济生肾气丸对高尿酸血症大鼠的影响及作用机制_李柯
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第 35 卷
第7 期 CHINESE
中
华
中
OF
医
药
学
刊
MEDICINE
Vol． 35 No． 7 Jul． 2 0 1 7
2017 年7 月
AＲCHIVES
TＲADITIONAL
CHINEBiblioteka BaiduE
DOI： 10． 13193 / j． issn． 16737717． 2017． 07． 068
济生肾气丸对高尿酸血症大鼠的影响及作用机制
Abstract ： Objective： This study aims to observe the effect of Jisheng Shenqi Pills on the treatment of rats with hyperuricemia in blood uric acid and explore its mechanism． Method： Ninety male Wistar rats were randomly divided into 6 groups： normal group，model group，Jinsheng Shenqi pill high － dose group，middle － dose group，low － dose group and benzbromethale group． In addition to the normal group，rats in the other five groups were treated with potassium oxonate potassium by gavage to prepare the hyperuricemia model． 14 days after the start of modeling，rats were fed with drugs according to group administration． Blood was collected from eyes at the end of 14 days， 28 days and 56 days． Ｒats were executed at the end of 56 d． The levels of blood uric acid was measured and the expressions of UＲAT1 and OAT1 protein in kidney were measured by Western － Blot method． Ｒesults： ① The period of treatment can affect the level of blood uric acid． Both drugs and doses have an impact on blood uric acid levels（ P ＜ 0. 05 ） ． The middle － dose group had the best effect on decreasing blood uric acid，and it was significantly lower than that of the model group （ P ＜ 0. 05 ） ． ②The protein expressions of UＲAT1 in the middle dose group （ 300 mg / kg） and the bromocriptine group were significantly lower than those of the other control groups （ P ＜ 0. 05 ） ． The protein expression of OAT1 in two groups were significantly higher than those of the other control groups （ P ＜ 0. 05 ） ． And the middle － dose group had the best effect． Conclusion： Jisheng 中 华 中 医 药 1882 学 刊
［4 ］
尿 石 症、 肾间质炎症等疾病 症可引发痛风性关 节 炎 、 疾病的独立危险因素
［5 － 6 ］
。
近年来有学者研究发现， 血尿酸升高是肾脏疾病和心血管 。 随着经济生活水平的提高， 饮 食结构及生活方式的改变， 高蛋白和高嘌呤食物摄入增多， 高尿酸血症的发病率呈快速上升的趋势， 严重威胁人们的 生活质量
Shenqi Pills can reduce the level of blood uric acid in rats with hyperuricemia． Middle － dose of Jisheng Shenqi Pills （ 300 mg / kg） has the best effect． The mechanism of Jisheng Shenqi Pill to reduce blood uric acid level may be relying on reducing the expression of UＲAT1 protein and increasing the expression of OAT1 protein． Key words： Jisheng Shenqi pill； hyperuricemia； blood uric acid； uric acid transporter
Effect of Jisheng Shenqi Pill on Hyperuricemia in Ｒats and Its Mechanism
LI Ke1 ，YU Caina2
（ 1． Graduate School of Liaoning University of Chinese Medicine， Shenyang 110032 ， Liaoning， China； 2． College of Pharmacy of Liaoning University of Chinese Medicine， Dalian 116600 ， Liaoning， China）
收稿日期： 2017 － 02 － 17 基金项目： 辽宁省博士启动基金项目（ 20131072 ） 作者简介： 李柯（ 1981 － ） ， 男， 辽宁沈阳人， 主治医师， 硕士研究生， 研究方向： 温病学。 通讯作者： 于彩娜（ 1977 － ） ， 女（ 满族） ， 辽宁黑山人， 副教授， 博士， 研究方向： 方剂的药效物质基础研究。
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第7 期 CHINESE
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医
药
学
刊
MEDICINE
Vol． 35 No． 7 Jul． 2 0 1 7
2017 年7 月
AＲCHIVES
TＲADITIONAL
CHINESE
高尿酸血症（ Hyperuricemia，HUA） 发病常由遗传性和 （ 或） 获得性原因导致尿酸排泄减少或尿酸生成增多， 使尿 酸在体内蓄积， 引发血尿酸持续升高
1 2 李柯 ， 于彩娜
（ 1． 辽宁中医药大学研究生学院， 辽宁 沈阳 110847 ； 2． 辽宁中医药大学药学院， 辽宁 大连 116600 ） 摘 要： 目的： 探讨济生肾气丸对高尿酸血症大鼠的影响及作用机制 。 方法： Wistar 雄性大鼠 90 只， 随机分
为 6 组： 正常组、 模型组、 济生肾气丸高剂量组、 中剂量组、 低剂量组、 苯溴马隆组。 除正常组外， 其他 5 组 Wistar 28 、 56 d 取 雄性大鼠均应用氧嗪酸钾灌胃法制备高尿酸血症模型 。造模开始后 14 d， 按组别给药。 于灌胃后 14 、 于 56 d 处死小鼠后进行肾脏取材 。测定大鼠血尿酸水平， 应用 Western － Blot 法测定小鼠肾脏 UＲAT1 和 眼眶血， OAT1 蛋白表达含量。结果： ①治疗时间长短、 不同药物及剂量对大鼠血尿酸水平均有影响 ， 济生肾气丸各剂量 组大鼠血尿酸水平下降 ， 明显低于造模组（ P ＜ 0. 05 ） ， 且中剂量 （ 300 mg / kg ） 济生肾气丸对血尿酸影响最大 。 ② OAT1 的蛋白表达均 济生肾气丸中剂量组（ 300 mg / kg） 和苯溴马隆组大鼠 UＲAT1 的蛋白表达均降低（ P ＜ 0. 05 ） ， 升高（ P ＜ 0. 05 ） ， 且济生肾气丸中剂量组 （ 300 mg / kg ） 效果较佳。 结论： 济生肾气丸可降低高尿酸血症大鼠血尿 酸水平， 其中济生肾气丸中剂量 （ 300 mg / kg ） 效果最佳， 其作用机制可能是降低 UＲAT1 的蛋白表达、 升高 OAT1 的蛋白表达。 关键词： 济生肾气丸； 高尿酸血症； 血尿酸； 尿酸转运蛋白 中图分类号： Ｒ285． 5 文献标志码： A 7717 （ 2017 ） 07188204 文章编号： 1673-
。 高尿酸血症的诊
男性及绝经期后女性的血尿酸浓度超过 416 μmol / 断明确， L， 绝经期前女性的血尿酸超过 350 μmol / L， 即可诊断为高 尿酸血症 性
［3 ］ ［2 ］
。有学者通过对昆明地区 3885 名体检人员的
流 行 病 学 研 究 发 现， 女性的患病率与年龄呈明显相关 ， 源于女性绝经前雌激素水平较高 。 长期的高尿酸血
［1 ］
化学试剂有限公司； 一抗， 北京博奥森生物技术有限公司； Earth OX； EnoGene ＲIPA 裂解液， 二抗， 南京恩晶生物科 技有限公司； EnoGene BCA 试剂盒， 南京恩晶生物科技有 南京恩晶生物科技有 限公司； EnoGene 15 × SDS － PAGE ， 限公司。 1． 4 主要仪器及设备 小动物吸入麻醉机， 北京益仁恒业科技有限公司； 型号 VMＲ； 微量冷冻离心机， Sorvall ST 16Ｒ， Thermo； 干式恒温器 MK － 20 ， WD － 9405B， 杭州奥盛仪器有限公司； 水平摇床， 221BＲ52817 ， BIO 北京市六一仪器厂； Trans － Blot SD Cell， － ＲAD； 恒温磁力搅拌器， 78HW － 1 ， 江苏省金坛市荣华仪 SHZ － 82 ， 金坛市瑞华 器制造有限公司； 水浴恒温振荡器， DK － 8B， 仪器有限公司； 电热恒温水槽， 中国上海精宏实验 Tanon － 4100 ， 设备有限公司； 数码凝胶图像处理系统， 上海 天能科技有限公司； 电泳系统（ BIO － ＲAD ） Power Pac？ Universal Power Supply 042BＲ14167 ， BIO － ＲAD。 2 2． 1 实验方法 高尿酸血症大鼠模型的建立及分组 雄性 Wistar 大鼠 90 只， 随机选取 15 只作为正常组， 剩 余 75 只大鼠进行高尿酸血症造模 。 大鼠适应性喂养 1 周 75 只造模大鼠均予 200 mg / （ kg · d ） 氧嗪酸 后开始造模， 15 只正常组大鼠予等比例的生理盐水灌胃， 钾灌胃， 日1 次， 连续 10 周。在造模第 14 天通过吸入异氟烷麻醉大鼠 后， 经大鼠眼球后静脉丛取血 1 ～ 1． 5 mL， 检测血清尿酸含 量。若血清尿酸值高于正常组均值 20% 则认为大鼠造模 济生肾气 成功。将造模成功的大鼠随机平均分为模型组 、 JSSQW 中剂量组（ 300 丸（ JSSQW） 低剂量组（ 100 mg / kg ） 、 mg / kg） 、 JSSQW 高剂量组 （ 500 mg / kg ） 及苯溴马隆组 （ 10 mg / kg） 。 2． 2 喂药 各组大鼠均通过灌胃给药， 日 1 次， 连续 56 d。济生肾 气丸高、 中、 低剂量 3 组及苯溴马隆组大鼠于每天上午进行 造模剂灌胃， 同日下午灌胃所用药 1 次。 模型组大鼠于每 下午灌胃生理盐水。 正常组大鼠每日 天上午灌胃造模剂， 下午均给予等比例的生理盐水 。 上、 2． 3 2． 3． 1 观察指标 血尿酸检测 在喂药第 14 天、 第 28 天通过吸入异
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DOI： 10． 13193 / j． issn． 16737717． 2017． 07． 068
济生肾气丸对高尿酸血症大鼠的影响及作用机制
Abstract ： Objective： This study aims to observe the effect of Jisheng Shenqi Pills on the treatment of rats with hyperuricemia in blood uric acid and explore its mechanism． Method： Ninety male Wistar rats were randomly divided into 6 groups： normal group，model group，Jinsheng Shenqi pill high － dose group，middle － dose group，low － dose group and benzbromethale group． In addition to the normal group，rats in the other five groups were treated with potassium oxonate potassium by gavage to prepare the hyperuricemia model． 14 days after the start of modeling，rats were fed with drugs according to group administration． Blood was collected from eyes at the end of 14 days， 28 days and 56 days． Ｒats were executed at the end of 56 d． The levels of blood uric acid was measured and the expressions of UＲAT1 and OAT1 protein in kidney were measured by Western － Blot method． Ｒesults： ① The period of treatment can affect the level of blood uric acid． Both drugs and doses have an impact on blood uric acid levels（ P ＜ 0. 05 ） ． The middle － dose group had the best effect on decreasing blood uric acid，and it was significantly lower than that of the model group （ P ＜ 0. 05 ） ． ②The protein expressions of UＲAT1 in the middle dose group （ 300 mg / kg） and the bromocriptine group were significantly lower than those of the other control groups （ P ＜ 0. 05 ） ． The protein expression of OAT1 in two groups were significantly higher than those of the other control groups （ P ＜ 0. 05 ） ． And the middle － dose group had the best effect． Conclusion： Jisheng 中 华 中 医 药 1882 学 刊
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尿 石 症、 肾间质炎症等疾病 症可引发痛风性关 节 炎 、 疾病的独立危险因素
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近年来有学者研究发现， 血尿酸升高是肾脏疾病和心血管 。 随着经济生活水平的提高， 饮 食结构及生活方式的改变， 高蛋白和高嘌呤食物摄入增多， 高尿酸血症的发病率呈快速上升的趋势， 严重威胁人们的 生活质量
Shenqi Pills can reduce the level of blood uric acid in rats with hyperuricemia． Middle － dose of Jisheng Shenqi Pills （ 300 mg / kg） has the best effect． The mechanism of Jisheng Shenqi Pill to reduce blood uric acid level may be relying on reducing the expression of UＲAT1 protein and increasing the expression of OAT1 protein． Key words： Jisheng Shenqi pill； hyperuricemia； blood uric acid； uric acid transporter
Effect of Jisheng Shenqi Pill on Hyperuricemia in Ｒats and Its Mechanism
LI Ke1 ，YU Caina2
（ 1． Graduate School of Liaoning University of Chinese Medicine， Shenyang 110032 ， Liaoning， China； 2． College of Pharmacy of Liaoning University of Chinese Medicine， Dalian 116600 ， Liaoning， China）
收稿日期： 2017 － 02 － 17 基金项目： 辽宁省博士启动基金项目（ 20131072 ） 作者简介： 李柯（ 1981 － ） ， 男， 辽宁沈阳人， 主治医师， 硕士研究生， 研究方向： 温病学。 通讯作者： 于彩娜（ 1977 － ） ， 女（ 满族） ， 辽宁黑山人， 副教授， 博士， 研究方向： 方剂的药效物质基础研究。
第 35 卷
第7 期 CHINESE
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Vol． 35 No． 7 Jul． 2 0 1 7
2017 年7 月
AＲCHIVES
TＲADITIONAL
CHINESE
高尿酸血症（ Hyperuricemia，HUA） 发病常由遗传性和 （ 或） 获得性原因导致尿酸排泄减少或尿酸生成增多， 使尿 酸在体内蓄积， 引发血尿酸持续升高
1 2 李柯 ， 于彩娜
（ 1． 辽宁中医药大学研究生学院， 辽宁 沈阳 110847 ； 2． 辽宁中医药大学药学院， 辽宁 大连 116600 ） 摘 要： 目的： 探讨济生肾气丸对高尿酸血症大鼠的影响及作用机制 。 方法： Wistar 雄性大鼠 90 只， 随机分
为 6 组： 正常组、 模型组、 济生肾气丸高剂量组、 中剂量组、 低剂量组、 苯溴马隆组。 除正常组外， 其他 5 组 Wistar 28 、 56 d 取 雄性大鼠均应用氧嗪酸钾灌胃法制备高尿酸血症模型 。造模开始后 14 d， 按组别给药。 于灌胃后 14 、 于 56 d 处死小鼠后进行肾脏取材 。测定大鼠血尿酸水平， 应用 Western － Blot 法测定小鼠肾脏 UＲAT1 和 眼眶血， OAT1 蛋白表达含量。结果： ①治疗时间长短、 不同药物及剂量对大鼠血尿酸水平均有影响 ， 济生肾气丸各剂量 组大鼠血尿酸水平下降 ， 明显低于造模组（ P ＜ 0. 05 ） ， 且中剂量 （ 300 mg / kg ） 济生肾气丸对血尿酸影响最大 。 ② OAT1 的蛋白表达均 济生肾气丸中剂量组（ 300 mg / kg） 和苯溴马隆组大鼠 UＲAT1 的蛋白表达均降低（ P ＜ 0. 05 ） ， 升高（ P ＜ 0. 05 ） ， 且济生肾气丸中剂量组 （ 300 mg / kg ） 效果较佳。 结论： 济生肾气丸可降低高尿酸血症大鼠血尿 酸水平， 其中济生肾气丸中剂量 （ 300 mg / kg ） 效果最佳， 其作用机制可能是降低 UＲAT1 的蛋白表达、 升高 OAT1 的蛋白表达。 关键词： 济生肾气丸； 高尿酸血症； 血尿酸； 尿酸转运蛋白 中图分类号： Ｒ285． 5 文献标志码： A 7717 （ 2017 ） 07188204 文章编号： 1673-
。 高尿酸血症的诊
男性及绝经期后女性的血尿酸浓度超过 416 μmol / 断明确， L， 绝经期前女性的血尿酸超过 350 μmol / L， 即可诊断为高 尿酸血症 性
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。有学者通过对昆明地区 3885 名体检人员的
流 行 病 学 研 究 发 现， 女性的患病率与年龄呈明显相关 ， 源于女性绝经前雌激素水平较高 。 长期的高尿酸血
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化学试剂有限公司； 一抗， 北京博奥森生物技术有限公司； Earth OX； EnoGene ＲIPA 裂解液， 二抗， 南京恩晶生物科 技有限公司； EnoGene BCA 试剂盒， 南京恩晶生物科技有 南京恩晶生物科技有 限公司； EnoGene 15 × SDS － PAGE ， 限公司。 1． 4 主要仪器及设备 小动物吸入麻醉机， 北京益仁恒业科技有限公司； 型号 VMＲ； 微量冷冻离心机， Sorvall ST 16Ｒ， Thermo； 干式恒温器 MK － 20 ， WD － 9405B， 杭州奥盛仪器有限公司； 水平摇床， 221BＲ52817 ， BIO 北京市六一仪器厂； Trans － Blot SD Cell， － ＲAD； 恒温磁力搅拌器， 78HW － 1 ， 江苏省金坛市荣华仪 SHZ － 82 ， 金坛市瑞华 器制造有限公司； 水浴恒温振荡器， DK － 8B， 仪器有限公司； 电热恒温水槽， 中国上海精宏实验 Tanon － 4100 ， 设备有限公司； 数码凝胶图像处理系统， 上海 天能科技有限公司； 电泳系统（ BIO － ＲAD ） Power Pac？ Universal Power Supply 042BＲ14167 ， BIO － ＲAD。 2 2． 1 实验方法 高尿酸血症大鼠模型的建立及分组 雄性 Wistar 大鼠 90 只， 随机选取 15 只作为正常组， 剩 余 75 只大鼠进行高尿酸血症造模 。 大鼠适应性喂养 1 周 75 只造模大鼠均予 200 mg / （ kg · d ） 氧嗪酸 后开始造模， 15 只正常组大鼠予等比例的生理盐水灌胃， 钾灌胃， 日1 次， 连续 10 周。在造模第 14 天通过吸入异氟烷麻醉大鼠 后， 经大鼠眼球后静脉丛取血 1 ～ 1． 5 mL， 检测血清尿酸含 量。若血清尿酸值高于正常组均值 20% 则认为大鼠造模 济生肾气 成功。将造模成功的大鼠随机平均分为模型组 、 JSSQW 中剂量组（ 300 丸（ JSSQW） 低剂量组（ 100 mg / kg ） 、 mg / kg） 、 JSSQW 高剂量组 （ 500 mg / kg ） 及苯溴马隆组 （ 10 mg / kg） 。 2． 2 喂药 各组大鼠均通过灌胃给药， 日 1 次， 连续 56 d。济生肾 气丸高、 中、 低剂量 3 组及苯溴马隆组大鼠于每天上午进行 造模剂灌胃， 同日下午灌胃所用药 1 次。 模型组大鼠于每 下午灌胃生理盐水。 正常组大鼠每日 天上午灌胃造模剂， 下午均给予等比例的生理盐水 。 上、 2． 3 2． 3． 1 观察指标 血尿酸检测 在喂药第 14 天、 第 28 天通过吸入异