细菌鞭毛染色及活菌运动观察
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
观察和判断细菌鞭毛的方法
电子显微镜直接观察 根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长）
光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径 变粗，然后再进行染色。 暗视野显微镜或相差显微镜观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
五、注意事项
1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。 2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时 动作要柔和，因为鞭毛易脱落。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
六、视频
细菌鞭毛染色法
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
七、作业与讨论
1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形 态。 2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应 掌握哪些环节？注意些什么问题？ 3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补 记）。 4、讨论实验成败的原因。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确
多进行基本技能的训练及实验指导
启发式教学（荚膜/芽孢染色为例）
鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加热， 用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
实验六
(2)悬滴法 (a)在洁净凹载玻片周围涂少许凡士林。 (b)在盖玻片中央滴一小滴菌液，或用接种环取 1—2环菌液置于中央。 (c)将凹玻片反转，使凹窝中心对准盖玻片上的 菌液滴，液滴不得与凹玻片接触，以接种环柄轻压 使盖玻片与凹玻片粘在一起，液滴处于封闭的小室 中，防止液滴干燥和气流的影响。 (d)小心将凹玻片翻转过来，使菌滴仍悬浮在盖 玻片下和凹窝中心。 (e)先用低倍镜找到悬滴边缘，再用高倍镜观察。 观察时光线要调得暗一些。
五、实验报告
接物镜 接物镜倍 目镜测微尺 镜台测微尺 数 格数 格数 低倍镜 高倍镜 油 镜
接目镜放大倍数： 接目镜放大倍数：_______________
1．结果 (1)将目镜测微尺校正结果填人下表：
目镜测微尺每 格代表的长 度／pm
五、实验报告
宽 长 微生物 目镜测微 名称 尺每格 (2)将各菌测定结果填人 下表： 代表的 长度 /µm 目镜测 宽度／ 目镜测 长度 µm /µm 微尺 微尺 格数 格数 大肠杆 菌 酿酒酵 母 金葡球 菌 菌体大 小范 围 /µm
三、实验器材 菌种：大ห้องสมุดไป่ตู้杆菌。 仪器或其他用具 、凡士林、凹载玻片、 盖玻片、镊子、显微镜等。
四、操作步骤 (1)压滴法 (A)制片：在载玻片上加一滴生理盐水，挑取一环 菌液与水混合，加一环万分之一的美蓝水溶液混匀。 用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液， 然后将整个盖玻片慢慢放下，注意不要产生气泡。 (B)镜检：先以低倍镜找到标本，再用高倍镜观察， 观察时光线要调得暗些。 有鞭毛细菌可做直线、波浪式或翻滚运动，两个细 胞之间出现明显的位移，区别与布朗运动。
细菌的运动性观察
一、目的要求 学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性 二、实验原理
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
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暗视野显微镜或相差显微镜观察
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
细菌运动力观察实验报告
实验七细菌运动力观察[实验目的]1、了解检查细菌运动力的方法。
2、掌握悬滴法检测细菌的运动力。
[实验原理]鞭毛是细菌的一种特殊结构，是细菌运动器官。
细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定中的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法较复杂烦琐。
采用悬滴法或水封片法（压滴法）直接在光学显微镜下检查活菌是否具有运动能力来判断细菌是否具有鞭毛则快速、简便。
具有运动能力的细菌，可以独立运动，在显微镜下观察时，细菌的真正运动(自动运动)表现为能离开原来位置，不断改变方向的自由地游动。
水的分子运动(布朗运动)也能见于细菌个体，但只能使其在原地摆动，不能远离原来的位置移动。
这种情况，都是外力作用的结果，不是细菌本身的真正运动。
检查细菌的运动力，应用幼年培养物，最好刚从温箱中取出，并在温暖的环境下从速进行。
此外，这种方法也可用来检查微生物对各种化学物质的趋化性。
[实验材料]1、菌种2003Y1，2003Y2(为本实验室分离的菌种)的肉汤培养物2、仪器及其他物品显微镜、接种环、酒精灯、凹玻片、盖玻片、蒸馏水等[实验内容]1、悬滴检查法采用不染色活菌标本来检查其运动能力。
a.不染色标本片的制备取洁净盖玻片一张，用接种环各勾取蒸馏水1-2环于盖玻片四个角，灭菌接种环，再勾取2003Y1或2003Y2幼龄肉汤培养物1-2环于盖玻片中央；另取一干净凹玻片，凹面朝下对角扣于盖玻片上，再将玻片翻转，使菌液液滴向下，即可进行镜检。
若为固体培养物，则需在盖玻片中央先滴上一小滴生理盐水或透明肉汤，再用接种环取待检固体培养物少量(不要过多)，混匀于液滴内即可。
盖玻片四角的蒸馏水起到粘附（使凹玻片和盖玻片紧密吸附）、防止液滴干燥的目的。
b. 镜检因细菌无色透明，与背景无明显的色差，故在观察时视野要稍暗。
10倍镜对光后调整光线使视野变暗。
放上悬滴标本片，先用低倍镜找到液滴边缘（因表面张力的作用，液滴边缘有大量的菌体，便于观察），然后再转换高倍镜对焦观察，一般不必使用油镜观察，必须用时，注意防止压坏盖玻片。
细菌鞭毛染色及运动性鉴定
细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。
鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。
故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。
2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。
4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。
2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。
2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。
4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。
在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。
主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察 (2)
四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥； 2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面） 2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。 3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
2、运动性的观察 （1）、压滴法 a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍） （2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征 2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
实验四、细菌鞭毛染色法 及运动性观察
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。
实验三__鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
注意事项
1、检查细菌运动的载玻片和盖玻片都要洁净无 、 否则将影响细菌的运动。 油，否则将影响细菌的运动。 2、制水封片时菌液不可加得太多，过多的菌液 、制水封片时菌液不可加得太多， 会在盖玻片下流动， 会在盖玻片下流动，因而在视野内只见大量的细 菌朝一个方向运动， 菌朝一个方向运动，从而影响了对细菌正常运动 的观察。 的观察。 3、若使用油镜观察，应在盖玻片上加香柏油一 、若使用油镜观察， 滴。
结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色 结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色, 一般呈波浪形
（二）细菌的运动性观察
悬滴法： 悬滴法： 1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加 制备菌液： 制备菌液 在幼龄菌斜面上，滴加3-4滴 滴 生理盐水，制成轻度混浊的菌悬液。 生理盐水，制成轻于盖玻片的中央， 滴加菌液 滴菌液于盖玻片的中央 也可用接种环挑取一环菌液于玻片中央， 也可用接种环挑取一环菌液于玻片中央， 并用记号笔在菌液的边缘做一记号， 并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便 在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。 在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
载片上滴一滴蒸馏水→ 载片上滴一滴蒸馏水 → 菌种斜面的冷凝水处取 在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下→ 一环菌 →在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下→将 载片稍倾斜， 使菌液散开即可（ 切勿涂抹） 载片稍倾斜 ， 使菌液散开即可 （ 切勿涂抹 ） → 自然风干→ 固定。 自然风干→ 固定。
4、 硝酸银染色： 、 硝酸银染色：
四、实验方法
（一）鞭毛染色 硝酸银染色法： 硝酸银染色法：
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用 清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片， 清洗玻片 新的。 新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中 洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， 煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾 煮沸 。取出稍冷后用自来水冲洗、 再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出 干，再放入浓洗液中浸泡 天 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将 水沥干后，放入95%乙醇中脱水。 乙醇中脱水。 水沥干后，放入 乙醇中脱水
细菌鞭毛染色及活菌运动观察
微生物实验报告——细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要关键词前言实验目的实验原理A.细菌鞭毛染色法的基本原理B.压滴法观察活菌运动的基本原理实验器材实验内容(一)压滴法观察活菌运动(二)细菌鞭毛染色实验结果参考文献报告编写人：张行润生命科学学院生科四班200900140177 细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。
压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。
关键词鞭毛（flagellum）细菌（bacteria）鞭毛染色法（flagellum staining）光学显微镜（Optical microscope）压滴法（Pressure drop method）前言细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。
但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。
于是，便产生了鞭毛染色法。
1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
但是试剂的稳定性低，容易变质。
2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。
该法将媒染剂分为A、B两种。
A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。
这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。
细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察
细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察摘要采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在光学显微镜下观察其菌体形态和鞭毛的长短、数量、着生位置，得到清晰的染色结果。
并采用压滴法观察细菌的运动性。
关键词细菌；鞭毛；硝酸银染色法；压滴法1 前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。
细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。
根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，用电镜才能观察。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu 氏法等多种鞭毛染色的方法。
鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
2 材料与方法2.1材料2.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）2.1.2染色液和试剂硝酸银染色液、香柏油、二甲苯、0.01％美兰水溶液。
2.1.3仪器及其他载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、镊子、接种环，显微镜。
2.2方法2.2.1硝酸银染色法1）清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。
取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。
实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
一、实验目的：
1.学习细菌的鞭毛染色法,观察细菌鞭毛的 形态特征; 2.学习用悬滴法观察细菌的运动性.
二、实验原理：
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子 显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在 普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但 其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉 积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材
1. 菌种：培养12-16h小时的普通变形杆菌。 2. 标本片：周鞭毛（伤寒杆菌） 3. 试剂：硝酸银鞭毛染色液、生理盐水、蒸馏水、 香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 水纸、接种环，显微镜等。
四、实验方法
（一）鞭毛染色 硝酸银染色法：
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用 新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中 （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， 煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾 干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将 水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
鞭毛
细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、目的要求：1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征2、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术3、学习压滴法观察细菌（活细胞）运动性二、实验器材：1.菌种来源枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物2.溶液和试剂稀释美蓝溶液，质量分数为95%的乙醇水溶液，蒸馏水，硝酸银染液A液和B液3.仪器和其它用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸三、基本原理：1.压滴法观察活菌运动鞭毛是细菌的运动器官，在水中可以高速旋转推动菌体前行，细菌的游动不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美蓝等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2.细菌鞭毛染色法简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛、芽孢和荚膜，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10-30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
四、实验步骤：（一）压滴法观察活细菌1.洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗2.涂片在载玻片上滴加少量蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种接种到水滴中蒸馏水稍显浑浊即可。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。
下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。
一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。
这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。
步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。
2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。
3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。
4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。
5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。
6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。
7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。
二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。
这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。
4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。
三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。
4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。
5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。
悬滴法观察细菌的动力实验报告
悬滴法观察细菌的动力实验报告
鞭毛是细菌的运动器官，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。
一般细菌的鞭毛只能用电子显微镜观察，进行鞭毛染色后可用普通光学显微镜观察。
细菌运动性的观察可用压滴法和悬清法。
观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强。
细菌和周围的液体难以区分。
玻片的准备、菌种材料的准备同鞭毛染色实验。
取洁净凹载玻片，在其四周涂少许凡士林
在盖玻片中央滴一小滴菌液。
为便于观察时寻找菌液位置，可用记号笔在菌液周围画上记号。
菌液不能加得太多，为了便于观察，也可用接种环挑取一环菌液于盖玻片中央
将凹玻片的凹槽对准盖玻片中心的菌液，井轻轻盖在盖玻片上。
轻轻按压使盖玻片与凹玻片粘合在一起，把液滴封闭在小室中。
翻转凹玻片，使菌液滴悬在盖玻片下并位于凹槽中央
先用低倍镜找到标本，并将液滴移至视野中央，然后用高倍镜观察。
若用油镜观察，盖玻片厚度不能超过 0.17 mm。
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
1、绘图表示所观察P到ow的e细r B菌ar菌体及鞭毛形
态。
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2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应 掌握哪些环节？注意些什么问题？
3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补 记）。
4、讨论实验成败的原因。
开放设计性实验的准备
1. 分组 （每一排为一组，5-6人，推选1人为组长，负责本组协调，每个
Staphyloccocus aureus） 中国专业PPT设计交流论坛 2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等
清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡 染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林，
NaOH） 染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
四、实验方法
（一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基
斜面的顶部，静置10mPionw，e同r 时Ba可r 双手搓动试管。
2、制片：用移液枪取约中国1专0业P0PuT设l计菌交流液论坛于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。
3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加热，
直径10～20nm
观察和判断细菌鞭毛的方法
电子显微镜直接观察
Power Bar
根据培养特征判断：半中国固专业体PPT穿设计刺交流、论坛菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长）
光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径
变粗，然后再进行染色。
暗视野显微镜或相差显微镜观察
微生物实验问题与答案
微生物实验问题及答案一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。
2、数值口径的表达公式？答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。
3、显微镜数值口径及分辨力的关系？答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它及光的波长成反比，及数值口径成正比。
4、油镜的使用及普通物镜有何不同？答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜及香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。
5、使用油镜时应特别注意什么？答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。
6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。
利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。
都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。
病毒那就要用电子显微镜看了。
二、微生物染色1、单染色的原理是什么？答案：主要基于微生物细胞能及各种染料进行不同程度地结合。
实验细菌鞭毛染色及其运动的观察
在显微镜下观察活细菌的运动性，也可以初步判断细菌 是否有鞭毛。细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。
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三、器材
1、菌种 大肠杆菌、四联球菌12～18h液 体培养物，变形杆菌6～8h斜面培养物；
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图 2 运动型细菌
特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜，
而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清
楚看到透明微小颗粒。
用于：生活细菌运动性观察。
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细菌鞭毛的着生位置
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七、预习
细菌的芽孢染色 细菌的荚膜染色
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五、实验报告
1、绘图示细菌的鞭毛染色形态图。 2、说明所观察各菌是否都有鞭毛？有鞭毛的
细菌作何运动，无鞭毛的细菌又如何 运动？
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六、思考题
1、试设计一实验，如何鉴别某种细菌是 否能运动，是否有鞭毛，观察其鞭毛的 着生的位置。
（要求使用详细介绍流程步骤）
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2、染色剂 鞭毛染色液 3、仪器或其他用具 光学显微镜、酒精 灯
载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水等。
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四、操作步骤
1、鞭毛染色
制片 染色液A3～5min 充分水洗 Nhomakorabea染色液B 2min
水洗、自然干燥、镜检。
2、细菌运动性的观察
实验二细菌的染色及形态观察
实验二细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。
2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。
3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。
二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。
由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。
用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。
发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。
染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。
酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。
三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
2、酒精灯、接种环、载玻片。
3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。
四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。
1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。
2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。
3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。
4、染色玻片置于水平位置。
加石炭酸复红液于菌膜部位。
染1-2min。
5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。
6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。
7、镜检。
（二）革兰氏染色法步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗干燥镜检。
鞭毛染色实验报告
篇一：鞭毛染色实验报告年月日山东大学实验报告2011 年10月26 日姓名：年级同组科目微生物题目观察鞭毛染色和运动201001140018一．实验目的学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征巩固显微镜操作技术及无菌操作技术学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）二．实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（gray氏染色法）、碱性复品红（leifson氏染色法）、硝酸银（west氏染色法）或结晶紫（difco 氏染色法）进行染色。
压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量atp来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
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微生物实验报告——细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要
关键词
前言
实验目的
实验原理
A.细菌鞭毛染色法的基本原理
B.压滴法观察活菌运动的基本原理实验器材
实验内容
(一)压滴法观察活菌运动
(二)细菌鞭毛染色
实验结果
参考文献
报告编写人：张行润
生命科学学院生科四班
200900140177 细菌鞭毛染色及活菌运动观察
摘要
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。
压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。
关键词
鞭毛（flagellum）细菌（bacteria）鞭毛染色法（flagellum staining）
光学显微镜（Optical microscope）压滴法（Pressure drop method）
前言
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。
但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。
于是，便产生了鞭毛染色法。
1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
但是试剂的稳定性低，容易变质。
2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。
该法将媒染剂分为A、B两种。
A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。
这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。
一．实验目的
1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征
2、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术
3、学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）
二．实验原理
1.细菌鞭毛染色法的基本原理
简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray 氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
2.压滴法观察活菌运动的基本原理
鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
三．实验器材
(一)菌种
枯草芽孢杆菌（周生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌（端生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物等
(二)溶液和试剂
稀释美兰溶液，质量分数为95%的乙醇——水溶液，蒸馏水，硝酸银染液A液和B液等(三)仪器和其它用品
酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸等
四．实验内容
A.压滴法观察活菌运动（实验步骤流程）：
详细步骤：
1)洗片
用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗
2)涂片
在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），涂片完成
3)滴加稀释美兰
将稀释美兰滴加到涂片上，滴加均匀，注意不要滴加过多，否则影响活菌运动的观察
4)加盖玻片
加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察
5)迅速镜检（暗光）
由于菌体是放在蒸馏水中的，而且滴加的稀释美兰对其也有一定的影响，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最佳的观察效果
B.细菌鞭毛染色
实验步骤流程：
详细步骤：
a)洗片
用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗
b)95%乙醇溶液浸泡
将洗好的载玻片放入盛有95%乙醇——水溶液的培养皿中，浸泡3~5min后取出晾干，目的是将载玻片上的油污等洗掉
c)涂片
在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），将载玻片倾斜使液滴从载玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成
d)自然干燥
e)滴加硝酸银A液
向涂片上滴加适量的硝酸银A液，保持3~5分钟
f)水洗
将上一步中所滴加的硝酸银A液洗掉，注意防止将涂片中的菌种冲掉
g)硝酸银B液冲洗
用硝酸银B液冲洗涂片，覆盖45’左右，宜稍稍加热
h)水洗
i)自然干燥（室温下）
j)镜检
将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察两种菌，以方便找到鞭毛（注：枯草杆菌的菌体较大，为周生鞭毛，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛）
五．实验结果与分析
1、实验照片
a)鞭毛染色
铜绿假单胞菌（背景为暗黄色，菌群为褐红色）枯草杆菌（背景为肉红色，菌群为暗红色）10×100 10×100
2．实验结果分析
通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染色是否成功。
1．染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
2．菌种的菌龄。
老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。
可以选择菌落边缘的幼龄菌落。
3．在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾几下即可，不要用里过猛，更不能用接种环大幅涂开。
若动作太重太大，菌种的鞭毛就会被刮落。
4．银染剂的使用方式和时间很重要。
若时间过短或方式不当，就很难在媒染剂上着色，那么，我们也就没有办法在显微镜下观察到鞭毛了。
5．鞭毛染色的玻片最好是自然晾干。
加热后菌种易变形，鞭毛易脱落，影响观察。
参考文献
沈萍，陈向东. 微生物学实验. 4版. 北京：高等教育出版社，2007.
沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006
顾冠彬，房红莹，徐培君. 细菌的五种鞭毛染色方法比较研究. 中国血液流变学杂志.2005,15(3):483~485。