因决定。
血清中的抗体可与红细胞膜上的不同抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞的溶解。
A凝聚原+ A 凝集素→红细胞凝聚B凝聚原+ B 凝集素→红细胞凝聚ABO血型系统根据受试者红细胞上A、B凝集原的有无和种类，将血型分为A, B, O及AB型。
[实验用品]标准抗A和抗B血清一套，玻片、玻璃蜡笔、碘伏消毒液、牙签、采血针、显微镜等。
[实验方法]1.标记玻片：取干净玻片一张，擦干，不能留有水分，以防溶血；用玻璃蜡笔分别在两端表明A、B字样。
2.滴加血请：在载玻片A、B两端分别滴加标准抗A血清、抗B血清各一滴。
注意切不可混淆。
3.消毒采血：用棉签蘸取碘伏消毒液，消毒左手无名指指腹皮肤。
用消毒采血针垂直刺入消毒处皮肤采血1—2滴，将血液分别滴入标准抗A、抗B血清中，分别用牙签将血液与血清混匀，注意切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
4.观察反应：静置10~15分钟后用肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨时用低倍镜观察。
5.结果判断：根据有无凝集现象判定血型。
（1）只在抗A血清中有凝集反应，则血型为A型；（2）只在抗B血清中有凝集反应，则血型为B型；（3）在抗A及抗B血清中均有凝集反应，则血型为AB型；（4）在抗A及抗B血清中均无凝集反应，则血型为O型。
6.[注意事项]（1）.采血针和皮肤必须严格消毒。
（2）滴加两种标准血清切不可混淆, 移动玻片时切勿将两种标准血清相混。
切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
（3）注意区别凝集现象，肉眼分辨不清时使用低倍镜进行辨别。
7.实验记录：（1）实验现象：（2）实验结果：。
ABO血型及Rh血型鉴定-卡式法(审)
ABO血型及Rh血型鉴定操作规范（卡式法）
1、用抗凝（EDTA—K2）血，取40ul放入2ml生理盐水中，
配制成10%红细胞悬液，混匀备用。
2、取血型鉴定卡，撕开封条，编号。
3、分别取10ul 10%红细胞悬液，加入A、B和Rh孔。
注
意加红细胞悬液时不能直接加到孔内有试剂的液面。
4、将加好红细胞悬液的血型卡平衡放入专用离心机中，以
转/分的速度，离心5分钟。
5、5分钟后离心机提示音响，打开离心机，取出观察结果。
6、结果观察：
（1）A型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（2）B型：B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），A试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（3）AB型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集）；
（4）O型：试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集），B 试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（5）Rh阴性：Rh试剂孔位红细胞沉降到液面底端（不凝集）；
（6）Rh阳性：Rh试剂孔位红细胞在试剂液面上端（凝集）。
注意：观察结果时，要反复查对结果，以免报告错误。
7、打印结果，报告。
实训一 ABO血型的鉴定
1 实训一 ABO 血型的鉴定
【实验目的】学会用玻片法测定ABO 血型,根据测定结果确定血型。
【实验原理】用已知的凝集素（抗体）测定未知的凝集原（抗原）
【实验用品】抗A 诊断血清(从B 型血的血清中获得)、抗B 诊断血清(从A 型血的血清中获得)、双凹玻片、采血针、竹签、75％酒精棉球、干棉球、敷料罐、敷料镊、
低倍显微镜。
【实验步骤】
1．取干净双凹玻片一块，用玻璃蜡笔在两端分别标明A 、B 字样。
2．用75％酒精棉球消毒指端后，以消毒的采血
针刺破皮肤，将少许血置于双凹玻片中。
3．在A 侧凹内滴加抗A 诊断血清1滴，B 侧凹内
滴加抗B 诊断血清1滴，注意不可混淆。
3．取二支干净竹签，轻搅混匀，注意不可混淆。
4．放置10～15rnin 后用肉眼观察有无凝集现象，
肉眼不易分辨者用低倍显微镜观察。
5.根据图1有无凝集现象判定血型。
抗B 诊断血清侧 抗A 诊断血清侧
【注意事项】
1．采血针和采血时必须严格消毒，以防感染。
2．采血时勿将血液直接滴入双凹玻片的诊断血清
中，造成过浓不能检测。
3. 用竹签沾取血液注意适量，避免红细胞与诊断血清混悬液过浓或过稀，不易检测。
4．取血和作混匀用的竹签要专用，搅动血清时切不可使抗A 、抗B 两种血清发生混合。
5．注意区别凝集现象与红细胞叠连。
发生红细胞凝集时，肉眼观察呈朱红色颗粒，且液体变得清亮。
图1 ABO 血型鉴定抗A 标准血清抗B 标准血清B 型A 型AB 型O 型B A A A A B B B。
abo血型鉴定实验内容
abo血型鉴定实验内容
ABO血型鉴定是一种常见的实验方法，用于确定一个人的血型属于A型、B型、AB型还是O型。
该实验的内容主要包括以下几个步骤：
1. 血液采集：在实验开始前，需要使用适当的采血器具采集被测试
者的血液样本。
合理的消毒措施和采样技巧是确保实验结果准确性的
重要因素。
2. 血清和抗血清制备：在实验过程中，需要制备出几种关键的试剂，包括血清和抗血清。
血清是指经过离心等处理后分离出的含有抗体的
液体，而抗血清则是指针对某特定抗原产生的抗体。
3. 血型鉴定反应：将被测血液样本与A、B、AB、O型抗血清分别
混合，进行凝集反应观察。
如果血液样本中存在与抗血清相应的抗原（例如A型抗原与抗A血清），则会发生凝集反应，表明被测血液样
本中存在与该抗血清相对应的血型。
4. 结果判读：根据实验中的凝集反应结果，结合正反对照的观察，
可以判断被测血液样本的血型。
比如，如果被测血液样本与A型抗血
清和O型抗血清发生凝集反应，但与B型抗血清不发生凝集反应，则
可以判定该血液样本为A型血。
需要注意的是，在进行ABO血型鉴定实验时，实验操作人员务必
严格遵守实验室安全指导，并正确运用各种实验仪器和试剂。
同时，
实验者需要准确记录实验过程和结果，以便分析和总结实验数据。
ABO血型鉴定实验是一种简单而有效的方法，可用于临床血型鉴定、输血配型等实践中。
通过这种实验方法，我们能够更好地了解个体的
血型特征，为医学诊治以及研究提供有价值的信息。
abo血型鉴定注意事项
abo血型鉴定注意事项
ABO血型鉴定是一种重要的血型试验，以下是注意事项：
1.在进行ABO血型鉴定前，需要进行严格的洗手和消毒，以避免各种污染和交叉感染。
2.鉴定前需要准备好必要的实验室物品和试剂，保持其质量和洁净度。
3.抽取静脉血时，需要选择合适的采集部位和采集器具，避免对患者造成不必要的伤害或感染。
4.在进行ABO血型鉴定时，应严格按照试剂的使用方法和标准操作步骤进行操作，确保准确可靠。
5.在解读ABO血型鉴定结果时，需要仔细核对数据和记录，排除数据错误或录入失误的可能性。
6.对于特殊情况或不确定的结果，应及时与其他医务人员和专家进行交流和讨论，以避免对诊疗和治疗造成影响。
7.鉴定结果应妥善保存和管理，保护患者的隐私和数据安全。
实验指导ABO血型鉴定实验
实验指导ABO血型鉴定实验【实验目的】观察红细胞凝集现象。
学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。
【实验原理】ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B 凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素。
因此可以用标准血清申的凝集素与被测者红细胞反应。
以确定其血型。
【实验对象】正常人【实验药品】A型B型标准血清【仪器与器械】双凹玻片、采血针、竹签、75％酒精棉球、干棉球、玻璃蜡笔（记号笔）、尖头滴管、显微镜【实验方法与步骤】1．ABO血型的鉴定（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。
（2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。
（3）75％酒精棉球消毒环指指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标推血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9－l）。
【注意事项】1．指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。
做到一人一针，不能混用。
使用过的物品（包括竹签）均应放人污物桶，不得再到采血部位采血。
2．经消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。
取血不宜过少，以免影响观察。
3．采血后要迅速与标准血清混匀以防血液凝固。
【实验结果】报告你的血型。
【思考题】l．ABO血型分类标准是什么？请报告自己的血型。
2．除ABO血型外还有什么血型系统？分类标准是什么？3．为什么在交叉配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？。
医院人ABO血型正定型标准操作程序
人ABO血型正定型标准操作程序
【项目名称】抗A、抗B血型鉴定
【实验用途】专用于鉴定人ABO血型
【标本种类】新鲜全血
【仪器和材料】抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
【试剂稳定性】：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期24个月【操作步骤】
①平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。
②试管法：本品与受检者5％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，摇匀，1000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按
【注意事项】
①、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37℃生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
②、在做配型试验时，如发现有不配现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。
③、用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。
④、本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知A、B、O血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。
⑤、试剂应在有效期内使用。
简述abo血型鉴定的基本过程
简述abo血型鉴定的基本过程
Abo血型鉴定是检测各种血液中的抗原物质或抗体物质，从而判断患者究竟是A型血或B型血的一种诊断过程。
Abo血型鉴定的基本过程如下：
1. 采集样本：采集血液样本，作为Abo血型鉴定的样本。
2. 抗体和抗原识别：通过识别血液样本中的抗体和抗原来对血型进行判断。
3. 抗体和抗原检测：使用抗原检测抗血清（ABO），A1，B，D等抗原性检测抗体，以及Rh血型的抗体检测。
4. 鉴定结果：最后根据检测结果，我们可以确定患者的Abo血型。
Abo血型鉴定是一个简单的过程，但也有一定的风险，比如出现错误的血液样本，误诊等，因此应该格外小心。
- 1 -。
ABO血型鉴定标准操作程序
SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。
许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。
红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。
ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型红细胞上抗原血清中抗体抗A 抗BO 无抗A、抗B ――A A 抗B + ―B B 抗A ―+AB A、B 无+ +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者3~5%的红细胞盐水悬液。
3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B 标准血清(μl) 100 100 100受检者RBC悬液(μl) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc 定型红细胞(μl) 50 50 50受检者血清(μl) 100 100 1003.2.4混匀。
3.2.5 以1000r/min离心1min。
3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。
3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型Ac Bc Oc + –+ A –+ ––+ + B + –––––O + + –+ + + AB –––3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误①血样试管及玻片混淆②书写错误③红细胞过浓或过淡④未注意样品溶血现象⑤漏加试剂⑥未按试剂说明操作⑦试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效⑧离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因①抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。
abo血型鉴定步骤
abo血型鉴定步骤
鉴定一个人的ABO血型可以通过以下步骤进行：
1. 采集血样：从被测者的指尖或静脉抽血，通常使用采血针或血管针进行。
2. 加入试剂：将被测者的血样分别与A、B、O型血清试剂接触。
A型血清试剂中含有抗A抗体，B型血清试剂中含有抗B 抗体，O型血清试剂中不含有抗A或抗B抗体。
3. 观察凝集反应：如果被测者的血样与A型血清试剂接触后
发生凝集反应，表示被测者的血型为A型；如果与B型血清
试剂接触后发生凝集反应，表示血型为B型；如果与O型血
清试剂接触后发生凝集反应，表示血型为O型；如果与A、B、O型血清试剂都不发生凝集反应，表示血型为AB型。
4. 确定血型：根据血清试剂与血样的凝集反应结果，确定被测者的A、B、O或AB型血型。
需要注意的是，ABO血型鉴定是一种常见的血型鉴定方法，
但并不能完全确定一个人的具体血型，因为还可能存在其他的Rh血型和其他血型抗原系统。
ABO血型鉴定
ABO血型鉴定1.AB0血型鉴定原理常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常规的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
ABO血型定型原则见表1-5-2。
2.鉴定方法（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。
②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。
如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。
在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。
②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。
③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。
④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。
于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。
⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。
⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。
⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。
（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。
血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。
此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。
ABO血型鉴定操作规程(玻片法)
宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程
一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）
二．方法玻片法
三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
四．试剂上海血液生物医药有限公司
抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成10%红细胞悬液六．操作
1 取洁净的玻片一张，用记号笔将玻片分为左右两部分，分别标注抗A和抗B。
2 分别滴加抗A和抗B试剂一滴于玻片的抗A和抗B处。
3 再加一滴做好的10%的红细胞悬液在玻片的抗A和抗B处。
4 缓慢摇晃玻片，使试剂与10%的红细胞悬液充分混合，2分钟左右用肉眼判读结果，
并记录。
5 检验结果的解释
ABO血型反应格局表
正定型
血型抗A试剂抗B试剂
+ - A
- + B
- - O
+ + AB
七．检验方法的局限性
与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。
八．注意事项
1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3
次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。
2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同时可能含有母亲血液中的抗A
或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。
3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型定型编号：□□□□/J 04-2016操作规程版号；2016-A版第0次修改1.目的；为确保实验结果的准确，特别订本规程。
2.范围；适合进行ABO血型鉴定相关科室的全体工作人员。
3.职责；3.1科主任负责本规程的培训，考核及督促实施。
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实验结果的准确性负责。
3.3全科人员熟练掌握原理及操作。
4.原理根据红细胞表面有无A抗原和B抗原，将血分为A型、B型、O 型和AB型四种。
可利用红细胞凝集试验、通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和B分型血清来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。
反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。
5,试剂5.1抗-A、抗B分型血清。
5.2～5%、B、O、试剂红细胞。
6试剂的质量控制；6.1每个工作日在实验开始前，对试剂进行外观检查，包括；有效期、有无渗漏等，试剂红细胞无明显溶血。
6.2每个工作日在实验开始前，对所有的抗-A、抗-B、试剂红细胞按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。
6.3将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录»中。
7.工作程序：7.1正定型：取洁净小试管2支，分别标记“抗A”、“抗B”，分别滴加抗A、抗B试剂1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。
7.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标记“A C”、“B C”、“O C”，各加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%试剂红细胞1滴，混合。
7.3以3400转/15秒（或1000转/1分钟）离心将试管轻轻摇动，仔细观察细胞扣有无凝集或溶血现象。
观察结果时既要看有无凝集，也要注意凝集强度，这将有助于亚型等的发现。
8.结果判定:凝集强度的判断依据《红细胞凝集强度判读标准》进行。
血型正定型反定型抗A 抗B A C B C O CA + - - + -B - + + - - O - - + + - AB + + - - -9正反定型不一致的原因；有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下情况；分型血清效价太低，亲和力不强。
ABO血型鉴定
1、标准抗A、抗B血清，生理盐水，静脉血
2、学生分组（每二人一组）分放器材。小试管、尖滴管、载玻片、离心机、记号笔、蜡笔、显微镜。
3、实验题目内容，操作步骤在黑板上写明。
三、实验步骤
（一）正定型法
1、5%被检红细胞生理盐水悬液制备 抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞2 滴于小试管中，加入生理盐水2 ml ，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min 离心3分钟后弃去上清液，重复洗涤三次后自管底吸取1滴血红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。
6、判断结果
（1）凝集结果判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。
前期准备
↓
正定型法↓Βιβλιοθήκη 观察结果↓后期分析处理
2、标记试管 取小试管2 支，分别标记抗A、抗B。
3、加标准抗血清 分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中。
4、加入红细胞悬液 分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于各试管中，混匀，立即以1000r/min，离心1min。
5、观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集、再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。
ABO血型鉴定
操作规程
操作流程
一、实验目的：
正定型法：通过用标准血型抗体鉴定红细胞膜上ABO血型系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型系统正定型的基本操作方法和结果判断。
反定型法：通过用标准红细胞和被检血清反应，掌握用盐水介质法进行ABO系统反定型的基本操作方法及结果判断，病验证正定型结果的准确性。
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ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
一. 原理
根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、
AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。
所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。
二. 试剂和材料
1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注）
2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；
3.受检者血清；
4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。
三. 方法
1 .试管法
（1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。
（2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。
（3）立即以 1000r ／min 离心 1mino
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、
B亚型、类B或cisAB的发现。
(6)凝集强度判断标准
2.玻片法
(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗
-A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。
(2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴
（3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min,以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。
如以玻片作试验时, 也可用低倍镜观察结果。
四. ［结果判定］
ABO血型正反定型结果
注；“十”为凝集；“-”为不凝集。
五•附注及注意事项
1.分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。
2.试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。
3.试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
4.操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清
5.按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20 —24C）内进行试验，37 C可使反应减弱。
6.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
7.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
8.判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
正反定型结果不一致的原因
六. 常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题
1.分型血清效价太低、亲和力不强。
如抗— A 血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
2.红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。
3.受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤：以及类B或cisAB等。
4.受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
5.受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。
6.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。
部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体 .
7．由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
8．血清中有意外抗体，如自身抗 -I ，常引起干扰。
9．老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决办法如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。
严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。
[ 检查步骤 ]
1．另从受检者采取 l 份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。
2 .将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗一A、抗一B 抗一Al，抗一A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。
3.对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
4 .用Al、Az、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。
如果怀疑是抗一I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。
5.如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4C 放置30min,用显微镜检查核实。
6.如疑为 A 抗原或 B 抗原减弱，则可将受检红细胞与抗— A 或抗—B 血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A B、H血型物质测定。
后者只对80% HAB分泌型的人有用。
7.如试验结果红细胞呈绢钱状排列,加等渗盐水 l 滴,混和,往往可使绢钱现象消失。
应注意不应先加盐水 l 滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴
别：
(1)观察细胞与抗一A及抗一B的凝集强度，与抗一A的反应要比与抗一B的反应强。
这种区别用玻片法作试验更为明显。
(2)用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗— B 不凝集自身红细胞上的类B抗原。
(3)检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无 B 物质。
(4)核对患者的诊断，类 B 抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
9．如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad 抗原活性；被细
菌酶激活的T或丁K受体；或产生机制不太明了的丁 n受体所引起。
多凝集红细胞具有以下特点：
(1)能被人和许多家兔的血清凝集。
(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
(3)不被脐带血清凝集。
(4)通常不与自身的血清凝集。