色谱柱的维护与保养
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱是高精度仪器,需要进行专业的保养与维护,以保证其正常使用和延长使用寿命。
以下是相色谱柱的保养与维护方法:
1.保持干燥:相色谱柱应该存放在干燥、阴凉、通风的地方。
2.避免受力:安装相色谱柱时,应该根据操作手册准确安装,不强行扭曲、移动或者碰撞柱子。
以免影响柱内填料的均匀性。
3.避免受污物:在使用相色谱柱之前,需要清洁检查进样口,以保证样品的干净度。
另外,避免塞入颗粒物质。
4.定期清洁:使用过程中的一些尘垢,会附着在柱外表面。
可以用专用清洗剂或者乙醇进行清洗。
不可使用有机溶剂。
5.恰当使用:相色谱柱在使用过程中,需要根据操作手册进行良好的操作,避免流速过快、被串染、被污染等影响柱子使用寿命的问题。
6.正确仓储:在不使用相色谱柱时,应当拆下接头,用压板杆和塞子封闭固定孔、流出口,避免灰尘、水分等杂质污染柱子。
总之,保养相色谱柱的关键是要注意细节、方法科学,以保证柱子完好可用、长寿。
色谱柱的维护保养
优化后
• 峰宽 – 峰3: 0.057 min – 峰4: 0.076 min – 峰5: 0.099 min
• 分辨率 3/4 = 2.73 • 分辨率 4/5 = 2.35
优化前
DAD1 B, Sig=254,8 Ref=off (F:\PROJECTS\0217_M~1\IN-PRO~1\INSTRU~1\CONFIG07.D) mAU
色谱柱的维护保养
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收到新色谱柱
• 核实色谱柱信息 – 是你订购色谱柱吗? – 规格是否正确? – 固定相是否正确?
• 检验物理性损坏 • 用标准测试样品在标准条件下测试柱子,以验证柱效 • 每支菲罗门色谱柱都经过单独检测
色谱柱的维护保养
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管路和接头
• 色谱性能取决于整个系统,而不但仅是色谱柱 • 管路和接头会造成系统死体积 • 系统死体积会造成:
Nitroaromatics
4
3
4
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1
2
7 56
5
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1
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2.0 Time (min)
Kinetex™ 2.6 µm C18 100 x 4.6 mm
36
色谱柱的维护保养
3.0
3.0
1. HMX 2. RDX 3. 1,3,5-Trinitrobenzene 4. 1,3-Dinitrobenzene 5. Nitrobenzene 6. 2,4,6-Trinitrotoluene 7. 2,4-Dinitrotoluene
23 1
1.0 Time (min)
Kinetex™ 2.6 µm C18 50 x 2.1 mm
小议色谱柱的维护与保养
生堵塞 . 柱子将不可能被彻底恢复 , 只 能 通 过 去 掉 进 口端 的 部 分 填 料 。重 新 填 充
进 行 有 限 的柱 效 恢 复 。 而 且 修 复 的厚 度
是2 — 5 mm。
柱 两 大类 。 液 相色 谱 通 常 均 采 用 填 充柱 。
色 谱 柱 的 分 离 效 果 取 决 于 所选 择 的 固定
叠氮化钠或柳硫汞 ) 中, 并 将 购 买 新 色 谱
柱 时 附 送 的 堵 头堵 上 。 三 、色 谱 柱 的维 护 与 保 养 在 高 压 液 相 色谱 中的 应 用
的主要原因是 : ①溶剂 中的不溶物 ; ② 样
品中的不溶物 ;③泵进样器等 中的不 溶 物: ④柱 内不溶物的形成等 。如果色谱柱
样的次数增加 。 出 现 色谱 峰 高 降 低 , 峰 宽
加 大 或 出现 肩峰 。 柱效下降。 需 要定 期 进
行 彻 底 清 洗 和再 生 .不 同 的 色 谱 柱 清 洗 方法各不相同比如: 1 . 反 相 柱 。分 别 用 甲醇 : 水= 9 0 : 1 0 , 纯 甲醇 ( H P L C级 ) , 异 丙醇 ( H P L C级 ) , 二
要 的分 支 。 在 人 类 进 人新 时代 之 际 , 人 们 面临 着 在 信 息 科 学 、生 命 科 学 、材 料 科 学、 环 境 科 学 等 领 域 的快 速 发 展 的 挑 战 , 在 这 些 领 域人 才 的 需 求 成 为 国家 高 度 发 展 的 至关 重要 的 因 素 。而 色 谱 技 术 是 生
保持 色谱 柱 反 方 向连 接 .用 低 于 0 . 5 7 m l / m i n ? 流速冲洗-d , 时 。如 果 压 力 不 下 降 , 则 要 看 内置 过 滤 器 是 否 被 堵 塞 .如 果 被 堵 塞 应 冲 洗 或 更 换 .若 进 口端 的 填 料 发
色谱柱保养与存储技巧
色谱柱保养与存储技巧色谱柱是科学研究和实验室分析中常见的工具,但是它的保养和存储对于保证实验结果的准确性和稳定性至关重要。
在本文中,我将分享一些色谱柱的保养和存储技巧,帮助读者更好地使用和维护色谱柱。
第一部分:保养技巧1. 清洗:每次使用完色谱柱后,都需要对其进行清洗。
由于样品残留和杂质等因素可能会影响下一次的实验结果,因此彻底清洗是必要的。
使用纯净溶剂(如甲醇或乙醇)进行反流清洗,直到洗液流出无色为止。
2. pH范围:注意样品的pH值,避免使用超出色谱柱pH稳定范围的溶液。
如果溶液过酸或过碱,可能导致色谱柱的损坏或降解,影响分离效果和柱寿命。
3. 避免高温:避免色谱柱暴露在高温环境下,尤其是在存储和操作过程中。
高温可能导致柱内压力升高,造成泄漏或损坏。
4. 防止柱堵塞:色谱柱堵塞是常见的问题,可以通过使用样品前进行过滤或退火的方式来预防。
此外,定期更换柱前过滤器也是必要的,以确保样品的纯净度和色谱柱的正常工作。
第二部分:存储技巧1. 保持干燥:色谱柱在存储时应保持干燥,避免潮湿环境。
潮湿可能导致柱内压力升高、背压异常等问题,影响柱的使用寿命和分离效果。
2. 避免阳光直射:色谱柱在存储过程中应避免阳光直射。
阳光中的紫外光可能会破坏柱内填充物,导致柱效率下降。
3. 适当密封:在长时间存储色谱柱时,应将柱头和柱底进行适当密封,以防止空气和灰尘等杂质进入柱内。
可以使用橡胶塞或塑料薄膜进行密封。
4. 温度控制:存储色谱柱的温度也需要注意。
最好将色谱柱存放在稳定的室温环境中,避免温度的快速变化或过高过低,以免对柱内填充物产生不利影响。
总结:色谱柱的保养和存储对于实验结果的准确性和稳定性至关重要。
通过彻底清洗、控制pH范围、防止高温等保养技巧,可以延长色谱柱的使用寿命并保证分离效果。
同时,通过保持干燥、避免阳光直射、适当密封、温度控制等存储技巧,可以有效防止柱内填充物的损坏和污染。
希望这些技巧能够帮助读者更好地使用和维护色谱柱,提高实验效果。
如何保护色谱柱柱效 色谱柱维护和修理保养
如何保护色谱柱柱效色谱柱维护和修理保养1.色谱柱断裂熔融石英色谱柱的聚酰亚胺涂层如有少许分裂它就会断裂。
聚酰亚胺涂层可保护易碎的熔融石英管线。
柱温箱持续的加热或冷却、柱温箱风扇的震动以及把色谱柱绕在圆形柱架上均会对管线造成压力。
zui后在薄弱处发生断裂。
通过轻划或磨损聚酰亚胺涂层会造成显现薄弱处。
通常锋利的尖或边划管线时会造成划痕。
色谱柱挂钩和标签、GC柱温箱的金属边、色谱柱切割器以及试验室试验台上的各种物品都带有锋利的尖或边。
色谱柱自身断裂的情况很少。
色谱柱制造业试图找出全部有缺陷的管线并避开在已制好的色谱柱中使用这些管线。
直径较大的色谱柱更简单断裂。
也就是说在处理0.45—0.53mm 内径的管线时要比处理0.18—0.32mm内径的管线更加谨慎以防断裂。
已断裂的色谱柱并非不能用。
假如已断裂的色谱柱保持在高温下连续运行或运行多个温度程序,则将特别简单损坏。
已断裂色谱柱的后半段暴露在高温的氧中会快速损坏固定相。
而色谱柱的前半段因有载气通过仍会保持完好。
假如已断裂的色谱柱未经加热而是仅在高温或含氧的环境下暴露很短时间,则后半段将不会受到任何严重损坏。
可以通过安装接头来接上已断裂的色谱柱。
任何合适的接头都可重新连接色谱柱。
一支色谱柱上不能装入超过2—3个接头。
多个接头会造成死体积(拖尾峰)问题。
2.热损坏超杰出谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失,活性组分形成拖尾,以及/或降低柱效(分别度)。
幸好热损坏是一个很慢的过程,因此,在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
当有氧存在时会大大加速热损坏。
对有泄漏或载气中氧含量较高的色谱柱进行过度加热可快速并*地损坏该柱。
将GC的柱温箱zui高温度设定为色谱柱温度极限或稍高于该温度极限是防止热损坏的zui 佳方法。
这样可避开色谱柱意外的过热。
即使色谱柱受到热损坏,仍旧可使用。
把色谱柱从检测器上卸下来。
【色谱柱】色谱柱的维护方法 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱的维护方法色谱柱维护和修理保养色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外,最紧要的是与日常的维护紧密相关。
色谱柱的使用寿命紧要是柱效和柱压两个指标来衡量,假如一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱柱已经结束。
因此,延长色谱柱使用寿命的关键是,除去引起柱效下降和柱压上升的因素。
以下是色谱柱的维护方法:一、流动相的PH应在使用的范围内流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短。
由于流动相的PH掌控不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必需认真对待,严格掌控流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的上升,而且也会引起柱效下降,由于筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降。
因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0、45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全除去固体颗粒物质,由于泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压上升、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻拦固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压上升在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
假如色谱柱柱压上升是由于进样端筛板被堵引起的,可选择以下方式进行补救:1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min、2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻拦了基质上键合的碳链自由伸展,使色谱柱的保留本领下降,柱效降低。
色谱柱维护系统安全操作及保养规程
色谱柱维护系统安全操作及保养规程色谱柱是色谱分析的核心部件,对于任何一种色谱柱维护系统,都需要注意其安全操作和保养规程。
本文就通过对色谱柱维护系统的安全操作和保养规程进行概述,希望能够对相关从业人员有所帮助。
安全操作1. 使用前检查在使用色谱柱前,必须对其进行检查,确保没有受到损坏或者有其他异常情况。
具体需要注意的内容如下:•检查色谱柱的接口是否正确,是否与仪器连接牢固;•检查柱体是否有异味;•检查柱体表面是否晶莹剔透;•检查柱尖是否损坏;•对柱子进行表面清洁后,观察柱子是否有损伤或表面划痕等。
2. 使用时注意在使用色谱柱的过程中,也要注意以下安全操作:•在操作之前要戴好手套、面罩和护目镜等安全装备;•操作前,要熟悉试剂的性质,并对一定会产生危险的试剂进行特别注意;•操作人员必须严格遵守操作规程,确保自己和周围人员的安全;•操作期间禁止抽烟、喝饮料或进食等易造成创伤的行为。
3. 停用后处理停用后的色谱柱,也需要特别处理才能保障安全:•在停用之前,要将流路关闭,把柱子从仪器上拆下来;•在取下柱子后,在空气中晾干4~5个小时,使得柱子干燥,避免受潮;•在存放的时候,避免阳光直接曝晒。
保养规程色谱柱是分析样品的基础设备,在使用过程中,需要在保证其性能的同时,进行正确的保养,以确保其寿命和性能一直处于在稳定的状态。
1. 清洗柱子在使用前后,需要对色谱柱的柱体进行清洗处理。
步骤如下:•先将柱子插入,确保流路紧闭,电压关断;•开启胶管瓶,在样品成功进入废柱处时关闭胶管瓶;•反向从样品向废针冲洗;•开启旋钮,调整反向泵和正向泵的比例为3:7时,开始正向注入清洗溶液洗脱样品,连续运行3个扫描周期长度;•调整正向和反向泵的比例为1:1,清洗溶液在整个柱子内循环1个小时左右(视污染程度而定);•关闭胶管瓶,将柱子拿出来,用纯水和90%甲醇交替冲洗,保证柱子表面干净;•最后,将柱子放置在胶盖里面干燥。
2. 保养柱子在使用色谱柱一段时间之后,为了保持柱子的性能,在必要的时候还需要对柱子进行保养处理。
色谱柱维护保养方法
色谱柱维护保养方法色谱柱维护保养非常重要,可以延长其使用寿命,并确保分离效果和分析结果的准确性。
以下是常见的色谱柱维护保养方法:1. 色谱柱的储存:如果打算长时间不使用色谱柱,可以将其封装,并储存在干燥、避光和温度适宜的地方,以防止柱内填料受潮、变质或分层。
2. 柱前保护:可以在色谱柱前端安装一个柱前保护器,以延长色谱柱的使用寿命。
柱前保护器可以过滤掉样品中的大颗粒物质,防止其对色谱柱造成损害,并保护柱后的检测器。
3. 样品预处理:对样品进行合适的前处理,如过滤、稀释、净化等,可以减少对色谱柱的损害,减轻色谱柱的负担。
4. 样品pH调节:合适的pH值可以增强样品的溶解性,降低颗粒物质的沉淀和析出,从而延长色谱柱的使用寿命。
但要注意不要超出色谱柱的pH范围限制。
5. 洗脱溶剂选择:选择适合的洗脱溶剂可以有效地清洗色谱柱,去除残留物质,恢复柱性能。
常用的洗脱溶剂包括纯水、有机溶剂、缓冲液等。
选择洗脱溶剂时,要注意其对色谱柱填料的溶解性以及对分离结果的影响。
6. 色谱柱的受控使用:在使用色谱柱进行分析时,要注意避免超过柱压和最大样品容量的限制,避免样品直接接触到填料床层面,避免样品中含有腐蚀性物质等。
7. 定期检查:可以定期检查色谱柱的性能,如检查柱背压、峰形、峰对称性、分辨率等。
8. 色谱柱的再生:当色谱柱分离效果下降时,可以尝试使用一些再生方法,如洗脱溶剂冲洗、温度升高、pH调节等,以恢复色谱柱的分离能力。
以上是色谱柱维护保养的一些常见方法,实际操作时应根据具体的色谱柱类型和样品特性进行调整。
此外,根据色谱柱供应商的建议和操作手册,进行正确的操作和保养也是非常重要的。
(完整版)色谱柱使用维护保养操作规程
目的:建立色谱柱使用维护保养操作规程,规范色谱柱的使用、维护行为。
范围:适用于色谱柱的使用、维护和保养。
依据:责任:药分部内容:1.操作规程一般要求是一根柱子用于同一个系列的产品,稳定性试验用专用柱。
1.1.新色谱柱在使用之前,首先应查看说明书,检查柱子的pH值范围是否与待验产品的要求相一致,确认柱子和仪器的接头以及管路是否相匹配,并注意柱子上标示的流向箭头,一切确认无误后,编上编号,在《色谱柱启用、报废台帐》上登记开始使用时间、生产厂家、型号规格等。
1.2.使用时,应按各色谱柱的要求进行色谱柱的维护保养,并在色谱柱使用登记表中登记使用日期、所测产品的名称及批次、使用前后维护保养的具体内容;1.3使用后,及时填写《色谱柱使用台帐》。
2.维护规程2.1.液相色谱柱的维护2.1.1. 色谱柱使用时,确认柱子的编号、型号规格与待验产品的要求相一致,流动相的pH值应与柱子说明书上规定的pH值相适应,然后旋开两端的封头,接到高效液相色谱仪上,使色谱柱的箭头指向与流动相流向一致。
2.1.2.流动相应经过0.45um滤膜过滤并脱气后使用,柱压不要超过300bar(3000psig),最高操作温度不得超过60℃。
2.1.3.流动相如果是非盐类的,用流动相冲洗约30min,按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作,然后进行样品的检验。
如果是盐类的,用有机相:水=10:90的溶液冲洗约10min,再换上相对应的流动相,按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作,然后进行样品的检验。
2.1.4.检验完毕,如流动相中含有盐类物质,应先用有机相:水=10:90的溶液以1ml/min的流速冲洗约40min,然后用HPLC级的乙腈或甲醇以1ml/min的流速冲洗约30min,关闭液相色谱仪,取下色谱柱,在柱两端旋上封头,以防止柱内的有机溶剂流失而使柱内填料发干变松,柱效下降。
不用的色谱柱放入液相色谱分析室的专用贮存柜中。
2.1.5.拿用时要轻拿轻放,避免剧烈震动。
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养一、高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养1. 注意安全在进行高效液相色谱仪色谱柱的维护和保养时,应注意安全,不要将手放在柱子上或柱子的内部,以免受到电击。
同时,也要注意防止外界的杂质进入柱内,避免影响柱子的性能。
2. 清洁色谱柱首先,使用湿抹布将色谱柱表面清洁干净,然后使用笔刷和溶剂将柱子内壁清洁干净。
清洁完毕后,需要将柱子放置在洁净的空气中,以便完全自然晾干。
3. 保养色谱柱在保养色谱柱时,需要注意柱子的密封,定期检查柱子的密封情况,如果发现柱子有渗漏现象,及时采取措施进行修理。
另外,还需要定期检查柱子的耐压强度,以免因耐压强度不足而造成柱子的破裂。
4. 定期更换色谱柱定期更换色谱柱是高效液相色谱仪色谱柱的保养工作之一。
色谱柱的使用寿命一般为2-3年,随着使用时间的延长,色谱柱的性能会发生变化,从而影响测试结果的准确性。
因此,需要定期更换色谱柱,以保证测试结果的可靠性。
二、色谱柱的存储1. 色谱柱应存放在干燥、无污染的环境中,避免阳光直射,以免受到湿气和污染物的侵害。
2. 色谱柱应放置在室温下,避免高温环境,以免影响色谱柱的性能。
3. 色谱柱应存放在通风良好的环境中,避免过多的湿气,以免影响色谱柱的密封性能。
4. 色谱柱应存放在有足够空间的地方,以免柱子撞击,造成损坏。
5. 色谱柱应存放在牢固的架子上,以免柱子受到重力的影响,造成损坏。
6. 色谱柱应存放在有足够防护措施的地方,以免受到杂质的污染,影响柱子的性能。
三、总结高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养是高效液相色谱仪色谱柱使用的必要措施,既要注意安全,又要注意清洁和保养,定期更换柱子,并且要认真维护存储环境,以确保高效液相色谱仪色谱柱的正常使用。
(完整版)色谱柱的使用及维护
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
色谱柱假如受到污染该怎么办 色谱柱维护和修理保养
色谱柱假如受到污染该怎么办色谱柱维护和修理保养色谱柱在日常使用过程中,尽管保护严格,样品和流动相尽管经过前处理,但经过长时间的使用,仍旧难以完全避开柱子受到污染,固定相流失、板结、柱床塌陷以及柱效下降等。
有些可以通过维护和修理,使部分柱效恢复。
1.柱污染再生技术色谱柱污染后,可以用合适的溶剂冲洗,使柱效再生。
C18柱常规的再生洗涤方法是:分别用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60 mL 依次通过色谱柱,再用100%甲醇60 mL平衡色谱柱后封存,柱效将恢复正常。
必要时,依据柱污染性质(如有机污染、盐类污染等),接受0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA钠盐冲洗,然后再用水冲洗,后用100%甲醇平衡色谱柱后封存。
对于严重污染的C18柱,可接受水、甲醇、氯仿、乙烷依次冲洗后,按次序倒过来再冲洗1次,每次所用溶剂60 mL,不接检测器,后用100%甲醇平衡色谱柱封存。
2.柱污染的修复在柱污染再生无效或已知柱污染严重时,可以接受柱修补的方法解决,但柱污染深度不宜超过 5 mm。
方法是将特制小铲将污染部分挖去,再用与柱填料相同的固定相与流动相混合制成浆状,然后将浆状固定相认真补入被挖去的部分(尽量使后填补的固定相接近原装的紧密程度),修平端面即可。
修好的柱子假如柱头两端的筛板的孔径是一致的,可将柱子颠倒过来使用一般时间,目的是借助流动相冲洗作用,恢复柱床紧密程度。
3.柱塌陷的修复柱塌陷的原因很多。
对于塌陷不太严重时,假如柱头两端的筛板孔径是一致的,可将柱颠倒使用一般时间,即可恢复性能。
当塌陷严重(5 mm左右)时,可接受柱污染的修复方法修补即可。
缓冲盐不当使用对色谱柱有哪些影响?在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调整流动相的pH值,缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压上升、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响:1、柱压上升;原因:缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出,堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙,阻拦流动相质,引起柱压上升。
色谱柱的维护和使用规范 色谱柱解决方案
色谱柱的维护和使用规范色谱柱解决方案色谱柱的维护 1、使用保护柱 2、大多数柱的PH稳定范围是2—7.5,尽可能在此范围内使用 3、避开流动相构成及极性有猛烈变化 4、流动相使用前必需经脱气和过滤处理 5、假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,要在试验完毕将柱子冲洗干净 6、压力上升时更换保护柱HPLC色谱柱的良好使用规范 1.每次使用前,用0.45um/0.22um 的膜过滤流动相 2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿 3.样品分别时确定要考虑溶剂对样品的溶解性及分别的影响 4.对样品要依据性质进行预处理 5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响 6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生8.储存色谱柱时,应将缓冲盐置换干净,并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱(乙腈/甲醇)9、避开外力损伤色谱柱:弯曲、跌落或强力震动色谱柱的柱效能是评价色谱性能的一项紧要指标,混合物能否在色谱柱中得到分别,除取决于选择合适的固定相外,还与色谱操作条件及色谱柱的装填情形等因素有关。
那么,如何有效地提高色谱柱的柱效呢?在确定的色谱操作条件下,色谱柱的柱效可用理论塔板数或理论塔板高度来衡量。
一般说来塔板数愈多,或塔板高度愈小,色谱柱的分别效能愈好。
如何提高HPLC柱效?要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。
以下介绍了几种国际上流行的测量和计算柱效值的方法。
1、提高液相色谱柱柱效的方法要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。
(1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。
(2)削减固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。
(3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。
(4)选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。
(5)适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分别度也随之降低。
(6)尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱(新的色谱柱)应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下:(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统,保证仪器系统管路干净。
(新柱老化前,此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(3)再将色谱柱正向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(4)连接检测器,开启柱温达30℃~40℃,用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗4h以上。
(目的是充饱和色谱柱,去除柱内空气)(5)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。
(目的是老化色谱柱)(6)在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。
如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
(7)然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤,超声脱气后的流动相,按检测方法平衡至少1h,待基线稳定后,开始进样检测。
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养高效液相色谱仪色谱柱的正确操作色谱柱是高效液相色谱仪最紧要的部件,被测物质能否被很好的分别和测定,色谱柱的性能起着决议性的作用。
因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维护和修理保养,以延长色谱柱的使用寿命。
1、使用预柱和保护柱预柱(pre—column)安装于泵和进样器之间,它给色谱柱中的流动相供应了完全的平衡,并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。
保护柱(guardcolumn)可以阻拦能够坚固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱,保护柱应与色谱柱的填料相同。
预柱和保护柱可以常常更换,而不需要常常更换色谱柱,这就延长了色谱柱的使用寿命。
2、防止气体进入有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的,否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。
因此,为了防止气泡进入色谱柱,确定要使用经过脱气的流动相,并且要严格依照下列步骤来安装色谱柱。
a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝,察看是否有溶剂渗出;b、如有溶剂渗出,即可将色谱柱接到管路上,以避开气泡的进入;c、如无溶剂渗出时,表明色谱柱的此端已经进去空气了,此时,可将色谱柱的出口端接到进样阀上,以流动相来反方向冲洗色谱柱,以便将柱内的空气排出。
建议以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱,假如溶剂的流速太快或者是压力蓦地的上升都将会导致柱性能的降低;d、假如流出的溶剂里不含有气泡,说明柱内的气体已经被排出了,再将色谱柱以正确的方向接好,这样气泡就进不到色谱柱里面了。
3、清洗为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中,在每次的样品分析工作完成之后,都应适时地清洗色谱柱。
首先要用对被测样品洗脱本领强的溶剂来洗脱色谱柱,以分析工作中常用的反相色谱分析法为例,因其先流出的物质是极性大的物质,此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来,洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。
【色谱柱】气相色谱柱维护及保养 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】气相色谱柱维护及保养色谱柱维护和修理保养在试验过程中常常碰到的情况:新的色谱柱,直接上分析条件来分析样品,发觉分别情况不稳定。
新的色谱柱,使用中发觉压力蓦地上升。
新的色谱柱,发觉分别度、保留时间发生了变化。
色谱柱使用不频繁,一开始分析样品效果比较好,但是,在使用过程中发觉柱效下降快、峰形异常的情况。
色谱峰形异常,基线不稳。
当发生以上情况,请认真检查,是否有某个操作疏忽了?1)测试柱性能通常情况下,我们建议用户在拿到色谱柱后,第一件事情就是在一台性能完好的仪器系统上,依照厂家说明书对色谱柱进行柱效测试。
其实,对于一个合格的色谱分析工来说,拿到一根新色谱柱,要开始一个课题之前,都会这样做,目的有二:一、了解色谱柱之前的情况并判定色谱柱是否正常。
二、将检测结果当心保存,当试验过程中发觉异常时,在检测柱效进行对比,来进一步排查原因。
2)当反相使用高浓度缓冲盐时,注意过渡在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时,确定要注意应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出,造成系统堵塞。
另外,在发觉系统压力上升异常时,要认真检查,段段排出包括保护柱、混合器、管路或者流通池等。
色谱柱的维护和保养3)当更换色谱柱时,原来的试验情况发生变化首先,假如之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品,那么之前的样品或使用的流动相对这个样品分析可能有干扰,只能重新找条件。
建议:开发方法时使用新的色谱柱。
(其次,假如是更换了品牌发生这样的情况,可能是由于不同品牌的键合技术不同,造成了选择性的细小差异,需要调整条件,并再次确定出峰次序(有些样品的洗脱次序会更改)。
再次,假如是更换了同品牌型号的新的色谱柱发生这种情况,请检查之前分别时目标与杂质的分别度是否符合要求(Rs大于1.5),假如一开始只是尽力分开(Rs小于1.5),那只能说明方法没有优化好,需要再次进行优化。
色谱柱的维护和保养4)样品及前处理样品要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
色谱柱的维护保养 色谱柱维护和修理保养
色谱柱的维护保养色谱柱维护和修理保养注意事项色谱柱 [2] 的正确使用和维护特别紧要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
①避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形;柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料,因此在调整流速时应当缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。
②应渐渐更改溶剂的构成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂更改为全部是水,反之亦然。
③一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
④选择使用适合的流动相(尤其是pH),以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避开分析柱中的硅胶基质被溶解。
⑤避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
⑥常常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。
下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及次序,作为参考:硅胶柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次冲洗,然后再以相反次序依次冲洗,全部溶剂都必需严格脱水。
甲醇能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶表面重新活化。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次冲洗,再以相反次序依次冲洗。
假如下一步分析用的流动相不含缓冲液,那么可以省略zui后用水冲洗这一步。
一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质,在甲醇(乙腈)冲洗时重复注射100~200l四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。
四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。
关于离子色谱柱的维护保养有哪些要点 色谱柱维护和修理保养
关于离子色谱柱的维护保养有哪些要点色谱柱维护和修理保养离子色谱柱是离子色谱仪的核心部件之一,样品中各种离子的分别均在色谱柱中完成,并且一般比常规液相色谱柱价格要贵很多。
因此,对离子色谱柱的维护保养特别紧要。
(1)接离子色谱柱前确保系统已清洗干净。
色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或猛烈震动;很多单位的离子色谱仪是阴、阳离子混用的,因此,接色谱柱前,确定要保证整个离子色谱仪上的全部阀件或管路已清洗干净,避开造成色谱柱堵塞。
(2)确保色谱柱不进入颗粒物。
样品确定要经过预处理,去除颗粒物等会给泵和色谱柱带来负担的物质。
(3)确保离子色谱柱不干燥。
每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品,还要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用,要参照色谱柱保存方法,在冲洗干净后,对阴离子柱要通入确定浓度的碱(对阳离子柱要通入确定浓度的酸),并将色谱柱取下两端密封保存。
(4)确保色谱柱在确定压力、流速条件下运行。
仪器使用时确定要先检查整个流动管路中是否有气泡,假如有,需要先将气泡排出后再将色谱柱接上,防止将气泡带到色谱柱中。
由于色谱柱中装填的树脂颗粒很小,气泡进入后将影响树脂和样品中离子的交换,同时气泡也将影响基线的稳定性。
毛细管色谱柱对气相色谱仪的紧要性毛细管色谱柱在气相色谱仪分析中是一个核心部分,正确使用毛细管色谱柱对气相色谱仪分析结果的精准性和延长毛细管色谱柱的使用寿命至关紧要。
1、在没有载气通过时,柱的固定液热分解较快速,所以在柱箱(炉)升温前总是应当先通上载气(这与TCD操作要求相像),柱箱冷却后才能把载气关上。
2、载气中若夹带灰尘或其它颗粒状物体就会导致柱快速损坏,因此在载气进入仪器管线前需加净化器。
(带填充剂的汽化室玻璃衬管必需注意不能带有微粒或灰尘吹出)3、载气中的水分通过固定液的液膜吸附在柱管表面上,将取代或破坏固定液液膜,所以,固定液极性越强,越需要接受干燥的载气,例如:像OV—1、SE—30、SE—54、OV—101对载气干燥要求不高,而PEG20M、FFAP和SP1000对载气要求就很高。
【色谱柱】色谱柱的保养 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱的保养色谱柱维护和修理保养色谱柱是装填有固定相用以分别混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱作为一种分别技术与方法,自本世纪初起已经有100多年的历史了,现在已经成为分析化学学科中的一个紧要的分支。
在人类进入新时代之际,人们面临着在信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等领域的快速进展的挑战,在这些领域人才的需求成为国家高度进展的至关紧要的因素。
色谱柱在使用前,可以进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行,只有这样,测得的结果才有可比性。
我们在对色谱柱使用前进行测试以后,我们要依据不同的情况对色谱柱进行保养:①反相色谱柱每天试验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应当在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
②长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
加强色谱柱的维护与保养对于高压液相色谱的进展有侧紧要的意义,高压液相色谱系统其中就包括色谱柱,因此,加强色谱柱的维护与保养有利于高压液相色谱的进展,推动我国的医疗事业的进展。
色谱柱使用中柱压蓦地上升的原因色谱柱在使用中常见的问题就是柱压上升,假如柱压是在长时间使用过程中缓慢加添,属于正常现象。
但柱压在使用过程中蓦地上升(系统管路堵塞及压力传感器故障除外,以下列举了部分常见原因及解决方法:1、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染;可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟,后再用纯水超声10分钟,重新装入色谱柱。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱(新的色谱柱)应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下:(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统,保证仪器系统管路干净。
(新柱老化前,此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(3)再将色谱柱正向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(4)连接检测器,开启柱温达30℃~40℃,用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗4h以上。
(目的是充饱和色谱柱,去除柱内空气)(5)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。
(目的是老化色谱柱)(6)在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。
如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
(7)然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤,超声脱气后的流动相,按检测方法平衡至少1h,待基线稳定后,开始进样检测。
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加强色谱柱的维护与保养对于色谱柱高压液相色谱中应用有着重要的意义,制定色谱柱管理的标准操作规程并严格执行。每一根新购进的色谱柱必须造册登记,内容包括:生产公司、品名、型号、规格、购进时间、启用时间、单价、柱内保护溶液等。色谱柱分类存放,硅胶柱、化学键合硅胶柱、氰基或氨基柱、离子交换树脂柱、凝胶柱各用一个色谱柱盒,盒上贴上标签,注明类别。随柱说明书装入密实袋附在登记本上。每启用一根色谱柱,在色谱柱上贴上标签,注明启用日期。每根柱子每两个月保养一次,特别是对于一些使用频率少的柱子,因为放置时间长,容易干柱,每一次做好保养记录。对于确已失效的柱子,做好停用记录,不能随意丢弃,专门存放,如果现用的柱子的填料需要填补,可以用存放的柱子的填料。在从事生产的单位的质检部门,对于使用时间较长柱效降低的柱子,可把它用于检测产品的中间体。
概括起来就是:①柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;②当柱子和色谱仪联结时,阀件或管路一定要清洗干净;③要注意流动相的脱气;④避免使用高粘度的溶剂作为流动相;⑤进样样品要提纯;⑥严格控制进样量;⑦每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;⑧每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;⑨若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭。
3.1 反相柱 分别用甲醇:水=90:10,纯甲醇(HPLC级),异丙醇(HPLC级),二氯甲烷(HPLC级)等溶剂作为流动相,依次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗。
3.2 正相柱 分别用正己烷(HPLC级),异丙醇(HPLC级),二氯甲烷(HPLC级),甲醇(HPLC级)等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大,可降低流速,避免压力过高).注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷,所有的流动相必须严格脱水。
2.2 色谱柱的保养。色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。我们在对色谱柱使用前进行测试以后,我们要根据不同的情况对色谱柱进行保养:①反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。②长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
关键词:色谱柱 维护与保养 高压液相色谱 应用
0 引言
色谱作为一种分离技术与方法,自本世纪初起已经有100多年的历史了,现在已经成为分析化学学科中的一个重要的分支。在人类进入新时代之际,人们面临着在信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等领域的快速发展的挑战,在这些领域人才的需求成为国家高度发展的至关重要的因素。而色谱技术是生命科学、材料科学、环境科学必不可少的手段和工具。根据最近的统计在全世界各类分析仪器中气象色谱仪和液相色谱仪的营销总额占25%-30%。
科学技术的发展,使得色谱技术也得到进一步的发展,不断有新的联用的技术得到应用。生物医学的发展,也不断要求高灵敏和高选择性的方法对研究的对象进行定性和定量的研究。
1 色谱柱的相关性质
1.1 色谱柱的定义:装填有固定相用以分离混合组分的柱管。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。
3 色谱柱的维护与保养在高压液相色谱中的应用
高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术,是现代分离测定的重要手段。问世以来,因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。高效液相色谱柱是消耗品,会随使用时间或进样的次数增加,出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰,柱效下降。需要定期进行彻底清洗和再生,不同的色谱柱清洗方法各不相同比如:
色谱柱的维护与保养在高压液相色谱中的应用
来源:中国论文下载中心 2011-4-19 15:57:46
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摘要:科学技术的发展,使得色谱技术也得到进一步的发展,不断有新的联用的技术得到应用。生物医学的发展,也不断要求高灵敏和高选择性的方法对研究的对象进行定性和定量的研究。
1.2 分类:色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。简单而言:常见的分配住填料:碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(Octy了/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、碳一注(Methyl/C1)、阴离子交换柱(SAX)、阳离子交换柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)。常见的吸附柱填料:硅胶柱
3.3 离子交换柱 长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
另外,还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.如果柱子装反了,可以调回来,但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。
色谱柱的选择会直接影响混合物中组分的分离。举例来讲:对于填充柱而言,可选择的固定相较多,柱容量较大,但是受柱长的限制,分离能力有限,主要应用于简单化合物的2.1 色谱柱的维护。我们在使用新的色谱柱应该在我们自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。而且在使用的过程中常常有堵塞的现象,造成这种现象的主要原因是①溶剂中的不溶物②样品中的不溶物③泵进样器等中的不溶物④柱内不溶物的形成等。如果当色谱柱堵塞以后我们可以对色谱柱进行修复,首先,使用含盐缓冲液后(如离子对试剂)应用溶解性强的溶剂(如水)进行冲洗。其次,先断开检测器,然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗,对于反相色谱柱,可使用甲醇、乙睛、四氢呋喃、氯仿、庚烷等,在此条件下,应避免溶剂的pH低于2或高于8。最后如果经过上述还是没有修复,色谱柱压力还是没有下降,则要断开检测器,将色谱柱反方向放置,然后检查柱压,若压力稳定下降,则保持色谱柱反方向连接,用低于0.5 ml/min 流速冲洗一小时。如果压力不下降,则要看内置过滤器是否被堵塞,如果被堵塞应冲洗或更换,若进口端的填料发生堵塞,柱子将不可能被彻底恢复,只能通过去掉进口端的部分填料,重新填充进行有限的柱效恢复。而且修复的厚度是2-5mm。
加强色谱柱的维护与保养对于高压液相色谱的发展有着重要的意义,高压液相色谱系统其中就包括色谱柱,因此,加强色谱柱的维护与保养有利于高压液相色谱的发展,推动我国的医疗事业的发展。