分枝杆菌染色液
结核分枝杆菌、厌氧菌及其它微生物的检测
试剂成份： 试剂组成
1、石碳酸复红溶液 2、酸性酒精溶液 3、亚甲基蓝溶液
主要成份 碱性品红、苯酚 乙醇、盐酸 亚甲蓝
抗酸染色
染色步骤： ① 初染：将固定好的涂片置于染色架上，滴
加数滴石炭酸复红溶液，作用10min; ② 脱色：用3%盐酸酒精脱色，直至涂片无红
色染液脱下为止，流水冲洗； ③ 复染：用亚甲蓝溶液复染1min，水洗。待
结核分枝杆菌、厌氧菌及其它 微生物的检测
苏州大学附属第二医院检验科 谢小芳
实验程序
一、实验目的 二、理论内容 三、实验内容 四、实验报告
实验目的
• 掌握结核分枝杆菌形态和染色结果 报告。
• 熟悉厌氧菌培养和鉴定流程。
结核分枝杆菌形态观察
（1）标本处理
化学处理 将痰液标本加入等量的6%次氯酸钠后，消化 作用30min后离心处理；
厌氧菌的分离与鉴定
厌氧菌的分离与鉴定
A区：在厌氧环境中生长，而在需氧和CO2环境 中不生长，为专性厌氧菌；
B区：在需氧、厌氧环境中均能生长，为兼性 厌氧菌；
C区：在厌氧环境中不生长，为专性需氧菌； D区：在需氧、厌氧环境中均不生长或生长不
佳，而在CO2环境中生长良好，为需CO2菌。
厌氧菌的分离与鉴定
金胺“O”荧光染色法
原理：
抗酸性菌用荧光染料Auramine O(金胺O)染色 后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，将 会发出闪亮的橘黄颜色，这种方法可用低倍 镜检，因此能更快速找出抗酸性菌。
分枝杆菌 微生物学检验
分枝杆菌
1. 分枝杆菌属(Mycobacterium)：
（1）一类细长、略带弯曲、呈分枝状生长细菌，革兰染色阳性，无芽胞、无荚膜；
（2）抗酸染色阳性，故又称抗酸杆菌；
（3）营养要求较高，常用罗琴培养基；
（4）生长缓慢，2~8周后方可见菌落；
（5）G+C mol%为62%~70%；
（6）由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题。
2. 主要致病种类：人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌
3. 分枝杆菌属分类
（1）典型结核分枝杆菌：人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌
（2）非典型分枝杆菌：
（3）其他：副结核分枝杆菌、麻风杆菌、鼠麻风杆菌
4. 结核分枝杆菌
（1）临床意义
A. 本菌抵抗力强，可存活6~8月，随着漂浮于空气中的微滴核被吸入呼吸道，植入肺泡发育繁殖导致结核发生；
B. 引起结核病，随社区人群生活状况不同发病率有所差异，全球约有1/3人感染，有人类死亡之首和白色瘟疫之称；
C. 免疫性：有菌免疫或称传染性免疫，细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用。
D. 细菌可经血、淋巴，在骨、关节、肾、脑膜等处引起相应的结核病
（2）致病物质荚膜：抗吞噬；细胞壁脂质；磷脂：刺激单核细胞增生、结核结节形成、干酪样坏死；分枝菌酸：抗酸性；索状因子：破坏线粒体膜；蜡质D：诱发IV型超敏反应；硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞；蛋白质；
致病机制：胞内寄生，细胞免疫为主，在巨噬细胞中存活，引起Ⅳ型超敏反应。（3）结核结节的形成：
A. 是单核细胞参与的炎性肉芽肿反应，是细胞免疫和IV型变态反应平衡的结果；
病原微生物染色法
在组织切片上，显示细菌最常用的染色法是Gram氏染色法，依据染色性状不同，把细菌分为两大类，Gram氏阳性细菌和Gram氏阴性细菌。
分枝杆菌有脂性被膜，用Gram氏染色法染色一般不易着色。为了显示这类杆菌，齐一尼氏石碳酸复红是最常用的经典染色方法。杆菌着色后，具有抗盐酸酒精的脱色作用，故又称抗酸性杆菌，这类细菌在病理学检验中最多见的是结核杆菌和麻疯杆菌。
结核杆菌呈单个或平行聚合排列。
麻疯杆菌与结核杆菌相似，但较短粗。
螺旋体染色目前仍使用经典的Levaditi氏组织块银染法染色。石蜡切片染色则采用Wartrin Starry氏法。
大部分霉菌虽可在HE染色切片中显示出来，但有些则需特殊染色法。如用P.A.S显示白色念球菌，新型隐球菌用Crocott-Gomori氏六胺银法。
一、Gram氏染色法
操纵方法：
（1）切片常规脱蜡至水。
（2）结晶紫液中染45秒。
（3）自来水洗。
（4）Gram氏碘1分钟。
（5）在碘丙酮中分化(直到切片无色为止)。
（6）水冲洗。
（7）1%中性红染核1分钟。
（8）自来水速洗。
常规脱水、透明、封固。
结果：Gram氏阳性菌呈蓝玄色，Gram氏阴性菌呈红色。
Gram氏试剂配制。
1．结晶紫染液(Lillie氏)
95%酒精 20ml
结晶紫 2g
草酸铵 1g
蒸馏水 80ml
2．Gram氏碘液
碘结晶 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
3．碘丙酮溶液
Lugot氏碘 2ml
丙酮 98ml
Gram氏切片染色(改良法)
操纵方法：
（1）石蜡切片脱蜡常规至水。
（2）HE水溶液染色，伊红较正常深。
微生物5 抗酸染色
注意事项
①每张载玻片只允许涂1份标本，不得涂2份或2份以上标本， 以免染色过程中菌体脱落而导致阴阳结果混淆。使用过的玻 片要彻底清洗干净后才能再次使用，以防抗酸菌遗留在玻片 上。 ②抗酸染色时切勿使用染色缸。用于吸水的滤纸只能1片1张， 不可重复使用。镜检时每检查 1份标本后，均需揩拭油镜头。 滴加香柏油的玻璃棒或竹签不得触及玻片。 ③抗酸染色时，脱色剂脱色时间宁长勿短，结核分枝杆菌脱 色时间长至10—20min而不被脱色；而非抗酸菌则易脱色，故 延长脱色时间有一定的鉴别作用。 ④为了防止实验室感染，可先将待检的结核分枝杆菌标本高 压灭菌后，涂片染色。这样既安全又不影响实验结果（此法 仅用于大规模实验）。
目的要求：
初步掌握抗酸染色的操作、结果判断。
材料：
结核病人痰液、载玻片、酒精灯、接种环 抗酸染色液： 石炭酸复红液、3%盐酸酒精溶液、吕氏美蓝 溶液。
方法：
1、涂片：
（1）取病患清晨痰液 （2）取干酪样坏死或带血小块，涂成薄膜状 （3）自然干燥，外焰固定，染色
2、抗酸染色
（1）初染： 夹住涂片一端，持平，滴加石碳酸复红染液， 使之完全覆盖标本，（或在已固定的结核分枝 杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片，之后滴加 数滴石炭酸复红液后，）置酒精灯高处徐徐加 热，待染液出现蒸汽时移开，蒸汽减少时再加 热，反复操作3-5分钟。
Giemsa染色，X1000
抗酸染色——标准操作
抗酸染色
一、原理
本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂
石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液
三、方法
1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰
2.固定：常用高温进行固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色
3.染色
3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温
3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水
3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止
3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水
3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟
3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检
3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块
四、结果判定
1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色
(完整版)临床分支杆菌质控流程
临床分枝杆菌检验的质量控制流程
1、质量的概念和质量保证
影响检验结果质量的因素很多,实验过程中,仪器、试剂和操作等均会引起试验结果的误差,衡量检验结果的质量常用准确度和精确度,或特异性和灵敏度。具体采用哪一种指标,应根据实验的性质决定。
2、室内质量控制
2.1在职入员
2.1.1须受过细菌学检验的专门基础教育以及相关的生物安全防护知识,并以细菌检验为专业,及时终结并积累工作经验。
2.1.2工作人员必须具有严谨的工作态度。技术操作须完全遵守操作规程,并直接参与质量控制工作。
2.1.3工作人员应不断加强自身的业务学习,及时了解本领域的新进展,将所掌握的新知识应用到实际工作中。
2.1.4实验室管理人员应注意利用一切机会培养技术人员,积极参加国际、国内学术会议专业培训班,获取新信息。因为细菌学检验,投资人员培训远比投资与仪器设备更重要。
2.2操作手册及参考书
2.2.1细菌室可以根据自己的实际情况制订一本指导日常工作、简明扼要的操作手册,并在工作中不断完善和修改。
2.2.2细菌室应准备一些专业分枝杆菌参考书。
3、设备质量控制
3.1温箱、冰箱每日工作开始,在打开温箱或冰箱等控温设备前,以及下午下班前须观察当时设备的温度并记录
3.2高压灭菌器须定期检查灭菌器的灭菌效果,至少每月1次。测试方法可用留点温度计回嗜热芽孢菌等,并建立定期维修。
3.3生物安全柜新安装必须由生产厂家提供安装检测报告,以后每年必须检测一次,若须更换滤网,须由专门技术人员进行,并提供检测报告。工作时检测气流、紫外灯正常与否,可用营养琼脂检测空气中细菌的沉降数,紫外线必须有使用记录,每3个月检查一次性能3.4接种环要求长5-8cm,环直径约3mm；接种针长5-8cm。
实验十四：分枝杆菌
进一步优化培养基和培养条件，提高十四分 枝杆菌的培养效率和产量，为其应用研究和 产业化提供技术支持。
THANK YOU
感谢聆听
物模型的观察和分析，评估分枝杆菌的致病力和药物的疗效，为临床试
验提供参考依据。
02
实验材料与方法
实验材料
分枝杆菌菌株
本实验使用的分枝杆菌菌株为 Mycobacterium sp.，这是一 种常见的革兰氏阳性菌，广泛 分布于土壤和水中。
培养基
分枝杆菌在Middlebrook 7H10 Agar培养基上生长良好 ，该培养基含有适当的营养成 分以支持细菌生长。
血清学鉴定
应用免疫学方法检测患者血清 中的特异性抗体，辅助鉴定分 枝杆菌种类。
06
分枝杆菌在医学领域的应用
医学诊断价值
病原菌检测
分枝杆菌作为一类重要的病原菌，其检测对于疾病的诊断和 治疗具有重要意义。通过细菌培养、生化鉴定等方法，可以 准确鉴定分枝杆菌的种类和数量，为临床医生提供准确的诊 断依据。
的分离效率和纯度。
数据可靠性
03
通过多次重复实验和严格的质量控制，确保了实验数据的准确
性和可靠性。
对未来研究方向的展望
深入研究十四分枝杆菌的 生物学特性
进一步探索其生长条件、代谢途径、基因表 达等方面的特点，为理解其生态功能和潜在 应用提供基础。
结核菌分枝杆菌涂片抗酸染色
抗结核药 全杀菌剂：异烟肼 利福平 半杀菌剂：链霉素 吡嗪酰胺 抑菌剂：乙胺丁醇 对氨水杨酸 丙硫异烟胺
化疗方法
1）疗程：“标准”化疗（12～18个月） 短程化疗（6～9个月） 2）间歇用药 3）两阶段用药：强化和巩固 4）督导用药 5）化疗方案
杀灭结核菌方法：
烈日曝晒 2h 紫外线 30’ 70% 酒精 2’ 5% 来苏液 2-12h 煮沸 5’（90℃湿热 1 分钟） 将痰吐在纸上烧掉
结果判定
皮肤硬结直径： 阴性<5mm 弱阳性5 ～ 9mm 阳性10～19mm 阳性>20mm或局部出现水泡或坏死
结素反应的意义
* 阳性：曾有结核菌感染，并不一定现在患病 * 强阳性：常提示活动性结核病 * 阴性：没有感染；假阴性
结素反应假阴性
① 感染后4-8周内，变态反应尚未建立 ② 使用糖皮质激素等免疫抑制药物，或营养 不良、麻疹、白日咳患者，结素反应可暂消 失 ③ 严重结核病或各种危重患者对结素可暂无 反应或弱阳性； ④ 年老体衰、淋巴细胞免疫系统缺陷（如白 血病、淋巴瘤、结节病、AIDS等）的结素 反应常阴性。
查体：T 37.8℃，P 86次／分，R 20次／分，BP120／ 80mmHg。 一般状况无明显异常，无皮疹，浅表淋巴结无肿大， 巩膜无黄染，咽（－）、气管居中。右上肺叩诊稍浊，语 颤稍增强，可闻及支气管肺泡呼吸音和少量湿性啰音，心 腹检查未见异常。 实验室检查：Hb130g／L，WBC 9.0×109／L，N 68%，L 32%，PLT l38×109／L，ESR 35mm／h；尿 常规（－），粪便常规（－），PPD试验强阳性。
抗酸染色
❖ 4 掌握好脱色的时间和程度；
抗酸染色
临床微生物学教研室
实验原理：
❖ 分枝杆菌的细胞壁内含大量脂质（主要是分枝菌 酸）包围在肽聚糖的外面，一般不易着色，要经 过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝菌酸 与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名 抗酸染色。
❖ 抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸 复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不 脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为 红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
❖
下为止
初染（5%石炭酸复红）
3～5min 冷却后水冲
脱色（3%盐酸酒精）
30秒左右 水冲
复染（碱性美蓝）
1min 水冲
吸水纸吸干
油镜镜检
三 、油镜观察结果
❖ 抗酸菌：红色（+）
初染
脱色
复染
❖ 非抗酸菌和背景：蓝色（—）
初染
脱色
复染
报告
❖ “—”：仔细观察至少300个视野未发现抗酸菌. ❖ “±”：100—300个视野内发现1-2条抗酸菌
❖ 培养基：罗-琴氏（Lowenatein Jensen）培养基 主要成分：蛋黄、甘油、天门冬素、 马铃薯淀粉、无机盐、孔雀绿。
❖ 蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长，孔雀绿可抑制杂 菌生长
医学微生物学实验二抗酸染色
实验考试
三、抗 酸 染 色
Acid fast stain
（一）实验目的 1.掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义 掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。 1.掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。 2.熟悉抗酸染色的原理 熟悉抗酸染色的原理。 2.熟悉抗酸染色的原理。 （二）实验原理 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸， 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它 包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热 包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色， 和延长染色时间来促使其着色， 和延长染色时间来促使其着色，同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染 料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复 尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复 红牢固结合成复合物， 3%盐酸酒精处理也不脱色 盐酸酒精处理也不脱色。 红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性 美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色， 美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质 为兰色。 为兰色。
实验内容
1.实验一结果的观察和分析； 1.实验一结果的观察和分析； 实验一结果的观察和分析 2.细菌内毒素的检测技术； 2.细菌内毒素的检测技术； 细菌内毒素的检测技术 3.抗酸染色； 3.抗酸染色； 抗酸染色 4.实验考试。 4.实验考试。 实验考试
抗酸染色液(金胺O荧光法)
抗酸染色液(金胺 O 荧光法)
简介：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般丌易着色。 传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。抗酸染色液(金胺 O 荧光法)属 于荧光染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。其染色原理是在室温条件下 Auramine O 染色以及复染后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，抗酸杆菌呈亮黄色，而其他细菌 及背景中的物质呈暗黄色，这种方法可用低倍镜检，因此能更快速找出抗酸性菌。
1、 每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。 2、 金胺 O 荧光易衰减，尽量避光操作。 3、 上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
组成：
名称 试剂(A): 金胺 O 染色液 试剂(B): 酸性脱色液 试剂(C): 复染液 使用说明书
编号 DM0037 DM0037 4×100ml 4×500ml
Storage
100ml
500ml RT 避光
2×100ml 2×500ml RT
100ml
500ml RT 避光
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，加热固定。 2、 滴加金胺 O 染色液避光染色，水洗。 3、 用酸性脱色液脱色，直至涂片无黄色为止，水洗。 4、 用复染液染色，水洗。 5、 轻轻吸干水分，自然干燥。 6、 荧光显微镜下镜检。
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
1.痰液涂片染色：这是最常用的方法之一、将痰液制备成涂片，进行
酸性染色，如抗酸杆菌染色和耐酸染色。结核分枝杆菌是抗酸杆菌，其细
胞壁富含脂质，可以抵抗酸性染料的脱色作用。这种方法可以快速检测出
结核分枝杆菌的存在。
2.结核分枝杆菌的培养：这是鉴定结核分枝杆菌的“金标准”。痰样
品通常会涂在含有富含营养物质的培养基上，并在适当的温度和湿度条件
下孵育。结核分枝杆菌需要一个相对较长的孵育时间（通常需要数周）才
能生长和生成可见的菌落。分枝杆菌的培养是确诊结核病的关键步骤，同
时还可以进行对特定抗结核药物的药敏试验。
3.伊红染色：这种方法旨在鉴定酸酒杆菌属分枝杆菌和其他酸杆菌的
超微结构。伊红染色可使细胞壁和细胞内储存的色素显现为红色或粉红色。该方法可以帮助确定分枝杆菌的类属。
4.PCR检测：聚合酶链反应（PCR）能够通过扩增目标基因片段来检
测和诊断结核分枝杆菌。这种方法具有高度特异性和灵敏度，并可以通过
荧光标记的探针来定量检测。
5.蛋白质组学：蛋白质组学技术通过检测和分析结核分枝杆菌内部蛋
白质的组成和变化，可以为诊断和治疗提供信息。质谱法是一种常用的蛋
白质组学技术，可以通过检测菌落样品中的特定蛋白质来鉴定结核分枝杆菌。
总的来说，微生物学诊断方法在结核分枝杆菌检测和鉴定中起着至关
重要的作用。这些方法可以帮助医生确定结核病的诊断和治疗方案，并对
结核分枝杆菌的流行病学研究和控制提供重要的科学依据。
结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
结核病的世界流行状况
由于全球结核病发病呈日渐上升的趋 势，WHO于1995年起将每年的3月24日 定为“世界防治结核病日”。回升原因：
⑴ 预防及治疗不规范 ⑵ 耐药率上升 ⑶ AIDS、吸毒、酗酒、贫困 ⑷ 高危人群的流动及移民
（一）生物学性状
1．形态与染色
2．培养特性 3．抵抗力
（二）致病性与免疫性 1．致病物质
（1）荚膜 （2）炭疽毒素
① 水肿因子（ Edema Factor ，EF) ② 致死因子（Lethal Factor ，LF) ③ 保护性抗原（ Protective Antigen ，PA)
2.致病过程（炭疽病，anthrax)
嗜肺军团菌(L.pneumophila)
一、概述
1976年以来，世界各地都有 大量军团病爆发，美国每年 近4000人死亡。近几年来， 我国的大中城市，也陆续有 军团病爆发。
二、生物学性状 G-杆状、菌丝状、短菌丝状，镀银染色为黑褐色。 无芽胞、微荚膜，有菌毛、鞭毛。 细胞壁内含有大量支链脂肪酸。 专性需氧，生长缓慢。 营养要求特殊，含半胱氨酸和铁。 产生明胶酶和β～乳酸酶，过氧化氢酶阳性。 抵抗力很强，对酸有抵抗力，对化学消毒剂尚敏感。
结核分枝杆菌
(Mycobacterium tuberculosis)
微生物检验学之分枝杆菌属及检验
分枝杆菌属及检验
分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。
分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。非典型分枝杆菌是一大群分枝杆菌的总称，与人类有关的非典型分枝杆菌主要有堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈分枝杆菌、鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌和耻垢分枝杆菌等。本属细菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。
根据国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）的方案将本属细菌分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌。
一、结核分枝杆菌
在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。
（一）生物学特性
1.形态与染色结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌。在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。抗酸染色时因菌体含有大量脂类而不易着色，无论是否经碘液处理，着色后均不易被盐酸乙醇脱色，所以使菌体呈红色。本菌无芽胞、无鞭毛，近年发现有荚膜。
2.培养特性本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%CO2环境中可刺激其生长。烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大，35～40℃均可生长，最适温度为35～37℃。最适pH为6.5～6.8。兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。生长时还需适当的湿度。本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18小时一代。
结核分枝杆菌抗酸染色
抗酸染色液说明书
【产品名称】
抗酸染色液
【包装规格】
货号：DM0035
单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为： 3×20ml/盒、3×100ml/盒、3×250ml/盒、3×500ml/盒。
【预期用途】
用于分枝杆菌、诺卡菌等抗酸性菌的涂片染色。
【检验原理】
本染色方法系在参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准Ziehl-Neelsen法进行改良的，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学染色，抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)法；
②荧光染料金胺O法(也称金胺罗丹明法)。本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温，属于Kinyoun 冷染色法，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后经酸性乙醇的作用亦是不容易把它脱色，利用此特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸性乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色),也就易于鉴别。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、石碳酸复红染色液苯酚、品红
2、酸性乙醇脱色液盐酸、乙醇
3、亚甲蓝染色液亚甲蓝
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
细菌的革兰氏染色及染色液的配制
革兰氏染色的一般步骤
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色，再用稀释石炭酸复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）。
革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌（大肠埃希菌）、铜绿假单胞菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、沙门菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性菌。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）纯化水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。干燥，镜检。
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抗酸染色液说明书
【产品名称】
抗酸染色液
【包装规格】
货号：DM0035
单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为： 3×20ml/盒、3×100ml/盒、3×250ml/盒、3×500ml/盒。
【预期用途】
用于分枝杆菌、诺卡菌等抗酸性菌的涂片染色。
【检验原理】
本染色方法系在参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准Ziehl-Neelsen法进行改良的，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学染色，抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)法；
②荧光染料金胺O法(也称金胺罗丹明法)。本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温，属于Kinyoun 冷染色法，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后经酸性乙醇的作用亦是不容易把它脱色，利用此特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸性乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色),也就易于鉴别。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、石碳酸复红染色液苯酚、品红
2、酸性乙醇脱色液盐酸、乙醇
3、亚甲蓝染色液亚甲蓝
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部份，于玻片正面均匀涂抹卵圆形痰膜，自然干燥，染色前加热固定。
【检验方法】
1、挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥或火焰固定；
2、滴加石碳酸复红染色液盖满玻片，染色；
3、无需加热，流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水；
4、自玻片边缘滴加酸性乙醇脱色液盖满玻片，脱色，如有必要，需流水洗去酸性乙醇脱色液，再次脱色至无红色为止；
5、流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水；
6、滴加亚甲蓝染色液，染色，流水自玻片一端轻轻冲洗，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检(一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块)。
【检验方法的局限性】
仅限用于抗酸性菌的染色。
【注意事项】
1、用油镜观察时，禁止使用香柏油，必须使用显微镜专用的镜油(Immersion oil)。
2、酸性乙醇脱色液不够用时，可自制5%盐酸乙醇溶液替代。
3、冬季室温过低时，染色时间要适当延长。
4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房