厦门大学-HCY-染色体畸变-小鼠骨髓细胞染色体畸变讲义
染色体畸变与染色体病讲课文档
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2）先天性卵巢发育不全症（ Turner综合征） 临床表现： 性发育幼稚，身材矮小(120m140m)，肘外翻，上眼睑下垂，后 发际低，50%有蹼颈，乳间距宽， 皮肤色素增多。性腺为纤维条索状 ，无滤泡，子宫、外生殖器和乳房 幼稚型，智力正常或轻度障碍，常 因原发性闭经就诊
患者核型多为47，XXY，约有1／3的患者核型 为46，XY／47，XXY。如果患者为嵌合体，其 一侧可具有正常睾丸而有生育能力。
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2）先天性卵巢发育不全症（ Turner综合征） 1938年美国的内分泌专家Henry Turner首次描述本 病，故又称为Turner综合征 发病率：发病率约为女婴的1/5000～1/3500。约98％ 的胚胎于胎儿期自然流产，故本病发病率低。
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2）先天性卵巢发育不全症（ Turner综合征）
核型：
染色质检查： X染色质和Y 染色质均阴 性
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3）XYY综合征 1961年Sandburg首次报道，发病率为 1临/9床0表0，现：
表型一般正常，身材高大（超过 180cm ），偶见尿道下裂、睾丸发 育不良、生育力下降，但大多数可 以生育。具有攻击倾向和反社会行 为。在监狱中调查发现本病患者较 多。
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件
“U”“V”。
五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
用吸管吹打骨髓细胞使其分散加入预温37的低渗液至8ml将离心管至37水浴锅中保温至少30min后取出使细胞充分吸水膨胀
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察
一、实验目的
• 初步掌握（小鼠）骨髓细胞染色体标本的制备原理 和方法
• 巩固显微镜的操作技术 • 了解小鼠的染色体形态特征
二、实验原理
染色体是组成细胞核的基本物质，是基因的载体。 染色体异常也称染色体发育不全。目前已确认染色 体病综合征100余种，智力低下和生长发育迟滞是 染色体病的共同特征。
低渗液(5ml)冲洗至离心管内
收集骨髓细胞
注意：剪去少量骨质，避免骨髓细胞丢失；擦净血迹和肌 肉细胞以免影响观察；用0.075 mol/L KCl 收集足量细胞，反 复冲洗直到股骨发白。
颈椎脱臼法处死小鼠
3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温
37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中， 保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。
染色体畸变分析
动物选择 选用18g~24g雄性健康小鼠，每组6~10只。
染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。
每只小鼠分析100个骨髓细胞。
固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。
每只小鼠分析100个骨髓细胞。
染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。
毒理学基础实验课
七、结果评价
毒理学基础实验课
细胞畸变率%） （分 有析 染染 色色 体体 畸的 变细 的胞 细1总 胞00数 数 % 染色体畸变率 %）（ 分畸析变的染染色色体体总总 数 10数0%
八、组织分工
毒理学基础实验课
学习动物骨髓细胞标本制作。 了解动物体内染毒及染色体畸变类型。
毒理学基础实验课
注射秋水仙素
毒理学基础实验课
骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心 10min，弃去上清。
低渗：0.4%氯化钾水溶液5ml，37℃低渗30min，1000r/min，离心10min， 弃去上清。
固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min 后，以1000r/min离心10min，弃上清。
了解动物体内染毒及染色体畸变类型。
具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。
实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
5．室温低渗 加入0.4％KCl溶液1ml，轻微吸放混匀细胞，然后 将离心管在室温下低渗20min。 6．Carnoy固定液预固定 低渗结束后在离心管中加入0.5ml Carnoy固定液进 行预固定，用吸管轻微混匀，可避免细胞结块， 室温固定5分钟后，混匀以2000 rpm离心10min。 7． Carnoy固定液重新固定 弃去上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇： 冰醋酸(3:1)固定液1.5ml，用滴管小心将细胞团 块打散，继续固定10分钟。 8．2000 rpm离心10分钟，留少量固定液后用滴管 小心将细胞团块打散，制成均匀的细胞悬液。
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体制备
小鼠骨髓细胞染色体制备
染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。
一、材料准备
1. 小鼠骨髓细胞
2. 10% 碘酒
3. 0.075M KCl 溶液
4. 甲醛溶液（4%）
5. 甲基绿染液
6. 预热37°C恒温水浴
7. 玻片和载玻片夹
二、实验步骤
1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。
2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。
3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。
4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机
以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
医学遗传学本科课件染色体畸变课件(一)
医学遗传学本科课件染色体畸变课件(一)
医学遗传学是生物医学的一个重要分支，关注人类疾病和健康的遗传
基础。在医学遗传学本科课程中，染色体畸变是一个重要的内容，下
面我们来探讨一下相关的课件。
一、课件背景
人类细胞核内的基因组是由23对染色体构成的，正常情况下应该是46条染色体。其中，每种染色体都应该有一条来自母亲，一条来自父亲。但有时这种染色体的数目和构成会发生异常，包括染色体数量异常和
染色体结构异常，统称为染色体畸变。
二、课件内容
1. 染色体数量异常
染色体数量异常包括单体体、三体体、异倍体和混合体四种类型。课
件详细介绍了四种类型的发生原因、表现和诊断方法。
2. 染色体结构异常
染色体结构异常包括缺失、重复、倒位、易位和多倍体等五种类型。
课件详细介绍了各种类型的发生原因、表现和诊断方法。
3. 染色体畸变的临床疾病
染色体畸变与许多临床疾病密切相关，如唐氏综合症、爱德华氏综合症、帕特劳综合症等。课件列举了常见的染色体畸变临床疾病及其表
现和诊断方法。
4. 染色体畸变的遗传咨询
染色体畸变可遗传，需要进行遗传咨询。课件介绍了遗传咨询的目的、方法及注意事项。
三、课件亮点
1. 视觉效果好
课件采用了大量的图片和动画，直观生动地展示了染色体畸变的发生
机制和表现。
2. 知识点详尽
课件详细介绍了染色体畸变相关的知识点，包括染色体数量异常、染
色体结构异常、临床疾病和遗传咨询等方面。
3. 帮助学生理解
课件通过案例分析、练习题等方式，帮助学生巩固和理解知识点。
四、总结
医学遗传学本科课件染色体畸变课件是一份十分详尽的教学资料，通
《染色体畸变》PPT课件
❖ 2/5染色体平衡易位携带者—具有原发性易位但表型正 常的个体。
❖ 其核型为：46，XX(XY)，-2,-5，+der(2)，+der(5)， t(2；5)(q21；q31)
罗伯逊易位（rob）
发生于D、G组近端着丝粒染色体之间的易位，着丝 粒发生断裂后，长臂或短臂在着丝粒处重接或融合成新 染色体；是染色体重组的一种主要形式，是整臂易位的 一种特殊形式。
环状染色体
染色体结构畸变
染色体结构畸变的类型：
1. 缺失(deletion, del) 2. 倒位(inversion, inv) 3. 易位(translocation, t) 4. 环状染色体(ring chromosome, r)
5. 等臂染色体(isochromosme, i):
染色体断裂发生在着丝粒区，使着丝粒横断，结果 使两条姐妹p或姐妹q分别各自成为等臂染色体。
8. 重复(duplication, dup):
同一染色体某一区段含两份或两份以上（发生在两条同源 染色体或两条姐妹染色单体上）(部分三体）
染色体结构畸变描述方法
简式：对染色体结构改变，只用其断裂点来表示 ❖ 染色体总数→性染色体组成→畸变类型符号→重排染
色体序号→断裂点的区带号 ❖ 如46，XX，del（5）（p15）
厦门大学-实验五.小鼠骨髓细胞微核试验(讲义)
1小鼠骨髓细胞微核试验
(Bone marrow cell micronucleus test)
⏹
指存在于细胞中主核之外的一种颗粒，大小相当于细胞直径的1/20~1/5，呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。
2
微核(micronucleus ，MN)
细胞核微核
⏹
细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝粒断片/环，也可以是纺锤体受损而丢失的整个染色体。
⏹
它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞质内而形成，由于比核小得多故称微核。
⏹
一般认为微核是细胞受到染色体断裂剂或纺锤体毒物作用的结果。
3微核(micronucleus ，MN)
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
⏹
嗜多染红细胞(polychromatic erythrocyte ，PCE)细胞质内仍含有核糖体的未成熟红细胞。
4
⏹
正染红细胞(normochromatic erythrocyte ，NCE)核糖体已消失的成熟红细胞。
为何选择PCE (polychromatic erythrocytes)
⏹
PCE ：指在红细胞成熟之前，最后一次分离后数小时将主核排出的细胞，而微核仍保留在细胞质中。
⏹
微核可以出现在多种细胞，但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区别。
5为何选择PCE ？
⏹PCE ：Giemsa 染色呈灰蓝色(胞质内含核糖体)
⏹
NCE(正染红细胞/成熟红细胞，normochromatic erythrocyte ，NCE))：淡桔红色
医学遗传学第九章 染色体畸变课件
①相互易位（reciprocal translocation, rcp or t）是两条染色体同时发生断裂， 断片交换位置后重接。形成两条衍生染色 体（derivation chromosome, der）。当 相互易位仅涉及位置的改变而不造成染色 体片段的增减时，则称为平衡易位染色体。
二、非整倍性改变
一个体细胞的染色体数目增加或减少了一 条或数条，称非整倍体（aneupliod），这 是临床上最常见的染色体畸变类型。
发生非整倍体改变后，会产生亚二倍体 （hypodiploid）、超二倍体 （hyperdiploid）等。
亚二倍体（hypodiploid） 体细胞中染色体数目少了一
嵌合体
一个个体内同时存在两种或两种以上核型 的细胞系，这种个体称嵌合体（mosaic）。 如46，XX/47，XXY、 45，X/46，XX、 45，X/47，XYY、 45，XY，-21/46，XY/47，XY，+14等。
嵌合体可以是数目异常之间、结构异常之 间以及数目和结构异常之间的嵌合。
如图第1号染色体长臂的2区1带发生断裂，其远侧段（q21→qter） 丢失。这条染色体是由短臂的末端至长臂的2区1带所构成。
这种畸变的简式描述为：46，XX（XY），del（1）（q21） 详式描述为：46，XX（XY），del（1）（pter→q21:）
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实验流程总图
收获细胞：处死，取股骨， 5ml PBS 冲 洗 ， 1500r/min×5min，弃 上清，轻轻倒置沥干
2-4h前腹腔注射秋水仙素
24h前腹腔注射受试物
24.5h称重、分组
阅片：低倍镜 找良好视野， 换油镜观察
重要
KCl需要 提前预热
低渗：轻柔打散，加入0.070mol/L KCl 6ml，37℃低渗30-35min，第 10min，以枪头吹气泡的方式再次混 匀细胞悬液，加2ml固定液， 1500r/min×5min，弃上清，余 0.2ml液体
60ml滴瓶23
2瓶，香柏油、拭镜液
镜头纸
1本，全班
实验报告
• 1. 实验目的意义； • 2. 实验动物情况、受试物名称、浓度； • 3. 实验动物体重、随机分组、注射体积和时间； • 4. 实验操作步骤； • 5. 记录染色体畸变的种类和计算每张片子、每组平均畸变率； • 6.讨论实验中关键步骤和细节对结果的影响。
本试验：PBS
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1.移液器吸取5mlPBS置于 离 心管中 2. 注射器反复吸取PBS冲洗 3. 第二只股骨用同一PBS
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滴片
自-20冰箱60%乙醇溶液中，取出玻 片
25-40cm高度滴片，玻片倾斜30° 每个标本制备2-3张片 染 滴自做染色，取然好色立吉晾（标即姆干同记取萨（微B染液可 核液，以 试A顺液验借序，）助滴滴吹加加风1载机6滴玻），片吸1 耳 水阅观背球片察面吹：记冲匀一录洗AB只畸载液小变玻，鼠种片静找类，置到，晾102计干m00算in分—畸裂—变相自率，来
固定：4ml固定液轻柔混匀，室温静 置15min，1000r/min离心10min， 再重复一次，留约0.1-0.2ml液体
制片染色：混匀细胞，悬滴于冰冻载 玻片，晾干，姬姆萨快速染色试剂盒 10 染色，清洗晾干
体重、分组和注射体积表
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腹腔注射要点？
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尽量向脊 柱处剪断
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也可用：滤纸
小鼠骨髓细胞染色体畸变
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毒理学动物实验的背景
毒理学——实验学科——整体动物实验 原则：对实验动物的作用可以外推于人；
暴露剂量(高剂量阳性模型)； 暴露途径(与人实际相同/相似)。
应用：毒性评价试验 一般毒性试验：急性毒性，局部毒性，慢性毒性等；
特殊毒性试验：致癌，致畸，致突变等
机制研究(转基因动物)
2.染1. 毒共与2取0只样昆时明间雌鼠（20g左右） 一般染毒一次或多次，多次更合理。末次染毒后24h处死
动物，2. 阳收性获物细：胞环磷酰胺，40mg/kg 3. 剂受量试物：丙烯酰胺1/8, 1/4, 1/2 LD50 (180mg/kg) 以最最大3. 一高给次剂药染量量毒为或1最人4:大使00耐用、受剂腹剂量腔量的注或5射03-，100%204倍-h80。后%处L死D小50 。鼠低毒物质应 射溶设剂4.分3或-组5生个：理剂分盐量5水组组；，每阳剂组性量4只对阔小照度鼠注在，射10230名0--15学000m生0或g共/k更一g环大只磷。酰阴胺性，对经照腹注 腔注射1或2次。 4. 给药途径 原则上采用与人体接触化学毒物相同的途径。
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乳胶手套
1副/人
器具
酒精棉球及干棉球 若干
搪瓷盘
1个/人
直头眼科剪
1把/人
眼科镊
1把/人
动物天平3台；
滤纸 10ml离心管
若干 1支/人，PBS用
50ml离心管
1支/组，固定液新鲜配制
光学显微镜，20台； 离心管架
15ml离心管
水浴锅一台； 15ml离心机2台； 100-1000ml移液器，
配枪头一盒
100ml量筒
1支/组，配固定液
1ml注射器
1人/支
载玻片（冰片） 45张，60%酒精浸泡，-20℃备用
胶头滴管
2支/组
玻璃染色缸及片架 2个，浸泡冰片用
晾片架
wk.baidu.com
一组学生共用一个，全班5个
玻璃铅笔
1支/组
25ml滴瓶
2瓶/组，A\B液
洗耳球
3个/组，共12个
120mm培养皿 2个/组，共8个
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实验流程总图
收获细胞：处死，取股骨， 4ml PBS 冲 洗 ， 1500r/min×10min，弃 上清，轻轻倒置沥干
2-4h前腹腔注射秋水仙素
24h前腹腔注射受试物
24.5h称重、分组
阅片：低倍镜 找良好视野， 换油镜观察
重要
KCl需要 提前预热
低渗：轻柔打散，加入0.070mol/L KCl 6ml，37℃低渗30-35min，第 10min，以枪头吹气泡的方式再次混 匀细胞悬液，加2ml固定液， 1000r/min×10min，弃上清，余 0.2ml液体
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染色体皱缩 形态明显
5
小鼠染色体数目、核型
6
端着丝粒染色体
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实验目的及意义
目的：
掌握动物骨髓细胞染色体标本制作方法 了解动物体内染毒及染色体畸变常见类型
意义：
检测受试物导致动物染色体畸变的能力和 畸变类型
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实验动物选择与处理
1.动物 一般选用成年大鼠或小鼠，每组6-10只，最好雌雄各半；
毒理学动物实验进展和趋势： 转基因动物模型
微核试验 染 色体畸变试验 精子畸形试验
从体内试验(in vivo) 体外试验(in vitro) Ames试验，等
从整体动物试验3R替代试验
2
微核试验回顾——
1 讨论微核试验结果：重点（数了PCE/NCE、多少PCE有微核） 2 骨髓采集问题 3 染色问题，比值偏高 4 固定的问题，细胞数量太少 5 针对结果要进行分析 6 思考题要认真对待
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染色体畸变试验原理
观察染色体形态结构和数目改变称为染色体畸变分析，又称 细胞遗传学试验。
优点：将观察细胞停留在细胞分裂中期相，用显微镜直接检 查染色体畸变和染色体分离异常。可以观察到裂隙、断裂、 短片、无着丝粒环、染色体环、双或多着丝粒染色体、染色 体粉碎等。
缺点是分裂中期相分析耗时并且需要熟练技巧
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阅片观察
低倍 镜
高倍 镜
油镜
低倍镜下选择分散良好，细胞未破裂的中期分 裂相，油镜下观察并记录染色 结构异常和数 目异常细体
胞。
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染色体数目计数
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试剂
环磷酰胺：40mg/kg （2mg/ml） 秋水仙素：4mg/kg (0.2mg/ml)
缓冲液：PBS（pH7.4） 低渗液： 0.07mol/L KCl 固定液：甲醇3份＋冰醋酸1份（30ml甲醇+10ml冰醋酸） 染色剂： 姬姆萨快速染色试剂盒