人间变性淋巴瘤激酶(ALK)elisa试剂盒使用说明书

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ALK基因断裂检测试剂盒(荧光原位杂交法)

一、样本收集及玻片制备： 1、样本于常温下在10%中性福尔马林缓冲液中固定6~48小时，为了达到最佳的和均匀的固定与石蜡包埋效果，样本大小不宜超过0.5cm3。 2、标准操作和石蜡包埋，使用高质量的石蜡。渗透和包埋应在低于65℃下进行。 3、切成3μm厚的切片。 4、切片捞于有氢化硅涂层玻片或黏性玻片并在50~60℃环境中固定2~16 小时。二、玻片预处理程序： 1. 56-65℃左右烤片过夜（至少 3 小时以上）。 2. 提前预热胃蛋白酶处理液（2mg/ml，10mM HCl），使其温度达到 37℃保温备用。 3. 二甲苯中室温放置切片 10 分钟，重复该步骤两次。 4. 100%乙醇中室温放置切片 5 分钟，重复该步骤一次。 5.依次 85%、70%乙醇中室温放置切片 3 分钟。 6.去离子水洗涤三次。 7.用微波炉将适量的预处理缓冲液煮沸后，然后使其处于保温状态，放入切片修复 20mins，或是在高压锅内加入适量的预处理缓冲液，高压修复 5min。 8. 取出玻片，用去离子水洗涤三次。将切片直接放入胃蛋白酶消化液中，消化 15±10mins。注：根据不同的多种因素，如片子固定的条件与过程，片子厚度，组织/细胞的特性，消化时间可以不同，我们建议：对于组织切片样本消化 5-25 分钟，对于细胞样本消化 3-8 分钟。一般来讲，我们建议预实验找到样本的最佳消化时间。且每次消化不超过 4 张切片。 9. 去离子水清洗 2mins，两次。 10. 脱水：70%，85%，100%乙醇溶液中依次放置 2 分钟，空气干燥切片。
正确
存（一般不超过两星期）；
将杂交后玻片置于-20℃避光保存。
观察时所选用的滤片组不合适
使用正确滤片组观察探针荧光情况。详情请咨询河南赛诺特生物技术有限公司技术服务部门。

碧云天 Human IgE ELISA Kit 产品说明书

Human IgE ELISA Kit产品编号产品名称包装 PI479Human IgE ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Human IgE ELISA Kit (Human IgE Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人总免疫球蛋白E 酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆中的IgE 的ELISA 试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为14.3ng/ml ，本试剂盒采用特异性抗体识别人IgE ，与IgG 、IgA 没有交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

免疫球蛋白E (IgE)只能在哺乳动物身上发现。

IgE 存在于血液中，是免疫系统抵御细菌和病毒等外来物质入侵的重要工具。

IgE 是一类具有δ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体。

IgE 是组胺和白三烯等肥大细胞释放抗炎剂水平的主要调剂者。

尽管只有少量IgE 在血液中，但它还负责触发严重过敏反应。

IgE 在I 型超敏反应中起作用，I 型超敏反应表现为各种过敏性疾病，如过敏性哮喘、大多数类型的鼻窦炎、过敏性鼻炎、食物过敏，以及某些类型的慢性荨麻疹和特应性皮炎。

此外，有足够证据证明IgE 还参与免疫系统对寄生虫入侵的反应，并增加与癌症发病有关的白血细胞数量。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA 法(Sandwich ELISA)检测样品中人IgE 的浓度，其原理见图1。

人IgE 特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IgE 会与捕获抗体结合。

当加入辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体后，辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体与人IgE 结合，形成夹心的免疫复合物。

最后加入显色剂TMB 溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。

ALK的作用及其抑制剂的介绍

ALK最早是在间变性大细胞淋巴瘤（ALCL)的一个亚型中被发现的，因此定名
为间变性淋巴瘤激酶（anaplasticlymphoma kinase，ALK）。

随后，在发现非小细胞肺癌中有ALK基因重排之前，在弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤（IMT）中分别发现了有多种类型的ALK基因重排，至此证明ALK是强力致癌驱动基因。

ALK Inhibitor（抑制剂）种类繁多，有Crizotinib，Alectinib 和TAE684等。

Crizotinib (PF-02341066)是一种有效的c-Met抑制剂，作用于人的c-Met激酶时，Ki为4 nM。

Alectinib (CH5424802)是一种有效的ALK抑制剂，IC50为1.9 nM，对L1196M 突变型敏感，作用于ALK比PF-02341066， NVP-TAE684和PHA-E429选择性高。

TAE684 (NVP-TAE684)是一种有效的，选择性的ALK抑制剂，IC50为3 nM，
作用于ALK比作用于InsR选择性高100倍。

ALK 在非小细胞肺癌中的表达

ALK 在非小细胞肺癌中的表达郝彦勇;李旭丹;郭黎黎;许仙花;邹玉凤【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】3页(P833-834,835)【作者】郝彦勇;李旭丹;郭黎黎;许仙花;邹玉凤【作者单位】吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;长春市妇产医院;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012【正文语种】中文间变性淋巴瘤激酶(ALK)于1994年首先发现于间变性大细胞淋巴瘤中；EML4-ALK融合基因于2007年首次发现，是新兴的生物标记物和治疗靶标[1]。

我们检测了106例经手术切除的非小细胞肺癌组织标本，观察并分析ALK融合基因的表达情况以及阳性病例的临床病理特征。

1.1 材料随机抽取吉林省肿瘤医院2010年至2013年间经手术切除的非小细胞肺癌106例，年龄41-77岁，平均年龄58.8岁。

肿瘤组织常规取材，经10%中性福尔马林液充分固定，石蜡包埋后，4 μm切片，用于免疫组化及FISH染色。

1.2 试剂抗ALK(D5F3)兔单克隆抗体试剂，兔单克隆阴性对照Ig(Rabbit Monoclonal Negative Control Ig),OptiView DAB IHC检测试剂盒，OptiView 扩增试剂盒，均购自罗氏诊断产品(上海)有限公司。

Vysis ALK双色分离探针试剂盒。

1.3.1 HE常规切片染色，观察。

1.3.2 免疫组化的方法检测ALK蛋白的表达。

使用BenchMark XT自动切片染色仪，每轮实验设阳性对照一张，每例标本设阴性对照一张。

1.3.3 对于阳性病例，用FISH的方法复检，按照ALK探针试剂盒说明操作，荧光显微镜下观察。

1.3.4 结果判读①组织学诊断标准：参照2004版世界卫生组织编写的《肺、胸膜、胸腺及心脏肿瘤病理学和遗传学》诊断标准以及国际肺癌研究学会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会(IASLC/ATS/ERS)于2011年2月公布的肺腺癌国际多学科分类标准[2]。

ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析

ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析谢强;陈群;林清华;钟爱虹;卢筠;廖胜祥;臧焕平【摘要】目的探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与临床特征、鉴别诊断、预后的关系.方法采用免疫组化法检测253例晚期NSCLC中ALK的表达,并对其中132例进行荧光PCR法验证.结果采用免疫组化法检测晚期NSCLC中ALK阳性率为20.95％(53/253).ALK阳性组中未吸烟者、腺癌的比例高于ALK阴性组(P＜0.05).132例进行荧光PCR验证,免疫组化与荧光PCR符合率随免疫组化阳性程度的增加而递增.结论免疫组化可作为ALK的筛查手段,提高ALK的检出率.荧光PCR检测对ALK阳性NSCLC的确诊具有重要意义.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)010【总页数】4页(P1135-1138)【关键词】肺肿瘤;非小细胞肺癌;间变性淋巴瘤激酶;免疫组织化学;荧光PCR【作者】谢强;陈群;林清华;钟爱虹;卢筠;廖胜祥;臧焕平【作者单位】福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院病理科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008【正文语种】中文【中图分类】R734.2随着医学的发展和进步，晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)已进入个体化治疗时代，其靶向治疗主要针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)基因突变及间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)突变型肺癌，二者均具有明确的分子靶点、检测技术及在中国上市的靶向药物，临床疗效明显。

ELISA说明书翻译

实验步骤1. 开始ELISA 前一天，稀释包被抗体，取酶标板每孔加入100ul 包被抗体溶液，4 度过夜2. 使用前将所有试剂放置室温，强烈建议所有标准品和样品做复孔或三孔，各次检测均要求做标准曲线3. 洗涤液不少于300ul 洗板4 次，并在吸水纸上拍干板子，后续洗涤液同此4. 为了阻断非特异性结合和减少背景，每孔加200ul 样品稀释液5. 封板并在摇床上室温孵育1h6. 在上述期间，准备标准品稀释液和适当的样品稀释液（如必需）7. 标准品稀释：500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml,62.5 pg/ml, 31.25 pg/ml, 15.6 pg/ml, 7.8pg/ml 和0 pg/ml8. 如步骤3 洗板4 次9. 每孔加入100ul 标准品稀释液和样品到对应孔，如有需要可对样品进行稀释10. 封板并在摇床上室温孵育2h11. 如步骤3 洗板4 次12. 每孔加入100ul 已稀释的二抗，封板并在摇床上室温孵育1h13. 如步骤3 洗板4 次14. 每孔加入100ul稀释的HRP,封板并在摇床上室温孵育30min15. 如步骤3洗板5次，每次洗涤洗涤液浸泡30s至1min，有利于减少背景16. 每孔加入100UITMB显色液，并在摇床孵育15-30min，阳性孔将变为淡蓝色，此步无需封板17. 每孔加入100ul 终止液终止反应，阳性孔将由蓝色变为黄色18. 终止反应半小时内测定OD值（450nm）ELISA 实验基本原理基本原理1971 年Engvall 和Perlmann 发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA ）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

儿童间变性淋巴瘤激酶阳性(ALK )间变性大细胞淋巴瘤临床路径(2019年版)

儿童间变性淋巴瘤激酶阳性（ALK+）间变性大细胞淋巴瘤临床路径（2019年版）一、儿童间变性淋巴瘤激酶阳性（ALK+）间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）临床路径标准住院流程（一）适用对象第一诊断为无中枢神经系统（CNS）侵犯的间变性淋巴瘤（ICD-10：C85.705 M97141/3）激酶阳性（ALK+）儿童间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）（ICD-10：C85.709 M97142/3）患者。

（二）诊断依据根据WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 2008版，《诸福棠实用儿科学（第8版）》（人民卫生出版社，2015）。

1.体检：可有发热、皮肤软组织结节、淋巴结及肝脾大等。

2.病理诊断:病理活检根据WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 2008版分型诊断标准。

3.NPM-ALK（血，骨髓）:非NPM-ALK基因易位除外。

4.颈部及腹部超声，头、颈、胸腹（瘤灶部位最好为增强）CT/MR，如果为颅脑和脊髓部位瘤灶则需做相应部位MR。

（三）危险度分组标准1.A组：完全切除的I期。

2.B组：预后好的一组。

（1）无皮肤浸润。

（2）无纵隔受累。

（3）病理无淋巴组织细胞变异的证据，非小细胞变异亚型。

（4）骨髓无噬血现象，不合并噬血细胞综合征。

（5）非ALCL白血病阶段。

（6）骨髓和外周血NPM-ALK（-）。

3.C组：预后差的一组，包括以下特点的患者（1）皮肤活检证实有皮肤损害（不是I期）。

（2）有纵隔和（或）肺脏受累。

（3）病理有淋巴组织细胞变异，或为小细胞变异亚型。

（4）骨髓可见噬血现象，或合并噬血细胞综合征。

（5）ALCL白血病阶段。

（6）骨髓或外周血NPM-ALK（+）。

4.D组：有CNS受累的患者。

（四）选择治疗方案的依据根据《诸福棠实用儿科学（第8版）》（人民卫生出版社）。

间变性淋巴瘤激酶酪氨酸激酶抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌中国专家建议2024版解读PPT课件

不良反应处理
对于轻度不良反应，可通过调整药物剂量或对症治疗进行缓解。对于重度不良反应，应立即停药并采取相应的治疗措施。
预防措施
在使用ALK抑制剂前，应对患者进行全面的评估，包括肝功能、肾功能、心电图等检查。同时，在治疗过程中应密切监测患者的各项指标，及时发现并处理可能出现的不良反应。
05
专家观点与争议问题探讨
目的
制定针对ALK-TKI治疗晚期NSCLC的中国专家建议，为临床医生提供规范化、个体化的治疗指导，改善患者生存质量。
国内外研究现状及发展趋势
01
国内研究现状
国内在ALK-TKI治疗晚期NSCLC领域已积累一定经验，多项临床研究证
实了其疗效和安全性，但仍存在诸多挑战和问题。
02
国外研究现状
国外在ALK-TKI治疗晚期NSCLC方面已取得显著进展，新型药物和联合
禁忌症
对于ALK阴性的非小细胞肺癌患者，或未经ALK检测的患者，不建议使用ALK抑制剂进行治疗。此外，对于妊娠期妇女和哺乳期妇女，也应避免使用此类药物。
治疗方案选择及调整策略
一线治疗方案
对于ALK阳性的非小细胞肺癌患者，一线治疗可选择克唑替尼、阿来替尼、塞瑞替尼等 ALK抑制剂进行治疗。
二线及后线治疗方案
不同ALK-TKIs药物之间在疗效和安全性方面存在一定的差异，因此需要根据患者的具体情况选择合适的药物进行治疗。
药物安全性及耐受性评估
ALK-TKIs药物的安全性及耐受性良好，大多数患者能够耐受治疗
。
常见的不良反应包括恶心、呕吐、腹泻、疲劳等，但多为轻度至中度，且可通过调整药物剂量或
对症治疗进行缓解。
强调间变性淋巴瘤激酶酪氨酸激酶抑制剂（ALK-TKIs）在晚期非小细胞肺癌治疗中的重要

ELISA_kit使用说明书

微囊藻毒素ELISA检测试剂盒使用说明书Microcystin Plate Kit一、基本原理酶联免疫（ELISA）是免疫酶技术的一种，是将抗原抗体反应的特异性与酶反应的敏感性相结合而建立的一种新技术。

ELISA的技术原理是：将酶分子与抗体（或抗原）结合，形成稳定的酶标抗体（或抗原）结合物，当酶标抗体（或抗原）与固相载体上的相应抗原（或抗体）结合时，即可在底物溶液参与下，产生肉眼可见的颜色反应，颜色的深浅与抗原或抗体的量成比例关系，使用ELISA 检测仪，即酶标仪，测定其吸收值可做出定量分析。

此技术具有特异、敏感、结果判断客观、简便和安全等优点，日益受到重视，不仅在微生物学中应用广，而且也被其他学科领域广为采用。

本试剂盒工作原理如下图所示。

二、已配试剂ELISA试剂盒中配备以下条目：1、96孔已包被好的酶标板2、1只阴性对照即0孔溶液3、标准1：0.1ng/mL的MC-LR标准溶液4、标准2：0.2ng/mL的MC-LR标准溶液5、标准3：0.5ng/mL的MC-LR标准溶液6、标准4：1ng/mL的MC-LR标准溶液7、标准5：2.5ng/mL的MC-LR标准溶液8、1瓶溶液1 (单抗)9、1只溶液2(二抗稀释液)10、一只二抗（小管乘装）11、1瓶溶液3（底物溶液）12、1瓶溶液4 （终止液）13、1袋固体PBS（配置洗涤液用）三、需配器材及试剂除试剂盒内的物品外，还需配备以下器材和试剂：1、酶标仪（若可能，可配有洗板机）2、微量移液器（100 L）（若可能，可配8道或12道微量移液器）3、吸管、橡皮吸头（洗板时用，若有洗板机，无需准备此项）4、纯水（用于配置洗涤液）5、玻璃瓶（盛装洗涤液）6、记时器（准确控制每步操作时间）7、封口膜（防止孔内液体挥发）四、酶标二抗的配置将小管中二抗用溶液2按1:3000稀释，充分溶解混匀，现用现配。

五、洗涤液的配置将固体PBS以纯水配置成1L溶液，加1mL Tween 20（PBS-T, pH7.4-7.6），室温保存。

ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。

它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。

本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。

一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。

2.样本准备：根据实验要求，准备样本。

如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。

3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。

例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。

4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。

5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。

确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。

二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。

确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。

2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。

标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。

3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。

孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。

4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。

洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。

5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。

6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。

7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。

ALK详解——精选推荐

ALK详解写在前⾯的话：本⼈私下是⼀枚⼩⼩技术员，闲来⽆事开了这样⼀个公众号，刚开始写⼀些简单易懂的东西，很感谢我的朋友和同事的⿎励与⽀持，这是我坚持下去的动⼒。

ALK基因ALK最早是在间变性⼤细胞淋巴瘤(ALCL)的⼀个亚型中被发现的，因此定名为间变性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphoma kinase，ALK)。

它是继EGFR之后肺癌中⼜⼀很重要的驱动基因。

ALK 可与多种基因发⽣融合，融合的发⽣激活了与细胞存活和增殖相关的信号转导通路，进⽽引起肿瘤的发⽣。

EML4-ALK 融合基因阳性的NSCLC患者已经被定义为 NSCLC的⼀种特殊亚型，主要出现在不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者。

ALK 也与其他基因融合⽽实现活化，如与 PTPN3、TFG、KIF5B、KLC1、STRN、TPR 及 HIP1 基因等。

与EGFR突变⼈群相⽐，ALK融合⼈群年龄更轻，如下图。

也就是说，ALK这类疾病与EGFR这类疾病⽆论是从驱动基因、病因还是从临床病理特征和预后来说都是不⼀样的，这也从另外⼀个⾓度说明对于患者光检测EGFR是远远不够的，ALK也是⾼频⽽且特异的分⼦亚型。

西⽅ NSCLC 患者 ALK 融合基因阳性率约为 3-7%，中国NSCLC 患者阳性率约为 3-11%，⽽在EGFR、KRAS、⼈表⽪⽣长因⼦受体2 或 TP53 等基因⽆突变的 NSCLC 患者中，ALK融合基因阳性率达25%；我国 EGFR 和 KRAS均为野⽣型的腺癌患者，ALK 融合基因的阳性率⾼达30-42% 。

ALK基因抑制剂⽬前，在ALK突变阳性的⾮⼩细胞肺癌（ALK+NSCLC）领域已经有4个同类型药物被FDA批准上市。

克唑替尼（Crizotinib）是⼀种以ALK、ROS1和c-MET酪氨酸激酶为作⽤靶点的⼝服⼩分⼦抑制剂，由美国辉瑞公司研发，2011年8⽉26⽇获FDA批准上市，2016年3⽉10⽇获CFDA批准上市，商品名为赛可瑞（Xalkori）。

ELISA 检测试剂盒说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

间变性淋巴瘤激酶阳性肺腺癌晚期患者的临床特征

间变性淋巴瘤激酶阳性肺腺癌晚期患者的临床特征张萍;唐敏;聂鑫;李琳【摘要】目的分析晚期肺腺癌间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因融合患者临床特点.方法收集经组织病理学证实的晚期或局部晚期不能手术的410例肺腺癌患者临床资料,患者均经过增强免疫组织化学(V-IHC)方法检测ALK融合基因表达状态.同时记录患者性别、年龄、初诊时转移部位,ARMs法检测的EGFR基因突变情况等基本资料,总结分析ALK基因融合患者的临床特点,为筛选非小细胞细胞肺癌ALK阳性患者及个体化治疗提供依据.结果 410例晚期肺腺癌患者中Ventana-IHC显示35例ALK阳性,阳性率为8.5％(35/410),同时检测的EGFR突变阳性患者为201例,突变率为49.0％(201/410),ALK基因融合发生率在EGFR阴性肺腺癌患者中占16.7％(35/209).本组ALK阳性患者年龄在29～78岁,中位年龄52岁;男性15例,女性20例;初发时脑转移6例,肝转移7例,肾转移2例,腹膜转移2例;一线经含培美曲塞化疗18例,其中15例进入二线克唑替尼治疗,克唑替尼有效率46.7％,无进展生存期(PFS)6.2月;一线克唑替尼治疗17例,有效率63.3％,PFS 10.8月.结论晚期肺腺癌患者ALK基因融合是继EGFR基因突变后的又一驱动基因,其临床发病年龄更轻,更容易出现脑、肝和肾等部位的转移.【期刊名称】《中国临床保健杂志》【年(卷),期】2019(022)004【总页数】4页(P508-511)【关键词】肺肿瘤;基因融合;肿瘤转移;疾病特征【作者】张萍;唐敏;聂鑫;李琳【作者单位】北京医院肿瘤内科国家老年医学中心,北京 100730;北京医院肿瘤内科国家老年医学中心,北京 100730;北京医院肿瘤内科国家老年医学中心,北京100730;北京医院肿瘤内科国家老年医学中心,北京 100730【正文语种】中文目前肺癌位居全球癌症发病率及病死率的首位，其中85%以上为非小细胞肺癌(NSCLC)，而且腺癌比例已经超过了鳞癌，成为非小细胞肺癌的主要类型。

《新型抗肿瘤药物临床应用指导原则(2019年版)》

《新型抗肿瘤药物临床应用指导原则（2019年版）》为规范新型抗肿瘤药物临床应用，提高肿瘤合理用药水平，保障医疗质量和医疗安全，维护肿瘤患者健康权益，近日，国家卫健委发布了《新型抗肿瘤药物临床应用指导原则（2019年版）》（以下简称《指导原则》）。

《指导原则》指出，抗肿瘤药物临床应用需考虑药物可及性和患者治疗价值两大要素。

抗肿瘤药物临床应用是否合理，基于以下两方面：有无抗肿瘤药物应用指征；选用的品种及给药方案是否适宜。

抗肿瘤药物临床应用应遵循六大基本原则：一、病理组织学确诊后方可使用；二、靶点检测后方可使用；目前，根据是否需要做靶点检测，可以将常用的小分子靶向药物和大分子单克隆抗体类药物分为两大类（表1）。

表1 常用的小分子靶向药物和大分子单克隆抗体类药物三、严格遵循适应证用药；四、体现患者治疗价值；五、特殊情况下的药物合理使用；《指导原则》指出，特殊情况下抗肿瘤药物的使用应当仅限于三级医院授权的具有高级专业技术职称的医师，充分遵循患者知情同意原则，并且应当做好用药监测和跟踪观察。

特殊情况下抗肿瘤药物使用采纳根据，依次是：其他国家或地区药品说明书中已注明的用法，国际权威学协会或组织发布的诊疗规范、指南，国家级学协会发布的经国家卫生健康委员会认可的诊疗规范、指南。

六、重视药物相关性不良反应。

呼吸系统肿瘤用药01 吉非替尼 gefitinib制剂与规格：片剂：250mg适应证：表皮生长因子受体（EGFR）基因具有敏感突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌（NSCLC）。

合理用药要点：1.用药前必须明确有经国家药品监督管理局批准的EGFR基因检测方法检测到的EGFR敏感突变。

2.肿瘤组织和血液均可用于EGFR基因突变检测，但组织检测优先。

3.治疗期间因药物毒性不可耐受时，可在同一代药物之间替换，如疾病进展则不能在同一代药物之间替换。

4.治疗过程中影像学显示缓慢进展但临床症状未发生恶化的患者，可以继续使用原药物；发生局部进展的患者，可以继续使用原药物加局部治疗；对于快速进展的患者，建议改换为其他治疗方案。

人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书

人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书
人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒检测类型：双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体、ABS-ELISA法。

我司人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒，灵敏性高，高效性，原装进口抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA 试剂盒产品齐全，质量可靠。

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人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒操作步骤：
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

6、显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
7、终止：每孔加终止液50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

测定应在加终止液后15分钟以内进行。

1、ELISA 试剂盒使用说明书（5 孔板格式）

ELISA kitInstruction Manual5-plate formatJuly, 2006For research use only.Not for use in diagnostic or therapeutic procedures.ContentsAbbreviations 2 Introduction 3 Contents of the kit 4 Hazard information 4 Materials and reagents required but not provided 4 Working solutions 4 General procedure 5 Coating antibodies 5 Blocking 5 Test samples and standards 5 Biotinylated detector antibodies 5 SPP conjugate 5 Substrate 5 Cytokine standards 6 Storage kit reagents 6 Directions for washing 7 Trouble shooting 7 References 8AbbreviationsAPC Antigen presenting cellsBSA Bovine serum albuminCD Cluster of differentiationCSB Cytokine stabilization bufferDMSO Dimethyl sulfoxideELISA Enzyme linked immunosorbent assayGM-CSF Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor IFN InterferonIL InterleukinMHC Major histocompatibility complexOD Optical densityPB Phosphate bufferPBS Phosphate buffered salinePBST PBS containing 0.05% Tween-20PBST-B PBST containing 0.5% bovine serum albuminSPP Streptavidin-HRP polymerT h T helper subsetTMB TetramethylbenzidineTNF Tumor necrosis factorIntroductionCytokines are a group of regulatory proteins critically involved in many physiological processes such as immune recognition, cell differentiation and cell proliferation. They have been identified in many vertebrate species and are produced by a variety of different cell types. Cytokines are usually produced transiently and locally, acting in a paracrine or autocrine manner. They interact with high affinity cell surface receptors specific for each cytokine or cytokine group and are active at very low concentrations mostly in the picogram range.It is well known now that the type of an antigen-specific immune response largely depends on the selection or preferential activation of defined CD4+T cell subsets (i.e. T h1 and T h2). Activation of these subsets is characterized by the secretion of distinct patterns of cytokines. T h1, but not T h2 cells, primarily secrete IL-2 and IFN-γ while T h2, but not T h1 cells, produceIL-4, IL-5, IL-6, IL-10 and IL-13. Other cytokines, such as TNF-α and GM-CSF are produced by both T h subsets. In addition, the production of IL-12 and IL-10, produced by antigen presenting cells (APC) such as macrophages and dendritic cells, critically contributes to the preferential expansion of T h1- or T h2-type of cells. For instance, early production of IL-12 is considered essential for the development of T h1 cells. On the other hand, the absence or low concentrations of IL-12 and IFN-γ in the early phase of an immune response and concomitant production of IL-4 by cells of the mastcell/basophil lineage or T cells themselves is known to favor the development of T h2 cells. In addition to their regulatory effects on T h subset differentiation, the cytokines released by the two types of T h cells also produce distinct effector functions. For instance, IL-4 and IFN-γhave differential or antagonistic activities on immunoglobulin isotype selection or MHC class II expression. Therefore, the properties of an immune response can be best studied by determining the amounts of cytokines produced by the responding T cells and APC.Contents of the kitItemsQuantity(5-plate format)StorageconditionsCoating antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)Cytokine standard 5 vials 4ºC (39ºF)Biotinylated detector antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)SPP conjugate (Streptavidin-HRP polymer) 1 vial ≤ -20ºC (-4°F)TMB substrate tablets 5 4ºC (39ºF)Substrate buffer capsules 5 Rt*BSA stock solution (10%) 2 vials (24 ml) 4ºC (39ºF)Cytokine stabilization buffer (CSB)** 1 vial (5 ml) 4ºC (39ºF)Tween-20 1 vial (5 ml) Rt*ELISA plates8 Rt*Adhesive cover slips 10 Rt** Room temperature** For serum and plasma samples only; see under “Test samples and standards”Materials and reagents required but not provided•PB stock: dissolve 96.0 g Na2HPO4.2H2O plus 17.5 g KH2PO4in 1.0 L distilled water and adjust pH to 7.4•Sterile distilled water•H2SO4•Dimethyl sulfoxide (DMSO)•Pipetting devices for the accurate delivery of volume required for the assay performance •Plate washer: automated or manual (squirt bottle, manifold dispenser, etc)•Reading device for microtiter-plate set to 370, 450 and/or 655 nmWorking solutions•PBS: add 10 ml PB stock and 8.8 g NaCl to 1 L distilled water. Adjust pH to 7.4.Alternatively, use commercially available liquid PBS from Invitrogen or other suppliers.Do not use commercially available PBS tablets for the preparation of the coating solution (the filler in the tablets interferes with the coating process).•PBST: 0.5 ml Tween-20 dissolved in 1 L PBS.•PBST-B: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 38 ml PBST.•Blocking buffer: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 18 ml PBS (for 1 ELISA plate). •Substrate buffer: the contents of one capsule is dissolved in 100 ml distilled water (takes approximately 5 minutes). For optimal performance, the buffer solution should be used within60 minutes.•Stopping solution: 2 M H2SO4TMB (tetramethylbenzidine) and sodium perborate (in substrate buffer)General procedureCoating antibodies•Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 250 µl of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. To coat 96 wells of an ELISA plate 50 µl is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 50 µl; see "Storage kit reagents") and added to 5 ml PBS. Mix gently.•Add 50 µl of diluted antibody solution to each well of the ELISA plate and fill up to 100 µl with PBS.•Seal the plate to prevent evaporation.Incubate overnight at 4ºC or alternatively 1 to 2 hours at 37ºC.Blocking•Remove the coating antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Add 200 µl of blocking buffer.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Test samples and standards•Remove the blocking buffer but do not wash.•Add 1/20 volume of CSB to serum or plasma samples but not to other samples such as cell culture supernatants; CSB inhibits the degradation of cytokines in pure serum or plasma. •Dilute standards and test samples in an appropriate diluent (see “Cytokine standards”). •Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 2 hours or overnight at 4ºC.Biotinylated detector antibodies•Remove test samples/standards and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B.Mix gently.•Add 100 µl of diluted antibody solution to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.SPP conjugate•Remove detector antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the contents of the vial by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial.Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 1 minute at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B. Mix gently.•Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Substrate•Remove SPP conjugate and wash the wells at least six times with PBST.•Dissolve one TMB tablet in 1.0 ml DMSO (vortex at high speed for 5 minutes for complete dissolution)and than add 10 ml substrate buffer.•Mix thoroughly and immediately dispense 100 µl into each well. Leave the plate on the laboratory bench at room temperature (color development between 10 and 30 minutes).The substrate produces a soluble end-product that is blue in color and can be read spectrophotometrically at 370 or 655 nm. The reaction can be stopped by adding 50 µl of2 M H2SO4 (resulting in a yellow solution which can be read at 450 nm).Cytokine standardsFor maximum recovery, the vial with lyophilized cytokine standard should be reconstituted in 0.5 ml distilled water and allowed to stand for 1 minute at room temperature. Thereafter, the reconstituted cytokine standard (stock solution) is placed on melting ice and is immediately diluted as indicated below (preferentially within one hour). Use vials with cytokine standards only once.Please note that temperature of buffers and standard solution(s) should now be kept at 0-4ºC until use in the ELISA.The total amount of cytokine standard is indicated on the label of the vial (ng/vial). After reconstitution in 0.5 ml water, the concentration (ng/ml) will become twice the amount on the label [e.g. amount on label is 4.8 ng/vial; after reconstitution, the concentration becomes9.6 ng/ml = 9600 pg/ml].The standard stock solution is diluted to 320 pg/ml in PBST-B (highest concentration cytokine to be used in the standard range).The linear region of the cytokine standard curve is now obtainable in a series of two-fold dilutions in PBST-B ranging from 320 to 5 pg/ml. Always include a blank control (PBST-B only) in the standard range.Before establishing the standard curve, the OD value of the blank control (OD.bl) is subtracted from the measured OD values of the different standard solutions. The standard curve is now plotted as the standard cytokine concentration versus the corresponding (measured) OD value minus OD.bl. In addition, the actual OD values of the test samples are determined by subtracting OD.bl from the measured OD values.The concentration of the cytokine in the test sample can then be interpolated from the standard curve. It is useful to prepare a series of dilutions of the unknown test sample to assure that the OD will fall in the linear portion of the standard curve.Note 1: The OD value measured for the blank control (OD.bl) must be below 0.2.Note 2: for measuring cytokines in cell culture supernatant, samples should be diluted inPBST-B. However, when measuring cytokines in pure serum or plasma, the diluent for the standard and blank control should preferentially be control serum or plasma originating from the same species.Storage kit reagentsThe vials with lyophilized coating antibodies and biotinylated detector antibodies can be safely stored in a refrigerator for a defined length of time (expiry date indicated on the vial). After reconstitution, the antibodies remain fully active for minimal 6 months at 4ºC (39ºF) when kept sterile. However, it is strongly recommended to divide the reconstituted antibody solutions into small aliquots for single use. These aliquots should be stored at ≤-20ºC. Under these conditions the antibodies are stable for at least one year.Upon arrival, the vial with lyophilized SPP conjugate should be stored at ≤ -20°C. Storage of the vial at room temperature or at 4ºC for several months may lead to lower OD readings in the ELISA. After reconstitution, the SPP solution is stable for 2 months at 4°C but rapidly looses activity when stored at room temperature. It is strongly recommended that after reconstitution, the solution is immediately divided into small aliquots for single use and stored at ≤-20°C. Under these conditions SPP is stable for minimal 12 months.Directions for washing•Incomplete washing will adversely affect the assay. All washing must be performed with wash buffer (PBST).•Washing can be performed manually as follows: completely aspirate the liquid from all wells by gently lowering an aspiration tip (aspiration device) into each well. After aspiration, fill the wells with at least 300 µl wash buffer. Let soak for 10 to 20 seconds, then aspirate the liquid. Repeat as directed under "General procedure". After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•Alternatively, the wash buffer may be put into a squirt bottle. If a squirt bottle is used, flood the plate with wash buffer, completely filling all wells. After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•If using an automated washing device, the operating instructions should carefully be followed.Trouble shooting•Poor consistency of replicates can be overcome by increasing the stringency of washes particularly after the incubation step with detector antibody.•High values of the blank control (optical density > 0.2) can be overcome by shortening the incubation time with the substrate solution or is caused by improper washing procedures. •Inconsistent replicates may be due to cross-contamination of wells by improper pipetting procedures.•If no signal is observed in the wells with the standards•try a new vial with cytokine standard•check the pH of the substrate solution (between 5.0 and 5.5)•verify whether the antibody, SPP conjugate and standardpreparations were properly diluted•Avoid sodium azide in wash buffers and diluents, as this is an inhibitor of peroxidase activity.•Storage of reconstituted SPP at room temperature for several days can lead to a significant loss of SPP activity and consequently low OD readings.ReferencesBooks:•Practice and theory of enzyme immunoassays 1985In: Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, Vol.15 (eds R.H.Burdon and P.H. van Knippenberg)Science Publishers bv, Amsterdam, The Netherlands•ELISA and other Solid Phase Immunoassays.Theoretical and Practical Aspects 1988(eds D.M.Kemeny and S.J.Challacombe)John Wiley & Sons Ltd, Chichester, UK• A practical guide to ELISA 1991(ed D.M.Kemeny) Pergamon Press, Oxford, UKReview of U-CyTech ELISA references:Human cytokines:•Arend, S.M. et al. 2000 J. Infect. Diseases 181: 1850-1854 •Demirkiran, A. et al. 2006 Liver Transpl. 12: 277-284 •Hoogendoorn, M. et al. 2005 Clin. Cancer Res. 11: 5310-5318 •Tang, Y-M. et al. 2006 World J. Gastroenterol. 11: 4575-4578•de Waal, L. et al. 2004 J. Virol. 78: 1775-1781Monkey cytokines:•Fallon, P.G. et al. 2003 J. Infect. Dis. 187: 939-945•Hartman, G. et al. 2005 Vaccine 23: 3310-3317•Kornfeld, C. et al. 2005 J. Clin. Invest. 115: 1082-1091 •Mascarell, L. et al. 2006 Vaccine 24: 3490-3499•Polakos, N.K. et al. 2001 J. Immunol. 166: 3589-3598•de Swart, R.L. et al. 2002 J. Virol. 76: 11561-11569Mouse cytokines:•Eijkelkamp, N. et al. 2004 J. Neuroimmun. 150: 3-9•Kavelaars, A. et al. 2005 J. Neuroimmun. 161: 162-168•Vroon, A. et al. 2005 J. Immunol. 174: 4400-4406Rat cytokines:•Dieleman, J.M. et al. 2006 Life Sci. 79: 551-558•Pacheco-López, G. et al. 2005 J. Neurosci. 25: 2330-2337•Sajti, E. et al. 2004 Brain Behav. Immun. 18: 505-514•Teunis, M.A.T. et al. 2002 J. Neuroimmun. 13: 30-38。