分枝杆菌染色液
结核分枝杆菌、厌氧菌及其它微生物的检测
最终鉴定需要进行生化反应及终末代谢产物等检 查。
生化试验主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验 硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂 酶试验、明胶液化试验、硫化氢试验等——厌氧 API条。
目前用于厌氧菌快速鉴定还有自动微生物鉴定系 统等。
实验内容
1、记录抗酸染色步骤。 2、油镜下观察抗酸杆菌涂片，并记
厌氧菌的分离与鉴定
（三）标本接种
标本接种3个血琼脂平板，分别置于有氧、 无氧和含5-10%CO2的环境中培养。若只 要求检测厌氧菌，只需接种1个厌氧血琼 脂平板。
厌氧菌的分离与鉴定
（四）耐氧试验
当厌氧血平板上有细菌生长时，为了确 定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。挑 取菌落分别转种2块需氧血琼脂平板和1 块厌氧血琼脂平板，然后将平板分别放 置在需氧、厌氧和CO2环境中培养。
荧光染色结果报告
—：观察70个视野未发现抗酸杆菌； ±：70个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：50个视野内发现2-18条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现36条以上抗酸杆菌。
厌氧菌的分离与鉴定
厌氧菌标本的采集 涂片与染色 标本接种 耐氧试验 鉴定试验
干后油镜下观察结果。
抗酸染色结果观察
油镜下观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红 色细长或分枝状杆菌，此为抗酸染色阳性细菌 。
抗酸染色结果报告
—：观察300个视野未发现抗酸杆菌； ±：300个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：100个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现9条以上抗酸杆菌。
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen热染法)
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen 热染法)简介：分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。
分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。
传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色，其中最具代表性的是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 和中国结核病防治规划中推荐的热染方法。
Leagene 抗酸染色液(Ziehl －Neelsen 热染法)属于热染色液，其染色原理是在加热条件下，分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
该试剂盒更适用于冷染法效果不佳的情况。
组成：自备材料：1、 接种环2、 载玻片3、 蒸馏水4、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，涂片加热固定。
2、 滴加Ziehl －Neelsen 复红染色液，用火焰微热至出现蒸汽，一般该染色过程至少(必要时应补加染液、以防止染液蒸发)。
3、 蒸馏水冲洗。
4、 用Ziehl －Neelsen 脱色液脱色至无红色为止，即可。
5、 蒸馏水冲洗。
6、 用亚甲蓝染色液染色7、 蒸馏水冲洗。
8、 轻轻吸干水分，自然干燥。
9、 油镜镜检。
编号 名称DM0034 3×50mlDM0034 3×100mlStorage试剂(A): Ziehl －Neelsen 复红染色液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): Ziehl －Neelsen 脱色液 50ml 100ml RT 试剂(C): 亚甲蓝染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份染色结果：抗酸菌红色背景及非抗酸菌蓝色注意事项：1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。
2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
抗酸染色——标准操作
抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
结核分枝杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
结核分枝杆菌的抗酸染色原理
结核分枝杆菌的抗酸染色原理一、简介结核分枝杆菌是引起结核病的主要病原体，对其进行准确快速的检测具有重要意义。
抗酸染色是一种常用的方法，能够直接观察到结核分枝杆菌的存在和形态特征。
二、抗酸染色的原理抗酸染色是通过特殊的染色方法，使结核分枝杆菌在显微镜下呈现红色或紫色，而其他非酸酸杆菌则呈现蓝色。
2.1 理论基础结核分枝杆菌具有特殊的细胞壁结构，其细胞壁主要由脂质和脂酸构成，其中包含大量的酚类脂质，这种脂质能够抵抗常规染色方法中的酸性染料。
2.2 染色原理抗酸染色采用的是富尔曼-韦尔染色法，主要包括以下几个步骤：1.制备菌液：从患者的痰液或其他病变部位采集样本，制备结核分枝杆菌的菌液。
2.固定：将菌液涂在玻璃片上，用火焰烘烤使其固定。
3.酸性染料染色：将固定的菌液涂上红色的酸性染料，如碱性红或苏木精。
4.脱色：用酸醇溶液洗去多余的染料。
5.革兰染色：用紫色的革兰染料染色。
6.脱色：用醇洗去多余的染料。
7.固定：用盐酸醇固定染色。
8.洗净：用水洗净玻璃片。
9.干燥：让玻璃片自然干燥。
10.镜检：将染色好的玻璃片放在显微镜下观察，结核分枝杆菌呈现出红色或紫色。
三、抗酸染色的应用抗酸染色广泛应用于结核病的诊断和治疗过程中。
3.1 诊断结核病通过抗酸染色，医生可以直接观察到患者样本中是否存在结核分枝杆菌，从而判断是否患上结核病。
3.2 监测结核治疗效果在治疗结核病的过程中，通过定期进行抗酸染色检测，可以评估患者的结核菌负荷，判断治疗是否有效。
3.3 检测结核菌耐药性结核分枝杆菌的耐药性是结核病治疗的重要指标之一。
抗酸染色方法可以辅助判断结核菌对抗结核药物的敏感性，从而指导药物的选择和调整。
四、抗酸染色的优缺点抗酸染色方法虽然在结核病的检测中具有一定的优势，但也存在一些局限性。
4.1 优点•简单快速：整个染色过程只需几分钟，可以在短时间内完成。
•直观可靠：直接观察到红色或紫色的结核分枝杆菌，确保结果准确可靠。
抗酸染色液说明
抗酸染色液说明【产品名称】通用名称：抗酸染色液【包装规格】100ml*2/盒、250ml*2/盒、500ml*2/盒【预期用途】抗酸染色液用于分枝杆菌、诺卡菌等细菌抗酸染色，包括荧光染色。
【检验原理】结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色。
利用此特性并以增强的染色液予以染色，然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)，也就易于鉴别。
【主要组成成份】试剂组成：抗酸染色液包括石碳酸复红染色液、亚甲基蓝染色液。
【贮存条件及有效期】有效期：未开封试剂有效期为24个月。
贮存条件：本试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的5~30℃室温环境。
【样本要求】待检标本应为菌株或有菌株的标本。
【检验方法】涂片经固定水洗后或石蜡切片脱蜡水洗后：1、将石碳酸复红染色液滴加于切片上，然后在微火加热至有蒸汽出现，水洗；2、用0.5%盐酸酒精分化至无红色染料脱落，水洗；3、亚甲基蓝染色液作对比染色20～60秒，水洗；4、酒精脱水，二甲苯透明、中性胶封固、镜检。
【检验结果的解释】抗酸杆菌呈红色，其他组织呈浅蓝色。
【检验方法的局限性】有些细菌有染色嗜变性，不一定完全是染色原因，应根据菌体形态加以确定。
【注意事项】1.该该染色液仅用于体外诊断。
2.涂片厚薄要均匀，自然干燥后再加热固定。
3.试剂贮存时，尽量避免高温及光亮环境，以免影响品质和效果。
标示有效期过后，请不要使用。
4.本品应由专业人士使用及进行结果的判断。
5.所用标本应视为具有传染性物质。
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
1.痰液涂片染色：这是最常用的方法之一、将痰液制备成涂片，进行
酸性染色，如抗酸杆菌染色和耐酸染色。
结核分枝杆菌是抗酸杆菌，其细
胞壁富含脂质，可以抵抗酸性染料的脱色作用。
这种方法可以快速检测出
结核分枝杆菌的存在。
2.结核分枝杆菌的培养：这是鉴定结核分枝杆菌的“金标准”。
痰样
品通常会涂在含有富含营养物质的培养基上，并在适当的温度和湿度条件
下孵育。
结核分枝杆菌需要一个相对较长的孵育时间（通常需要数周）才
能生长和生成可见的菌落。
分枝杆菌的培养是确诊结核病的关键步骤，同
时还可以进行对特定抗结核药物的药敏试验。
3.伊红染色：这种方法旨在鉴定酸酒杆菌属分枝杆菌和其他酸杆菌的
超微结构。
伊红染色可使细胞壁和细胞内储存的色素显现为红色或粉红色。
该方法可以帮助确定分枝杆菌的类属。
4.PCR检测：聚合酶链反应（PCR）能够通过扩增目标基因片段来检
测和诊断结核分枝杆菌。
这种方法具有高度特异性和灵敏度，并可以通过
荧光标记的探针来定量检测。
5.蛋白质组学：蛋白质组学技术通过检测和分析结核分枝杆菌内部蛋
白质的组成和变化，可以为诊断和治疗提供信息。
质谱法是一种常用的蛋
白质组学技术，可以通过检测菌落样品中的特定蛋白质来鉴定结核分枝杆菌。
总的来说，微生物学诊断方法在结核分枝杆菌检测和鉴定中起着至关
重要的作用。
这些方法可以帮助医生确定结核病的诊断和治疗方案，并对
结核分枝杆菌的流行病学研究和控制提供重要的科学依据。
分枝杆菌罗氏培养操作
分枝杆菌罗氏培养操作材料仪器:Ⅱ级生物安全柜、37℃培养箱、涡旋震荡器、低速离心机、接种环加热灭菌器、一次性吸管、0.1ml接种环、容积为30ml的螺旋盖前处理管试剂：前处理液:4%NaOH溶液：取4克氢氧化钠加入80ml 蒸馏水中，完全溶解后补充蒸馏水至终体积100ml。
操作步骤6.1 标本前处理：在生物安全柜中进行操作。
6.1.1 碱处理----碱处理时间不能超过20min。
痰：一次性吸管取标本2ml，置于前处理管中，加入2～4ml 的4%NaOH溶液，室温15min，其间在震荡器上振荡，促标本匀化。
6.2 接种：采用碱处理的标本，应接种酸性罗氏培养基。
取前处理后的标本0.1ml，无菌操作，用接种环接种于罗氏培养基斜面上，每份痰标本接种两支培养基，接种毕，放37℃培养箱内培养。
6.3 培养过程观察接种后第3天、第7天观察，此后，每周观察一次菌落生长情况，直至满8周。
6.4 结果与报告接种后应按时观察细菌生长情况，阳性生长经涂片抗酸染色验证后，及时记录初生长日期，并发培养阳性报告（如菌量少，继续放置培养箱孵育生长）。
培养至8周未见细菌生长，报告培养阴性。
6.4.1 培养结果按下列标准报告：培养8周未见菌落生长，报告培养阴性(一)。
菌落生长不及斜面面积1/4时，报告实际菌落数菌落占斜面面积 1/4 报告培养阳性(1+)菌落占斜面面积1/2 报告培养阳性（2+)菌落占斜面面积3/4 报告培养阳性(3+)菌落布满培养基斜面报告培养阳性(4+)6.4.2 培养基污染情况报告如发现培养基污染，则报告污染菌生长，污染率高于5％时，提示培养基制备中灭菌处理不佳或消化液处理不良，应认真检查操作程序。
污染菌程度按下列标准报告：污染菌生长占培养基斜面1/4以下者，报告(C1＋)。
污染菌生长占培养基斜面1/2以下者，报告(C2＋)。
污染菌生长占培养基斜面3/4以下者，报告(C3＋)。
污染菌生长占培养基全斜面者，报告(C4＋)。
结核分枝杆菌抗酸染色
抗酸染色液说明书【产品名称】抗酸染色液【包装规格】货号：DM0035单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为： 3×20ml/盒、3×100ml/盒、3×250ml/盒、3×500ml/盒。
【预期用途】用于分枝杆菌、诺卡菌等抗酸性菌的涂片染色。
【检验原理】本染色方法系在参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准Ziehl-Neelsen法进行改良的，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学染色，抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)法；②荧光染料金胺O法(也称金胺罗丹明法)。
本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温，属于Kinyoun 冷染色法，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后经酸性乙醇的作用亦是不容易把它脱色，利用此特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸性乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色),也就易于鉴别。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、石碳酸复红染色液苯酚、品红2、酸性乙醇脱色液盐酸、乙醇3、亚甲蓝染色液亚甲蓝【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部份，于玻片正面均匀涂抹卵圆形痰膜，自然干燥，染色前加热固定。
【检验方法】1、挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥或火焰固定；2、滴加石碳酸复红染色液盖满玻片，染色；3、无需加热，流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水；4、自玻片边缘滴加酸性乙醇脱色液盖满玻片，脱色，如有必要，需流水洗去酸性乙醇脱色液，再次脱色至无红色为止；5、流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水；6、滴加亚甲蓝染色液，染色，流水自玻片一端轻轻冲洗，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检(一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块)。
结核分枝杆菌的微生物学检查程序
结核分枝杆菌的微生物学检查程序结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它具有潜伏感染和活动性感染两种状态。
为了准确诊断结核病，需要进行微生物学检查。
以下将详细介绍结核分枝杆菌的微生物学检查程序。
第一步：标本采集结核分枝杆菌的标本可以采集自患者的呼吸道、淋巴结、组织等部位。
常见的标本包括痰、胸腔积液、脑脊液等。
标本采集应严格遵循无菌操作原则，避免污染和细菌的死亡。
第二步：标本处理采集到的标本需要进行适当的处理，以提高分枝杆菌的检出率。
对于痰标本，应先进行离心，将上清液（上清液中含有较高浓度的分枝杆菌）分装入多个收集器中。
对于其他标本，如胸腔积液、脑脊液等，可以进行直接涂片或离心浓缩处理。
第三步：分枝杆菌培养分枝杆菌培养是诊断结核病的关键步骤。
常用的培养基有Lowenstein-Jensen（LJ）固体培养基、麦康奈尔（Middlebrook）液体培养基等。
将经过标本处理的标本接种到培养基上，并在适宜的温度（通常为35-37摄氏度）下培养2-8周。
培养期间需要定期观察菌落的形态，并进行常规的结核分枝杆菌鉴定。
第四步：分枝杆菌鉴定通过观察分枝杆菌的形态特征，如形状、颜色等，可以初步鉴定分枝杆菌。
进一步的鉴定需要进行生化试验，如尼氏染色、热酸洗脱法、硝酸盐还原试验等。
这些试验可以确定菌株是否为结核分枝杆菌。
第五步：药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。
常用的药敏试验包括比值法（MIC测定）、比例法、临界浓度法等。
通过药敏试验可以确定分枝杆菌对抗结核药物的敏感性，以指导临床治疗。
第六步：核酸检测核酸检测是近年来发展起来的一种快速、准确的检测方法。
常用的核酸检测技术有PCR（聚合酶链反应）、LAMP（环介导等温扩增法）等。
通过检测结核分枝杆菌特定的基因序列，可以快速准确地诊断结核病。
综上所述，结核分枝杆菌的微生物学检查程序包括标本采集、标本处理、分枝杆菌培养、分枝杆菌鉴定、药敏试验和核酸检测。
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen热染法)
染色结果：
抗酸菌
红色
背景及非抗酸菌
蓝色Leabharlann 注意事项：1、 每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。 2、 上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
操作步骤(仅供参考)：
1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玱片上，涂片加热固定。 2、 滴加 Ziehl－Neelsen 复红染色液，用火焰微热至出现蒸汽，一般该染色过程至少。 3、 蒸馏水冲洗。 4、 用 Ziehl－Neelsen 脱色液脱色至无红色为止。 5、 蒸馏水冲洗。 6、 用亚甲蓝染色液染色。 7、 蒸馏水冲洗。 8、 轻轻吸干水分，自然干燥。 9、 油镜镜检。
北京雷根生物技术有限公司
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen 热染法)
简介：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般丌易着色。 分枝杆菌中的分枝菌酸不染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。抗 酸染色液(Ziehl－Neelsen 热染法)属于热染色液，其染色原理是在加热条件下，分枝菌酸 不复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物 质为蓝色。该试剂盒更适用于冷染法效果丌佳的情况。
组成：
编号 名称 试剂(A): Ziehl－Neelsen 复红染色液 试剂(B): Ziehl－Neelsen 脱色液 试剂(C): 亚甲蓝染色液 使用说明书
DM0034 3×50ml
50ml 50ml 50ml
DM0034 3×100ml
100ml 100ml 100ml
1份
Storage
RT 避光 RT RT 避光
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。
下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。
一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。
这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。
步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。
2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。
3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。
4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。
5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。
6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。
7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。
二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。
这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。
4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。
三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。
4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。
5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。
抗酸染色实验报告
抗酸染色一、实验目的1.掌握抗酸染色的操作方法2.熟悉抗酸染色的原理二.实验原理1分枝杆菌的细胞壁内色有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆图一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来使其着色，但分枝杆中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色2.齐一尼氏抗酸染色是在加热条件下使分枝杆菌与石炭酸复红牢固结合成复合物，用酸性酒精处理也不脱色。
当再加亚甲蓝溶液复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
三.实验材料1.标本白色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液2.试剂抗酸染色试剂1套（石炭酸复红染液、3％盐酸乙醇溶液、碱性亚甲蓝染液）。
3.其他器材接种环，酒精灯，载玻片，玻片夹，染色盘，染色架，洗夜瓶，显微镜等。
四、实验方法1.细菌涂片的制备1）涂片：取一张洁净载玻片，从记号笔在背面画一个直径约为1cm的圆圈，在载玻片正面对应区域制作玻片；首先，点燃酒精灯，在酒精灯火焰附近15cm内的相对无菌区，用接种环在酒精灯外焰上进行消毒灭菌，按无菌操作方法用种排取混菌，在我片中间际成直径大约1cm 你圆形自膜续挑取标本混合菌5次，制成厚膜涂片，涂片后烧灼灭菌接种环2）干燥：自然干或在西精灯火焰上方5～10om处略加热烘干3）固定：将干燥后的玻片通过酒精灯外焰2-3次，每次通过时间大约1s.用玻片夹固定。
（2）染色1）初染：用琅片持片标本一端，在涂片区滴加石碳酸复红染液2~3滴，将涂片区完全覆盖，然后在酒精灯火焰正上方（5~10cm）徐徐加热，出现蒸汽即升高玻片或暂时将玻片移开酒精灯火焰，切勿沸腾，更不能干涸，蒸汽消失后继续加热。
如此反复，保持染液加热3~5min，其间若染液蒸发减少，应将玻片移至染色盘上方待玻片冷却后续加染液，以免干涸。
完成加热初染后应待标本冷却，然后再用洗液瓶冲洗多余的染液，将玻片在染色盘上轻轻甩净。
2）脱色：将3％盐酸乙醇溶液滴加在涂片区，并轻微缓慢晃动玻片，进行充分脱色时间为1min.然后用洗液瓶将玻片冲洗干净，在染色盘上轻轻甩净多余的水.3）复染将碱性亚甲蓝染液滴加在涂片区，充分覆盖，染色时间为1min，然后用洗液瓶冲洗玻片，在染色盘上轻轻甩净，将玻片自然晾干或用吸水纸吸干.（3）观察先用低倍镜（40x）高倍镜（100x）找到染色区域，在该处加1香柏油，然后用油镜观察五.实验结果名称：白色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液染色方式：抗酸染色放大倍数：100x六.注意事项1严格无菌操作2尽可能地取菌5~8次，以便更好地寻找细菌初染的时间要九分，掌握好加热胡温度4初染结束后须冷却后再用水冲洗5每次冲洗应便水流从涂片区上部区域流下，不可直接对涂片区用洗液瓶大力冲洗，以免破坏涂片区涂层。
第一类医疗器械生产备案凭证
第一类医疗器械生产备案凭证备案编号：闽明食药监械生产备20140003号企业名称三明市和众生物技术有限公司住所三明市梅列区碧湖列西街道工业大楼四、五楼生产地址三明市三元区荆东工业园60号法定代表人陈隆玉企业负责人陈隆玉生产范围2002版：一类6840体外诊断试剂、6841医用化验基础设备器具。
2017版：09物理治疗器械、14注输、护理和防护器械说明、18妇产科、辅助生殖和避孕器械、22临床检验器械。
生产产品列表产品名称产品备案号登载日期备注缓冲液闽明械备20140013号2014-9-26样本密度分离液闽明械备20140014号2014-9-26糖原染色液(PAS) 闽明械备20140018号2014-12-16过氧化物酶（POX）染色液闽明械备20140019号2014-12-16吉姆萨染色液闽明械备20140020号2014-12-16α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）染色液闽明械备20140021号2014-12-16网织红细胞染色液闽明械备20140022号2014-12-16巴氏染色液闽明械备20150004号2015-5-7苏木素-伊红染色液（H-E）闽明械备20150005号2015-5-7液基薄层细胞制片机闽明械备20150006号2015-5-7液基细胞制片染色一体机闽明械备20150025号2015-7-28液基细胞分离制片染色一体机闽明械备20150026号2015-7-28宫颈细胞染色液闽明械备20150027号2015-8-20医用离心机闽明械备20160001号2016-6-19 抗酸染色液闽明械备20160002号2016-6-19生产产品列表刘氏染色液闽明械备20160003号2016-6-19 革兰染色液闽明械备20170004号2017-6-5 组织固定液闽明械备20170007号2017-6-5精子染色液（改良Diff-Quik法）闽明械备20170008号2017-6-5 精子染色液（shorr法）闽明械备20170009号2017-6-5 精子顶体染色液闽明械备20170010号2017-6-5 液基细胞处理保存试剂闽明械备20170011号2017-6-5 精子染色液（活体拒染法）闽明械备20170021号2017-10-23 精子染色液（巴氏染色法）闽明械备20170022号2017-10-23 精子DNA染色液（荧光染色法）闽明械备20170023号2017-10-23精子DNA碎片染色液（SCD染色法）闽明械备20170024号2017-10-23精子核蛋白染色液（苯胺蓝染色法）闽明械备20170025号2017-10-23 宫颈上皮组织脱落细胞染色液闽明械备20170026号2017-10-23 真菌荧光染色液（一步法）闽明械备20180001号2018-2-2 样本稀释液闽明械备20180002号2019-3-4 医用阴道给药器闽明械备20180003号2019-3-4 结核分枝杆菌染色液（荧光法）闽明械备20190001号2019-5-8 组织透明液（无苯型）闽明械备20190002号2019-5-8 口腔冷敷凝胶闽明械备20190004号2019-5-8医用冷敷贴闽明械备20190005号2019-6-25生产产品列表液体敷料闽明械备20190006号2019-11-04医用清洁敷料闽明械备20190007号2019-11-04医用湿巾闽明械备20190008号2019-11-04医用棉片闽明械备20190009号2019-11-04鼻腔液体敷料闽明械备201900010号2019-11-04口腔液体敷料闽明械备201900011号2019-11-04医用皮肤护理乳膏闽明械备201900012号2019-11-22备案部门：三明市市场监督管理局备案日期：2019年11月22日。
抗酸染色Kinyoun染色法
3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻 片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象， 视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。 温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。 包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程
抗酸染色液使用说明书
抗酸染色液使用说明书货号：G1170规格：3×50ml/3×100ml/3×250ml保存：室温干燥保存，有效期12个月。
试剂盒组成：抗酸染色液A50ml/100ml/250ml抗酸染色液B50ml/100ml/250ml抗酸染色液C50ml/100ml/250ml产品说明：抗酸染色用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。
常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
普通细菌染色比较容易着色，而分支杆菌细胞壁含脂质较多，染色比较困难，必须加热才能被Carbolfuchsin solution 着色。
分枝杆菌菌体着色后，能抵抗盐酸酒精等酸性脱色剂的脱色，而其他细菌和细胞等均被脱色。
当再用碱性美蓝复染后，分支杆菌仍为红色，其他细菌与背景呈蓝色。
操作步骤：1、做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定。
2、滴加抗酸染色液A于玻片上，覆盖住样本，在酒精灯上加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时移开，必要时可续加染色剂以免干涸。
加热3-5分钟。
3、移开火，静置5分钟，待标本冷却后以自来水冲洗。
4、用抗酸染色液B脱色（大约1分钟）至无红色染液脱出为止。
完全脱色可避免产生假阳性结果。
5、自来水缓慢冲洗后，滴加抗酸染色液C复染约30秒，水洗。
6、待干后油镜观察。
预期结果：抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被染成蓝色。
注意事项：1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.本产品有一定的刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性手套操作。
结核分枝杆菌形态染色特点
结核分枝杆菌形态染色特点结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性、抗酸染色阳性的细菌，是引起人类结核病的主要病原体。
在形态和染色特点方面，结核分枝杆菌具有以下特征：1. 形态特点：结核分枝杆菌呈细长、略弯曲的杆状，有时呈Y字形或V字形。
菌体长度为0.2-0.6微米，直径为0.05-0.2微米。
菌体表面光滑，无鞭毛、荚膜和芽孢。
在固体培养基上，结核分枝杆菌可形成黄色、干燥、不透明、边缘不规则的结节状菌落。
2. 染色特点：结核分枝杆菌对多种染料具有抗酸性，因此常用抗酸染色法进行染色。
常用的抗酸染色方法有齐尔-尼尔逊（Ziehl-Neelsen）染色法和金胺O（Auramine O）染色法。
在这两种染色方法中，结核分枝杆菌均呈现红色，与其他细菌的蓝色或绿色背景形成鲜明对比。
3. 细胞壁结构：结核分枝杆菌的细胞壁较厚，主要由肽聚糖、脂肪酸、磷脂和蛋白质组成。
其中，肽聚糖层由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸交替连接而成，具有高度分支的特点。
这种分支结构使得结核分枝杆菌具有较强的抵抗外界压力的能力。
4. 生长特性：结核分枝杆菌生长缓慢，需要较长时间才能在固体培养基上形成可见的菌落。
在液体培养基中，结核分枝杆菌以球形、棒状或螺旋状的形式存在。
此外，结核分枝杆菌对营养要求较高，需要丰富的碳水化合物、氨基酸和维生素等营养物质才能正常生长。
5. 耐药性：结核分枝杆菌具有一定的耐药性，尤其是在长期使用抗结核药物治疗的情况下。
耐药性的产生与菌体内的突变、基因重组和外源性基因的引入等多种因素有关。
为了克服耐药性问题，临床治疗中常采用联合用药的方法，以提高治疗效果。
MGIT液体培养快速检测结核分枝杆菌的临床分析
MGIT液体培养快速检测结核分枝杆菌的临床分析发表时间：2018-02-01T15:24:28.033Z 来源：《航空军医》2017年27期作者：田敏[导读] 相对L-J固体培养法，MGIT液体培养法在结核分枝杆菌检测应用中具有检出率高。
（湖南省保靖县疾病控制中心 416500）摘要：目的分析探讨MGIT液体培养在快速检测结核分枝杆菌中的临床应用价值。
方法随机选取2015年7月～2017年6月我中心收集的420份治疗中的结核病患者痰标本，分别采用MGIT液体培养、L-J固体培养法检测结核分枝杆菌，并于痰直接涂片抗酸染色法进行比较。
结果420份痰标本中，涂片抗酸染色阳性检出率21.67%，MGIT液体培养法、L-J固体培养法阳性检出率分别为34.05%、27.14%，三种检测方法阳性检出率差异具有统计学意义（P<0.05）；另329份涂片抗酸染色阴性标本中，MGIT液体培养法、L-J固体培养法阳性检出率17.02%、10.03%，差异亦具有统计学意义（P<0.05）。
MGIT液体培养法平均报阳时间较L-J固体培养法明显缩短，报阳时间分布上亦显著优于固体培养法（P<0.05）；MGIT液体培养法污染率5.71%较L-J固体培养法的2.86%明显升高（P<0.05）。
结论相对L-J固体培养法，MGIT液体培养法在结核分枝杆菌检测应用中具有检出率高、报阳时间短、操作简单、经济便捷等优点。
关键词：MGIT液体培养；结核分枝杆菌；临床检测[Abstract] objective to explore the clinical application value of MGIT liquid culture in rapid detection of mycobacterium tuberculosis. Methods randomly selected from July 2015 to June 2017 I collected 420 TB patients in the treatment of sputum specimens，respectively using MGIT liquid cultivation，L - J solid method to detect mycobacterium tuberculosis，direct smear and sputum acid staining method is used in the comparison. The results of 420 sputum samples，smear positive detection rate of 21.67%，acid-fast stain MGIT liquid culture method，the positive rate L - J solid state culture method was 34.05%，27.14% respectively，three methods of testing positive detection rate differences statistically significant（P < 0.05）；In other 329 samples of negative acid staining，MGIT liquid culture method，l-j solid culture positive detection rate of 17.02% and 10.03% were also statistically significant（P < 0.05）. The MGIT liquid culture method was significantly shorter than that of l-j solid culture method，and was significantly better than the solid culture method （P < 0.05）. The pollution rate of MGIT liquid culture was 5.71% compared with 2.86% of l-j solid culture method（P < 0.05）. Conclusion compared with l-j solid culture，MGIT liquid culture method has the advantages of high detection rate，short time，simple operation and economical convenience in the detection and application of mycobacterium tuberculosis. [Key words] MGIT liquid culture；Mycobacterium tuberculosis；Clinical testing 近年来随着环境污染的加剧，以及我国流动人口在数量、范围以及频率上的增加，使得结核病的发病率呈现明显的上升趋势[1]。
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抗酸染色液说明书
【产品名称】
抗酸染色液
【包装规格】
货号：DM0035
单瓶包装规格分别为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为： 3×20ml/盒、3×100ml/盒、3×250ml/盒、3×500ml/盒。
【预期用途】
用于分枝杆菌、诺卡菌等抗酸性菌的涂片染色。
【检验原理】
本染色方法系在参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准Ziehl-Neelsen法进行改良的，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学染色，抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)法；
②荧光染料金胺O法(也称金胺罗丹明法)。
本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温，属于Kinyoun 冷染色法，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后经酸性乙醇的作用亦是不容易把它脱色，利用此特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸性乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色),也就易于鉴别。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、石碳酸复红染色液苯酚、品红
2、酸性乙醇脱色液盐酸、乙醇
3、亚甲蓝染色液亚甲蓝
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部份，于玻片正面均匀涂抹卵圆形痰膜，自然干燥，染色前加热固定。
【检验方法】
1、挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥或火焰固定；
2、滴加石碳酸复红染色液盖满玻片，染色；
3、无需加热，流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水；
4、自玻片边缘滴加酸性乙醇脱色液盖满玻片，脱色，如有必要，需流水洗去酸性乙醇脱色液，再次脱色至无红色为止；
5、流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水；
6、滴加亚甲蓝染色液，染色，流水自玻片一端轻轻冲洗，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检(一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块)。
【检验方法的局限性】
仅限用于抗酸性菌的染色。
【注意事项】
1、用油镜观察时，禁止使用香柏油，必须使用显微镜专用的镜油(Immersion oil)。
2、酸性乙醇脱色液不够用时，可自制5%盐酸乙醇溶液替代。
3、冬季室温过低时，染色时间要适当延长。
4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。